基因工程操作的基本程序

1、基因工程操作的基本程序基因工程操作的基本程序三、基因工程操作的基本程序三、基因工程操作的基本程序2 2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、基因表達(dá)載體的構(gòu)建3 3、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞4 4、目的基因的檢測(cè)與鑒定、目的基因的檢測(cè)與鑒定1 1、目的基因的獲取、目的基因的獲?。ㄒ唬┨崛∧康幕颍ㄒ唬┨崛∧康幕蛑饕袃蓷l途徑：主要有兩條途徑：一條是從供體細(xì)胞的一條是從供體細(xì)胞的DNA中直接分離基因；中直接分離基因；另一條是人工合成基因。另一條是人工合成基因。 從基因文庫(kù)中獲取從基因文庫(kù)中獲取 基因組文庫(kù)基因組文庫(kù) cDNAcDNA文庫(kù)文庫(kù)人工合成人工合成直接分離基因最常用的方法是直接分

2、離基因最常用的方法是“鳥(niǎo)槍法鳥(niǎo)槍法” 。 直接分離基因直接分離基因鳥(niǎo)槍法的具體做法是：鳥(niǎo)槍法的具體做法是：用不同的限制酶將供體細(xì)胞中的用不同的限制酶將供體細(xì)胞中的DNADNA切成許多片段，切成許多片段，將這些片段分別載入運(yùn)載體，然后通過(guò)運(yùn)載體分別將這些片段分別載入運(yùn)載體，然后通過(guò)運(yùn)載體分別轉(zhuǎn)入不同的受體細(xì)胞，讓供體細(xì)胞所提供的轉(zhuǎn)入不同的受體細(xì)胞，讓供體細(xì)胞所提供的DNA(DNA(外外源源DNA)DNA)的所有片段分別在各個(gè)受體細(xì)胞中大量復(fù)制的所有片段分別在各個(gè)受體細(xì)胞中大量復(fù)制( (在遺傳學(xué)中叫做擴(kuò)增在遺傳學(xué)中叫做擴(kuò)增) )，從中找出含有目的基因的，從中找出含有目的基因的細(xì)胞，再用一定的方法把

3、帶有目的基因的細(xì)胞，再用一定的方法把帶有目的基因的DNADNA片段片段分離出來(lái)。分離出來(lái)。從基因文庫(kù)中獲取從基因文庫(kù)中獲取 1 1、基因文庫(kù)：、基因文庫(kù)：將含有某種生物不同基因的許多將含有某種生物不同基因的許多DNADNA片段，導(dǎo)入片段，導(dǎo)入受體菌的群體儲(chǔ)存，各個(gè)受體菌分別含有這種生受體菌的群體儲(chǔ)存，各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同的基因。物的不同的基因。2 2、基因組文庫(kù)：、基因組文庫(kù)：含有一種生物所有基因的菌體。含有一種生物所有基因的菌體。限制酶限制酶基因組基因組DNADNA基因重組基因重組轉(zhuǎn)化細(xì)菌轉(zhuǎn)化細(xì)菌體外包裝體外包裝 是指將某種生物體的是指將某種生物體的全部全部DNADNA用用適當(dāng)?shù)?/p>

4、限制酶適當(dāng)?shù)南拗泼盖懈畛梢欢ㄩL(zhǎng)度范圍切割成一定長(zhǎng)度范圍的的DNADNA片段，再片段，再與合適的載體在體外與合適的載體在體外重組重組后，導(dǎo)入受體菌的群體中儲(chǔ)存，后，導(dǎo)入受體菌的群體中儲(chǔ)存，這個(gè)群體就稱為該生物這個(gè)群體就稱為該生物基因組文庫(kù)基因組文庫(kù)。其其目的目的是分離有用的目的基因和保是分離有用的目的基因和保存某種生物的全部基因。存某種生物的全部基因。從基因文庫(kù)中獲取從基因文庫(kù)中獲取 3 3、部分基因文庫(kù)（如、部分基因文庫(kù)（如cDNAcDNA文庫(kù)）：文庫(kù)）：含有一種生物含有一種生物部分基因菌體。可由部分基因菌體?？捎蒻RNAmRNA反轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄而來(lái)。而來(lái)。 如：如：cDNAcDNA( ( 互補(bǔ)互

5、補(bǔ)DNA)DNA)：是由生物的某一特定器官或是由生物的某一特定器官或特定發(fā)育時(shí)期細(xì)胞內(nèi)的特定發(fā)育時(shí)期細(xì)胞內(nèi)的mRNAmRNA經(jīng)體外反轉(zhuǎn)錄后形成的互補(bǔ)經(jīng)體外反轉(zhuǎn)錄后形成的互補(bǔ)DNADNA片段片段，與載體連接后儲(chǔ)，與載體連接后儲(chǔ)存在一個(gè)受體菌群中，存在一個(gè)受體菌群中，這個(gè)這個(gè)受體菌群受體菌群就叫做這種生物的就叫做這種生物的cDNAcDNA文庫(kù)文庫(kù) 基因重組基因重組反轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄酶mRNAmRNAcDNAcDNA從基因文庫(kù)中獲取從基因文庫(kù)中獲取 3 3、部分基因文庫(kù)（如、部分基因文庫(kù)（如cDNAcDNA文庫(kù)）：文庫(kù)）：含有一種生物含有一種生物部分基因菌體?？捎刹糠只蚓w?？捎蒻RNAmRNA反轉(zhuǎn)錄

