臨床化學常用分析方法

1、臨床化學常用分析技術(shù)臨床化學常用分析方法一、光譜分析（分光光度技術(shù)）利用各種化學物質(zhì)所具有的發(fā)射、吸收或散射光譜譜系的特征，來確定其性質(zhì)、結(jié)構(gòu)或含量的技術(shù),稱為光譜分析技術(shù)。具有靈敏、快速、簡便等特點，是生物化學分析中最常用的分析技術(shù)。發(fā)射光譜分析：熒光分析法和火焰光度法吸收光譜分析：可見及紫外光分光光度法、原子吸收分光光度法散射光譜分析：比濁法二、電泳分析在直流電場中，帶電粒子向帶符號相反的電極移動的現(xiàn)象稱為電泳。7醋限纖維素薄膜電泳,源膠電泳：聚丙烯酷胺晶膠電泳、瓊脂楣健膠電泳等電聚焦電泳：分離等電點不同的蛋白質(zhì);毛細管電泳三、離心技術(shù)離心技術(shù)分為制備離心技術(shù)和分析離心技術(shù)。制備離心技術(shù)主

2、要用于物質(zhì)的分離、純化，而分析離心技術(shù)主要用來分析樣品的組成。平衡離心法工可用來分離細胞、細胞膜或細胞砰片.I差速離心法：分辨率不高，常用于定性分離手段之前的粗制品提取.密度梯度離心法：具有很高的分辨率。、分析性超速離心；研究生物大分子的沉降特性和結(jié)構(gòu)。四、層析技術(shù)層析法是利用不同物質(zhì)理化性質(zhì)的差異而建立起來的技術(shù)。所有的層析系統(tǒng)都由固定相和流動相組成。凝膠層析：又稱分子篩過濾.常用葡聚糖凝膠.離子交換層析：分離離子型化合物.高效液相層析：分離能力強、測定靈敏度高可在室溫下進行口親和層析,利用待分離物質(zhì)I和它的特異性配體間具有特異的親和力，從而血分離的目的.五、電化學分析技術(shù)利用物質(zhì)的電化學性

3、質(zhì)，測定化學電池的電位、電流或電量的變化進行分析的方法稱為電化學分析法。包括電位法、電導法、電容量分析法。離子選擇電極法：離子選擇電極（ISE）能對某特定離子產(chǎn)生響應(yīng)，在一定范圍內(nèi)，其電位與溶液中特定離子活度的對數(shù)呈線性關(guān)系，因此可用離子選擇電極來定量分析某些離子的活度或濃度。例題用于分離不同分子大小蛋白質(zhì)的方法是A.瓊脂糖凝膠電泳B.凝膠層析C.密度梯度離心法D.免疫比濁法E.電化學分析法答疑編號700812140101【正確答案】B血清酶催化活性濃度和代謝物濃度檢測技術(shù)一、酶反應(yīng)動力學原理酶反應(yīng)動力學主要研究酶催化反應(yīng)的過程與速率，以及各種影響酶催化速率的因素，定量時的觀察對象是總單位時間

4、內(nèi)底物的減少或產(chǎn)物增加的量。當?shù)孜颯Km時，公式可近似為V=Vma4從理論上說只有測定的是酶Vmax反應(yīng)速度才和酶量成正比。米氏方程：v=VmaxSKe +S二、酶活性的定義及單位在實驗規(guī)定的條件下（溫度、最適pH、最適底物濃度時），在1分鐘內(nèi)催化1mol底物發(fā)生反應(yīng)所需的酶量作為1個酶活力國際單位（U。習慣用U/L來表示體液中酶活性濃度。三、測定酶活性濃度的兩大類方法（一）固定時間法（取樣法）（二）連續(xù)監(jiān)測法：酶耦聯(lián)法（指示酶、輔助酶）AExEaEiABCDCK磷酸肌酸+ADP-肌酸TPHKATPHfi鑾檐6-磷酸荀萄精+ADP6-鱗假藥罌糖脫墨酶6書酸萄糖靖ADP+6磷酸葡萄精酸（三）影響

5、酶活性測定的因素1 .底物濃度的影響：底物的種類和濃度。多種底物中，Km最小的底物往往是此酶的生理底物。2 .反應(yīng)體系的最適pH、緩沖液的種類和濃度。3 .溫度的控制：37Co四、代謝物濃度酶法測定（一）代謝物酶促終點法測定1 .一步法：最簡單的底物法測定。2 .酶促耦聯(lián)法：工具酶（指示酶、輔助酶）在臨床生化測定中，最常用的耦聯(lián)指示系統(tǒng)有兩個：一個是脫氫酶系統(tǒng)，另一個為氧化酶系統(tǒng)。脫氫酶系統(tǒng)：測定NA-或NADP在340nm處的吸光度增高或下降來計算被測物的濃度。但會受到內(nèi)源性脫氫酶及其底物如乳酸脫氫酶和乳酸/丙酮酸的干擾。（二）動力學法測定：實際操作中，測定兩個固定時間的吸光度差值，只要此期間待測物消耗V5%就可以采用標準濃度對照法計算樣本濃度，所以動力學法有時又稱為固定時間法。與終點法相比，動態(tài)法