6、反轉(zhuǎn)錄而來(lái)。而來(lái)。4 4、構(gòu)建基因文庫(kù)的目的：、構(gòu)建基因文庫(kù)的目的： 為了在不知目的基因序列的情況下，便于獲得為了在不知目的基因序列的情況下，便于獲得所需的目的基因。所需的目的基因。5 5、 cDNAcDNA文庫(kù)文庫(kù)如何構(gòu)建？如何構(gòu)建？ 如果用某種生物發(fā)育的某個(gè)時(shí)期的如果用某種生物發(fā)育的某個(gè)時(shí)期的mRNA mRNA 反轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的多種互補(bǔ)產(chǎn)生的多種互補(bǔ)DNADNA（也叫（也叫cDNAcDNA）片段，與載體連接）片段，與載體連接后儲(chǔ)存在一個(gè)受體菌群中，那么，這個(gè)受體菌群體后儲(chǔ)存在一個(gè)受體菌群中，那么，這個(gè)受體菌群體就構(gòu)成了這種生物的就構(gòu)成了這種生物的cDNAcDNA文庫(kù)文庫(kù)。這種方法稱。這種

7、方法稱反反轉(zhuǎn)錄法轉(zhuǎn)錄法cDNAcDNA文庫(kù)的構(gòu)建文庫(kù)的構(gòu)建mRNA 反轉(zhuǎn)錄cDNA(互補(bǔ)DNA） DNA聚合酶聚合酶雙鏈DNA反轉(zhuǎn)錄法：反轉(zhuǎn)錄法：基因重組基因重組反轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄酶mRNAmRNAcDNAcDNA6 6、基因組、基因組DNADNA文庫(kù)的構(gòu)建文庫(kù)的構(gòu)建用不同的限制酶將供體細(xì)胞中的用不同的限制酶將供體細(xì)胞中的DNADNA切成許多片段，切成許多片段，將這些片段分別載入載體，然后通過(guò)載體分別轉(zhuǎn)入將這些片段分別載入載體，然后通過(guò)載體分別轉(zhuǎn)入同一菌體不同的受體細(xì)胞，讓供體細(xì)胞所提供的同一菌體不同的受體細(xì)胞，讓供體細(xì)胞所提供的DNA(DNA(外源外源DNA)DNA)的所有片段分別在各個(gè)受體細(xì)胞

8、中的所有片段分別在各個(gè)受體細(xì)胞中大量復(fù)制。大量復(fù)制?；蚪M基因組DNADNA文庫(kù)文庫(kù)cDNAcDNA文庫(kù)文庫(kù)7 7、基因組、基因組DNADNA文庫(kù)與文庫(kù)與cDNAcDNA文庫(kù)的比較文庫(kù)的比較基因組基因組DNADNA文庫(kù)與文庫(kù)與cDNAcDNA文庫(kù)的比較文庫(kù)的比較文庫(kù)類型文庫(kù)類型cDNAcDNA文庫(kù)文庫(kù)基因組文庫(kù)基因組文庫(kù)文庫(kù)大小文庫(kù)大小小小大大基因中啟動(dòng)子基因中啟動(dòng)子無(wú)無(wú)有有基因中內(nèi)含子基因中內(nèi)含子無(wú)無(wú)有有基因多少基因多少某種生物的部分某種生物的部分基因基因某種生物的全部某種生物的全部基因基因物種之間的物種之間的基因交流基因交流可以可以部分基因可以部分基因可以說(shuō)明說(shuō)明基因文庫(kù)的組建過(guò)程就包含基

9、因工程基因文庫(kù)的組建過(guò)程就包含基因工程的基本操作步驟。從基因文庫(kù)中獲取的基本操作步驟。從基因文庫(kù)中獲取目的基因的目的基因的優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)是是操作簡(jiǎn)便操作簡(jiǎn)便, ,缺點(diǎn)缺點(diǎn)是是工工作量大作量大, ,具有一定的盲目性具有一定的盲目性人工合成基因人工合成基因 在獲取真核細(xì)胞中的目的基因時(shí)，一般是用人工合成在獲取真核細(xì)胞中的目的基因時(shí)，一般是用人工合成基因的方法。目前人工合成基因的方法主要有兩條途基因的方法。目前人工合成基因的方法主要有兩條途徑：徑：1.1.是反轉(zhuǎn)錄法。是反轉(zhuǎn)錄法。2.2.是根據(jù)已知的蛋白質(zhì)的氨基酸序列合成是根據(jù)已知的蛋白質(zhì)的氨基酸序列合成DNADNA（基因）（基因）. . （1 1）、反轉(zhuǎn)

10、錄法）、反轉(zhuǎn)錄法以目的基因轉(zhuǎn)錄成的以目的基因轉(zhuǎn)錄成的 為模板，為模板，在在 作用下，反轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)的作用下，反轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)的單鏈單鏈DNADNA，然后在酶的作用下合成雙鏈，然后在酶的作用下合成雙鏈DNADNA，從而獲得所需要的基因。從而獲得所需要的基因。反轉(zhuǎn)錄法的優(yōu)點(diǎn)是針對(duì)性強(qiáng)。缺點(diǎn)是操作復(fù)雜，信使反轉(zhuǎn)錄法的優(yōu)點(diǎn)是針對(duì)性強(qiáng)。缺點(diǎn)是操作復(fù)雜，信使RNARNA穩(wěn)定性差，生存時(shí)間短。穩(wěn)定性差，生存時(shí)間短。 信使信使RNA反轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄酶（2 2）根據(jù)已知的蛋白質(zhì)的氨基酸序列合成）根據(jù)已知的蛋白質(zhì)的氨基酸序列合成DNADNA（基因）（基因）根據(jù)已知的蛋白質(zhì)的根據(jù)已知的蛋白質(zhì)的 ，推測(cè)出相應(yīng)的，推測(cè)出相應(yīng)的

11、信使信使RNARNA序列，然后按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，推測(cè)出它序列，然后按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，推測(cè)出它的結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列，再通過(guò)化學(xué)的方法，的結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列，再通過(guò)化學(xué)的方法，以單核苷酸為原料合成目的基因。以單核苷酸為原料合成目的基因。 氨基酸序列氨基酸序列1 1、構(gòu)建基因組、構(gòu)建基因組DNADNA文庫(kù)時(shí)，首先應(yīng)分離細(xì)胞的文庫(kù)時(shí)，首先應(yīng)分離細(xì)胞的A A、染色體、染色體DNADNA B B、線粒體、線粒體DNADNAC C、總、總mRNAmRNA D D、tRNAtRNA 2 2、目的基因可從基因文庫(kù)中獲得，下列有關(guān)基因文庫(kù)、目的基因可從基因文庫(kù)中獲得，下列有關(guān)基因文庫(kù)的描述正確的是的描

12、述正確的是A A、某生物的全套基因就是一個(gè)基因文庫(kù)、某生物的全套基因就是一個(gè)基因文庫(kù)B B、將含有某種生物不同的許多、將含有某種生物不同的許多DNADNA片段，導(dǎo)入某個(gè)生片段，導(dǎo)入某個(gè)生物物 體內(nèi)，則這個(gè)生物就是一個(gè)基因文庫(kù)體內(nèi)，則這個(gè)生物就是一個(gè)基因文庫(kù)C C、含有一種生物所有基因的基因文庫(kù)叫做基因組文庫(kù)、含有一種生物所有基因的基因文庫(kù)叫做基因組文庫(kù)D D、含有一種生物的一部分基因的基因文庫(kù)叫、含有一種生物的一部分基因的基因文庫(kù)叫cDNAcDNA文庫(kù)文庫(kù)AC利用利用PCRPCR擴(kuò)增目的基因擴(kuò)增目的基因利用利用PCRPCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因技術(shù)擴(kuò)增目的基因 PCRPCR：是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定

13、是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNADNA片段片段的核酸合成的核酸合成技術(shù)。技術(shù)。原理：原理：DNADNA復(fù)制復(fù)制原料：原料：模板模板DNADNA；RNARNA引物；脫氧核苷酸（引物；脫氧核苷酸（ATPATP、CTPCTP、TTPTTPGTPGTP）；熱穩(wěn)定）；熱穩(wěn)定DNADNA聚合酶（聚合酶（TaqTaq酶）；離子酶）；離子方法：方法：DNADNA受熱變性解旋為單鏈、冷卻后引物與單鏈相受熱變性解旋為單鏈、冷卻后引物與單鏈相應(yīng)互補(bǔ)序列結(jié)合、應(yīng)互補(bǔ)序列結(jié)合、DNADNA聚合酶作用下延伸合成互補(bǔ)鏈。聚合酶作用下延伸合成互補(bǔ)鏈。特點(diǎn)：特點(diǎn)：指數(shù)形式擴(kuò)增指數(shù)形式擴(kuò)增加熱（加熱（90909595）降溫（降溫（

14、55556060）n 過(guò)程變性、退火、延伸三步曲變性：變性：加熱至加熱至90909595雙鏈雙鏈DNADNA解鏈成為單鏈解鏈成為單鏈DNADNA退火：退火：冷卻至冷卻至55556060部分引物與模板的單鏈部分引物與模板的單鏈DNADNA的特定互補(bǔ)部位相配的特定互補(bǔ)部位相配對(duì)和結(jié)合對(duì)和結(jié)合延伸：延伸：加熱至加熱至70707575以目的基因?yàn)槟０?，合以目的基因?yàn)槟０澹铣苫パa(bǔ)的新成互補(bǔ)的新DNADNA鏈鏈變性變性退火退火延伸延伸PCR(PCR(多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)) )1 1、DNADNA（或（或目的基因目的基因 ）經(jīng)加熱至）經(jīng)加熱至90909595后，使后，使DNADNA雙鏈雙鏈或或目的

15、基因目的基因的雙鏈的雙鏈DNADNA解離，使之成為單鏈，以便它解離，使之成為單鏈，以便它與與引物引物結(jié)合，并作為模板。結(jié)合，并作為模板。 2 2、溫度降至、溫度降至5555左右，引物與模板左右，引物與模板DNADNA單鏈的互補(bǔ)序單鏈的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合；列配對(duì)結(jié)合； 3 3、DNADNA模板引物在模板引物在TaqDNATaqDNA聚合酶聚合酶的作用下，的作用下，以以dNTPdNTP為反應(yīng)原料，為反應(yīng)原料，DNADNA（或目的基因（或目的基因 ）為模板，按）為模板，按堿基配對(duì)與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模板堿基配對(duì)與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模板DNA DNA 鏈互補(bǔ)的子鏈。鏈互補(bǔ)的子鏈。

16、過(guò)程過(guò)程重復(fù)上述過(guò)程，就可獲得更多的重復(fù)上述過(guò)程，就可獲得更多的“子鏈子鏈”，而且新鏈又可，而且新鏈又可成為下次的模板。成為下次的模板。 DNADNA（或目的基因（或目的基因 ）指數(shù)形式擴(kuò)增）指數(shù)形式擴(kuò)增PCRPCR技術(shù)技術(shù)DNADNA復(fù)制復(fù)制相相同同點(diǎn)點(diǎn)原理原理原料原料條件條件不不同同點(diǎn)點(diǎn)解旋解旋方式方式場(chǎng)所場(chǎng)所酶酶結(jié)果結(jié)果DNADNA復(fù)制復(fù)制( (堿基互補(bǔ)配對(duì)堿基互補(bǔ)配對(duì)) )四種游離的脫氧核苷酸四種游離的脫氧核苷酸模板、模板、ATPATP、酶、原料、引物、酶、原料、引物DNADNA在在高溫高溫下變性解旋下變性解旋解旋酶解旋酶催化催化體外體外復(fù)制復(fù)制主要主要在細(xì)胞核內(nèi)在細(xì)胞核內(nèi)熱穩(wěn)定的熱穩(wěn)

17、定的DNADNA聚合酶聚合酶(Taq(Taq酶酶) )細(xì)胞內(nèi)含有的細(xì)胞內(nèi)含有的DNADNA聚合酶聚合酶在在短時(shí)間短時(shí)間內(nèi)形成內(nèi)形成大量大量的的DNADNA片段片段形成形成整個(gè)整個(gè)DNADNA分子分子PCRPCR擴(kuò)增技術(shù)與擴(kuò)增技術(shù)與DNADNA復(fù)制的比較復(fù)制的比較1 1、在遺傳工程中，若有一個(gè)控制有利性狀的、在遺傳工程中，若有一個(gè)控制有利性狀的DNADNA分分子片段為子片段為ATGTGATGTGTACACTACAC，要使其數(shù)量增多，可用，要使其數(shù)量增多，可用PCRPCR技術(shù)進(jìn)行人工復(fù)制，復(fù)制時(shí)應(yīng)給予的條件是技術(shù)進(jìn)行人工復(fù)制，復(fù)制時(shí)應(yīng)給予的條件是 雙鏈雙鏈DNADNA分子為模板分子為模板 ATGT

18、GATGTG或或TACACTACAC模板鏈模板鏈 四四種脫氧核苷酸種脫氧核苷酸 四種核苷酸四種核苷酸 DNADNA聚合酶聚合酶 熱穩(wěn)定熱穩(wěn)定DNADNA聚合酶聚合酶引物引物 溫度變化溫度變化 恒溫恒溫A A B BC C D DD2 2、在基因工程中，把選出的目的基因（共、在基因工程中，把選出的目的基因（共10001000個(gè)脫氧個(gè)脫氧核苷酸對(duì)，其中腺嘌呤脫氧核苷酸是核苷酸對(duì)，其中腺嘌呤脫氧核苷酸是460460個(gè)）放入個(gè)）放入DNADNA擴(kuò)擴(kuò)增儀中擴(kuò)增增儀中擴(kuò)增4 4代，那么，在擴(kuò)增儀中應(yīng)放入胞嘧啶脫氧代，那么，在擴(kuò)增儀中應(yīng)放入胞嘧啶脫氧核苷酸的個(gè)數(shù)是核苷酸的個(gè)數(shù)是A.540A.540個(gè)個(gè) B.

19、8100B.8100個(gè)個(gè) C.17280C.17280個(gè)個(gè)D.7560D.7560個(gè)個(gè)B1 1、在已知序列信息的情況下，獲取目的基因的最、在已知序列信息的情況下，獲取目的基因的最方便方法是方便方法是A A、化學(xué)合成法、化學(xué)合成法 B B、基因組文庫(kù)法、基因組文庫(kù)法C C、cDNAcDNA文庫(kù)法文庫(kù)法 D D、聚合酶鏈反應(yīng)、聚合酶鏈反應(yīng)2 2、下列獲取目的基因的方法中需要模板鏈的是、下列獲取目的基因的方法中需要模板鏈的是從基因文庫(kù)中獲取目的基因從基因文庫(kù)中獲取目的基因 利用利用PCRPCR技術(shù)擴(kuò)技術(shù)擴(kuò)增目的基因增目的基因 反轉(zhuǎn)錄法反轉(zhuǎn)錄法 通過(guò)通過(guò)DNADNA合成儀利用化合成儀利用化學(xué)方法人工合

20、成學(xué)方法人工合成A A B B C C D DAD3 3、目的基因主要是指、目的基因主要是指_的結(jié)構(gòu)基因。的結(jié)構(gòu)基因。獲得目的基因的常見(jiàn)方法有三種：（獲得目的基因的常見(jiàn)方法有三種：（1 1）從基因文庫(kù)中）從基因文庫(kù)中獲取目的基因，根據(jù)基因的獲取目的基因，根據(jù)基因的_序列，基因在序列，基因在_上的位置，基因的上的位置，基因的_產(chǎn)物產(chǎn)物mRNAmRNA，基因，基因的的_產(chǎn)物蛋白質(zhì)等獲取目的基因。（產(chǎn)物蛋白質(zhì)等獲取目的基因。（2 2）利用）利用PCRPCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，該技術(shù)是一項(xiàng)在技術(shù)擴(kuò)增目的基因，該技術(shù)是一項(xiàng)在_完成的完成的核酸合成技術(shù)，前提條件是有一段已知目的基因的核酸合成技術(shù)，前提條件是

21、有一段已知目的基因的_序列，以便于合成序列，以便于合成_。（。（3 3）如果基）如果基因較小且核苷酸序列已知，可以通過(guò)因較小且核苷酸序列已知，可以通過(guò)_方方法。法。 編碼蛋白質(zhì)編碼蛋白質(zhì)核苷酸核苷酸染色體染色體轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄表達(dá)表達(dá)體外體外核苷酸核苷酸引物引物人工合成人工合成啟動(dòng)子：?jiǎn)?dòng)子：位于基因的首端的一段特殊的位于基因的首端的一段特殊的DNADNA片斷，它片斷，它是是RNARNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，有了它才能聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動(dòng)基驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出因轉(zhuǎn)錄出mRNAmRNA，最終獲得蛋白質(zhì)，最終獲得蛋白質(zhì)終止子：終止子：位于基因的尾端的一段特殊的位于基因的尾端的一段特殊的DNA

22、DNA片斷，片斷，能能終止終止mRNAmRNA的轉(zhuǎn)錄的轉(zhuǎn)錄標(biāo)記基因標(biāo)記基因的作用是的作用是為了為了鑒別鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將有目的基因的細(xì)胞篩選出來(lái)基因，從而將有目的基因的細(xì)胞篩選出來(lái)（二）（二）基因表達(dá)載體的構(gòu)建基因表達(dá)載體的構(gòu)建2 2目的：目的：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在；可以遺傳給使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在；可以遺傳給下一代；使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。下一代；使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。3 .3 .基因表達(dá)載體的組成基因表達(dá)載體的組成 目的基因目的基因啟動(dòng)子啟動(dòng)子終止子終止子標(biāo)記基因標(biāo)記基因1 1地位：是基因工程的核心。地位：是基因工程

23、的核心。啟動(dòng)子：?jiǎn)?dòng)子：位于基因的首端的一段特殊的位于基因的首端的一段特殊的DNADNA片斷，它片斷，它是是RNARNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，有了它才能聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動(dòng)基驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出因轉(zhuǎn)錄出mRNAmRNA，最終獲得蛋白質(zhì)，最終獲得蛋白質(zhì)終止子：終止子：位于基因的尾端的一段特殊的位于基因的尾端的一段特殊的DNADNA片斷，片斷，能能終止終止mRNAmRNA的轉(zhuǎn)錄的轉(zhuǎn)錄標(biāo)記基因標(biāo)記基因的作用是的作用是為了為了鑒別鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將有目的基因的細(xì)胞篩選出來(lái)基因，從而將有目的基因的細(xì)胞篩選出來(lái)用用同種的限制酶同種的限制酶處理目的基因

24、和載體，獲得相同的處理目的基因和載體，獲得相同的黏性末端或平末端。黏性末端或平末端。在適量的在適量的 作用下，載體的黏性末端作用下，載體的黏性末端或平末端或平末端與目的基因與目的基因DNADNA片段的黏性末端就會(huì)因堿基片段的黏性末端就會(huì)因堿基互補(bǔ)配對(duì)而互補(bǔ)配對(duì)而ATP（結(jié)合，形成了一個(gè)重組結(jié)合，形成了一個(gè)重組DNADNA分子。分子。 DNA連接酶連接酶5 5、條件：、條件：同種限制酶、同種限制酶、DNADNA連接酶、目的基因、啟動(dòng)子、連接酶、目的基因、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因）終止子、標(biāo)記基因） 此處有三種連接形式？此處有三種連接形式？4.4.過(guò)程：將過(guò)程：將 結(jié)合的過(guò)程，主要是結(jié)合的過(guò)程，主

25、要是不同來(lái)源的不同來(lái)源的DNADNA重新組合重新組合( (也叫重組質(zhì)粒也叫重組質(zhì)粒) )的過(guò)程。的過(guò)程。目的基因與載體目的基因與載體目的基因與運(yùn)載體結(jié)合（以質(zhì)粒為運(yùn)載體）目的基因與運(yùn)載體結(jié)合（以質(zhì)粒為運(yùn)載體）下表中列出了幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，下表中列出了幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，圖圖l l、圖、圖2 2中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)。請(qǐng)回答中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：下列問(wèn)題： （1 1）一個(gè)圖）一個(gè)圖1 1所示的質(zhì)粒分子經(jīng)所示的質(zhì)粒分子經(jīng)SmaSma 切割前后，分別切割前后，分別含有含有 個(gè)游離的磷酸基團(tuán)。個(gè)游離的磷酸基團(tuán)。（2 2）若對(duì)圖中質(zhì)粒進(jìn)行改造，

26、插入的）若對(duì)圖中質(zhì)粒進(jìn)行改造，插入的SmaSma酶切位點(diǎn)越酶切位點(diǎn)越多，質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性越多，質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性越 。（3 3）用圖中的質(zhì)粒和外源）用圖中的質(zhì)粒和外源DNADNA構(gòu)建重組質(zhì)粒，不能使用構(gòu)建重組質(zhì)粒，不能使用SmaSma 切割，原因是切割，原因是 。（4 4）與只使用）與只使用EcoREcoR I I相比較，使用相比較，使用BamHBamH 和和Hind Hind 兩種限制酶同時(shí)處理質(zhì)粒、外源兩種限制酶同時(shí)處理質(zhì)粒、外源DNADNA的優(yōu)點(diǎn)在于可以防的優(yōu)點(diǎn)在于可以防止止 。（5 5）為了獲取重組質(zhì)粒，將切割后的質(zhì)粒與目的基因）為了獲取重組質(zhì)粒，將切割后的質(zhì)粒與目的基因片段混合，并加入片段

27、混合，并加入 酶。酶。（6 6）重組質(zhì)粒中抗生素抗性基因的作用是為了）重組質(zhì)粒中抗生素抗性基因的作用是為了 。載體載體與與表達(dá)載體表達(dá)載體的區(qū)別：二者都有標(biāo)記基因和復(fù)制的區(qū)別：二者都有標(biāo)記基因和復(fù)制原點(diǎn)兩部分原點(diǎn)兩部分DNADNA片段。表達(dá)載體在載體基礎(chǔ)上增加了片段。表達(dá)載體在載體基礎(chǔ)上增加了目的基因、啟動(dòng)子、終止子目的基因、啟動(dòng)子、終止子三部分結(jié)構(gòu)三部分結(jié)構(gòu)用到的工具酶：用到的工具酶：既用到限制酶切割載體，又用到既用到限制酶切割載體，又用到DNADNA連接酶將目的基因和載體拼接，兩種酶作用的化連接酶將目的基因和載體拼接，兩種酶作用的化學(xué)鍵都是磷酸二酯鍵學(xué)鍵都是磷酸二酯鍵啟動(dòng)子、終止子啟動(dòng)子、

28、終止子對(duì)于目的基因表達(dá)必不可少對(duì)于目的基因表達(dá)必不可少目的基因不能單獨(dú)進(jìn)入受體細(xì)胞，目的基因不能單獨(dú)進(jìn)入受體細(xì)胞，必需以表達(dá)載體必需以表達(dá)載體的方式攜帶進(jìn)去。的方式攜帶進(jìn)去。注意注意（三）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞（三）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 1、轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化：目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程。穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程。2、基因工程中常用的、基因工程中常用的受體細(xì)胞受體細(xì)胞有：有：大腸桿菌、枯草桿菌、農(nóng)桿菌、酵母菌和動(dòng)大腸桿菌、枯草桿菌、農(nóng)桿菌、酵母菌和動(dòng)植物細(xì)胞植物細(xì)胞1、將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞（1）農(nóng)桿菌）農(nóng)桿菌

29、轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)化法特點(diǎn)特點(diǎn):能感染能感染雙子葉植物雙子葉植物和和祼子植物祼子植物,對(duì)多數(shù)單子葉植物無(wú)感染能力對(duì)多數(shù)單子葉植物無(wú)感染能力Ti質(zhì)粒質(zhì)粒的的TDNA可轉(zhuǎn)移至受可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞并整合到其染色體上體細(xì)胞并整合到其染色體上轉(zhuǎn)化過(guò)程轉(zhuǎn)化過(guò)程:TiTi是在根瘤土壤桿菌細(xì)胞中存在的是在根瘤土壤桿菌細(xì)胞中存在的一種染色體外自主復(fù)制的環(huán)形雙鏈一種染色體外自主復(fù)制的環(huán)形雙鏈DNADNA分子。分子。Ti質(zhì)粒質(zhì)粒目的基因目的基因構(gòu)建構(gòu)建表表達(dá)達(dá)載載體體導(dǎo)入導(dǎo)入植植物物細(xì)細(xì)胞胞插入插入植物細(xì)胞植物細(xì)胞染色染色DNA表達(dá)表達(dá)新新性性狀狀轉(zhuǎn)入轉(zhuǎn)入農(nóng)農(nóng)桿桿菌菌？（2）基因槍法）基因槍法 基因槍法又稱微彈轟擊法，是利用壓

30、縮氣體產(chǎn)生的基因槍法又稱微彈轟擊法，是利用壓縮氣體產(chǎn)生的動(dòng)力，將包裹在金屬顆粒表面的表達(dá)載體動(dòng)力，將包裹在金屬顆粒表面的表達(dá)載體DNADNA打入受體打入受體細(xì)胞中，使目的基因與其整合并表達(dá)的方法。細(xì)胞中，使目的基因與其整合并表達(dá)的方法。（3）花粉通道法）花粉通道法 植物花粉在柱頭上萌發(fā)后，花粉管要穿過(guò)花柱直通胚囊。植物花粉在柱頭上萌發(fā)后，花粉管要穿過(guò)花柱直通胚囊。花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管還未愈合花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管還未愈合前，剪去柱頭，然后，滴加前，剪去柱頭，然后，滴加DNA（含目的基因），使目的基（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道進(jìn)入受體

31、細(xì)胞。因借助花粉管通道進(jìn)入受體細(xì)胞。2、將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞方法方法:顯微注射技術(shù)顯微注射技術(shù)操作程序操作程序:提純含目的基提純含目的基因表達(dá)載體因表達(dá)載體取受精卵取受精卵顯微注射顯微注射移植到子宮或移植到子宮或輸卵管輸卵管受精卵發(fā)育受精卵發(fā)育新性狀動(dòng)物新性狀動(dòng)物超級(jí)小鼠超級(jí)小鼠大鼠生長(zhǎng)大鼠生長(zhǎng)激素基因激素基因小白鼠的受精卵小白鼠的受精卵是利用管尖極細(xì)的玻璃微量注射是利用管尖極細(xì)的玻璃微量注射針，將外源基因片段直接注射到針，將外源基因片段直接注射到原核期胚或培養(yǎng)的細(xì)胞原核期胚或培養(yǎng)的細(xì)胞3、將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞常用法常用法：Ca2+處理處理常

32、用菌常用菌：大腸桿菌：大腸桿菌微生物作受體細(xì)胞原因：微生物作受體細(xì)胞原因：繁殖快繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)少、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)少過(guò)程：過(guò)程：Ca2+處理處理大腸桿菌大腸桿菌感受態(tài)感受態(tài)細(xì)胞細(xì)胞表達(dá)載體表達(dá)載體與感受態(tài)與感受態(tài)細(xì)胞混合細(xì)胞混合感受態(tài)細(xì)感受態(tài)細(xì)胞吸收胞吸收DNA將目的基因?qū)雽⒛康幕驅(qū)胫参锛?xì)胞植物細(xì)胞將目的基因?qū)雽⒛康幕驅(qū)雱?dòng)物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞將目的基因?qū)雽⒛康幕驅(qū)胛⑸锛?xì)胞微生物細(xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法基因槍法基因槍法花粉管通道法花粉管通道法顯微注射法顯微注射法感受態(tài)細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞1、基因工程中科學(xué)家常用細(xì)菌、酵母菌等微生物作、基因工程中科學(xué)家常用細(xì)菌

33、、酵母菌等微生物作為受體細(xì)胞，原因是為受體細(xì)胞，原因是 A結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、操作方便結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、操作方便 B繁殖速度快繁殖速度快 C遺傳物質(zhì)含量少、簡(jiǎn)單遺傳物質(zhì)含量少、簡(jiǎn)單 D性狀穩(wěn)定、變異少性狀穩(wěn)定、變異少2、基因工程常用的受體細(xì)胞有、基因工程常用的受體細(xì)胞有 大腸桿菌大腸桿菌 枯草桿菌枯草桿菌 支原體支原體 動(dòng)植物細(xì)胞動(dòng)植物細(xì)胞A B C DBD3、基因工程是在、基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)施工的，在分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)施工的，在基因操作的基本步驟中，不進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)的步驟是基因操作的基本步驟中，不進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)的步驟是A.人工合成基因人工合成基因 B.目的基因與運(yùn)載體結(jié)合目的基因與運(yùn)載體

34、結(jié)合C.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 D.目的基因的檢測(cè)和表達(dá)目的基因的檢測(cè)和表達(dá)C4. 采用基因工程的方法培育抗蟲(chóng)棉，下列導(dǎo)入目的基因采用基因工程的方法培育抗蟲(chóng)棉，下列導(dǎo)入目的基因的做法正確的是的做法正確的是將毒素蛋白質(zhì)注射到棉受精卵中將毒素蛋白質(zhì)注射到棉受精卵中 將編碼毒素蛋白將編碼毒素蛋白的的DNA序列注射到棉受精卵中序列注射到棉受精卵中 將編碼毒素蛋白的將編碼毒素蛋白的DNA序列與細(xì)菌質(zhì)粒重組，注射到棉的子房并進(jìn)入受精序列與細(xì)菌質(zhì)粒重組，注射到棉的子房并進(jìn)入受精卵中卵中 將編碼毒素蛋白的將編碼毒素蛋白的DNA序列與質(zhì)粒重組，導(dǎo)入序列與質(zhì)粒重組，導(dǎo)入細(xì)菌感染棉的體細(xì)胞，再

35、進(jìn)行組織培養(yǎng)細(xì)菌感染棉的體細(xì)胞，再進(jìn)行組織培養(yǎng)A B C DC5. 下列屬于基因工程中導(dǎo)入目的基因方法的是下列屬于基因工程中導(dǎo)入目的基因方法的是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 基因槍法基因槍法 花粉管道法花粉管道法 顯微注顯微注射法射法 胚胎移植胚胎移植 DNA分子雜交法分子雜交法A BC DC目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞中，目的基因依據(jù)受體細(xì)胞的種類目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞中，目的基因依據(jù)受體細(xì)胞的種類不同而存在的位置不同。不同而存在的位置不同。(1)(1)原核細(xì)胞原核細(xì)胞如果受體細(xì)胞是原核細(xì)胞，則目的基因與質(zhì)粒相連接在一起。如果受體細(xì)胞是原核細(xì)胞，則目的基因與質(zhì)粒相連接在一起。目的基因隨著原核細(xì)胞的分裂而隨

36、機(jī)分配。目的基因隨著原核細(xì)胞的分裂而隨機(jī)分配。(2)(2)真核細(xì)胞真核細(xì)胞如果受體細(xì)胞是真核細(xì)胞，則目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞中后存如果受體細(xì)胞是真核細(xì)胞，則目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞中后存在著兩種情況在著兩種情況: :一是僅存在于細(xì)胞質(zhì)中。此時(shí)目的基因隨著一是僅存在于細(xì)胞質(zhì)中。此時(shí)目的基因隨著細(xì)胞分裂時(shí)，遵循細(xì)胞質(zhì)遺傳，即隨機(jī)分配。細(xì)胞分裂時(shí)，遵循細(xì)胞質(zhì)遺傳，即隨機(jī)分配。二是目的基因進(jìn)入細(xì)胞核中。此時(shí)目的基因可以與細(xì)胞核中染二是目的基因進(jìn)入細(xì)胞核中。此時(shí)目的基因可以與細(xì)胞核中染色質(zhì)上色質(zhì)上DNADNA相連接，因此隨著細(xì)胞分裂時(shí)，遵循細(xì)胞核遺傳相連接，因此隨著細(xì)胞分裂時(shí)，遵循細(xì)胞核遺傳( (基基因的分離規(guī)

37、律和自由組合規(guī)律因的分離規(guī)律和自由組合規(guī)律) )。 ( (四四) )目的基因的檢測(cè)和鑒定目的基因的檢測(cè)和鑒定1 1、檢測(cè)目的：是否插入、轉(zhuǎn)錄、翻譯、檢測(cè)目的：是否插入、轉(zhuǎn)錄、翻譯（一）、檢測(cè)（一）、檢測(cè)1 1、檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的、檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNADNA上是否插入了目的基因上是否插入了目的基因 ( (關(guān)鍵步驟關(guān)鍵步驟) )（1 1）方法方法: :DNADNA分子雜交分子雜交DNADNA分子雜交示意圖分子雜交示意圖 采用一定的技術(shù)手段，將兩種生物的采用一定的技術(shù)手段，將兩種生物的DNADNA分子的分子的單單鏈鏈放在一起，如果這兩個(gè)單鏈放在一起，如果這兩個(gè)單鏈具有互補(bǔ)的堿基序列具有互

38、補(bǔ)的堿基序列，那么，互補(bǔ)的堿基序列就會(huì)結(jié)合在一起，形成那么，互補(bǔ)的堿基序列就會(huì)結(jié)合在一起，形成雜合雙雜合雙鏈區(qū)鏈區(qū)；在沒(méi)有互補(bǔ)堿基序列的部位，仍然是兩條游離；在沒(méi)有互補(bǔ)堿基序列的部位，仍然是兩條游離的單鏈。的單鏈。 （一）、檢測(cè)（一）、檢測(cè)、首先取出轉(zhuǎn)基因生物的基因組、首先取出轉(zhuǎn)基因生物的基因組DNA。、用含目的基因的、用含目的基因的DNA片段用放射性同位素等片段用放射性同位素等作標(biāo)記作標(biāo)記,以此做探針。以此做探針。、使探針和轉(zhuǎn)基因生物的基因組雜交、使探針和轉(zhuǎn)基因生物的基因組雜交,若顯示出若顯示出雜交帶雜交帶,表明染色體已插入染色體表明染色體已插入染色體DNA中。中。（2 2）過(guò)程）過(guò)程: :

39、歸納步驟-珠蛋白是動(dòng)物血紅蛋白的重要組成成分。當(dāng)它的成珠蛋白是動(dòng)物血紅蛋白的重要組成成分。當(dāng)它的成分異常時(shí)，動(dòng)物有可能患某種疾病，如鐮刀形細(xì)胞貧血分異常時(shí)，動(dòng)物有可能患某種疾病，如鐮刀形細(xì)胞貧血癥。假如讓你用基因工程的方法，使大腸桿菌生產(chǎn)出鼠癥。假如讓你用基因工程的方法，使大腸桿菌生產(chǎn)出鼠的的-珠蛋白，想一想，應(yīng)如何進(jìn)行設(shè)計(jì)？珠蛋白，想一想，應(yīng)如何進(jìn)行設(shè)計(jì)？提示：基本操作如下：提示：基本操作如下：（1 1）從小鼠中克隆出）從小鼠中克隆出-珠蛋白基因的編碼序列珠蛋白基因的編碼序列（cDNAcDNA）。）。（2 2）將）將cDNAcDNA前接上在大腸桿菌中可以適用的啟動(dòng)子，前接上在大腸桿菌中可以適

40、用的啟動(dòng)子，另外加上抗四環(huán)素的基因，構(gòu)建成一個(gè)表達(dá)載體。另外加上抗四環(huán)素的基因，構(gòu)建成一個(gè)表達(dá)載體。（3 3）將表達(dá)載體導(dǎo)入無(wú)四環(huán)素抗性的大腸桿菌中，）將表達(dá)載體導(dǎo)入無(wú)四環(huán)素抗性的大腸桿菌中，然后在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)大腸桿菌。如果然后在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)大腸桿菌。如果表達(dá)載體未進(jìn)入大腸桿菌中，大腸桿菌會(huì)因不含有表達(dá)載體未進(jìn)入大腸桿菌中，大腸桿菌會(huì)因不含有抗四環(huán)素基因而死掉；如果培養(yǎng)基上長(zhǎng)出大腸桿菌抗四環(huán)素基因而死掉；如果培養(yǎng)基上長(zhǎng)出大腸桿菌菌落，則表明菌落，則表明-珠蛋白基因已進(jìn)入其中。珠蛋白基因已進(jìn)入其中。（4 4）培養(yǎng)進(jìn)入了）培養(yǎng)進(jìn)入了-珠蛋白基因的大腸桿菌，收集珠蛋白基因的大

41、腸桿菌，收集菌體，破碎后從中提取菌體，破碎后從中提取-珠蛋白。珠蛋白。6 6）（）（多選）人們利用基因工程的方法，用大腸桿菌生產(chǎn)多選）人們利用基因工程的方法，用大腸桿菌生產(chǎn)人類胰島素，這一過(guò)程涉及到（人類胰島素，這一過(guò)程涉及到（ ）A.用適當(dāng)?shù)拿笇?duì)胰島素基因與運(yùn)載體進(jìn)行切割并連接用適當(dāng)?shù)拿笇?duì)胰島素基因與運(yùn)載體進(jìn)行切割并連接B.把重組后的把重組后的DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)菌內(nèi)進(jìn)行擴(kuò)增分子導(dǎo)入受體細(xì)菌內(nèi)進(jìn)行擴(kuò)增C.檢測(cè)重組檢測(cè)重組DNA分子是否導(dǎo)入受體細(xì)菌內(nèi)并表達(dá)出性狀分子是否導(dǎo)入受體細(xì)菌內(nèi)并表達(dá)出性狀D.篩選出能產(chǎn)生胰島素的篩選出能產(chǎn)生胰島素的“工程菌工程菌” 7 7）下列哪項(xiàng)不屬于基因工程技術(shù)的步

42、驟下列哪項(xiàng)不屬于基因工程技術(shù)的步驟 （ ） A基因轉(zhuǎn)移基因轉(zhuǎn)移 B基因擴(kuò)增基因擴(kuò)增C基因檢測(cè)基因檢測(cè) D基因表達(dá)基因表達(dá) （二）、鑒定（個(gè)體生物學(xué)水平）（二）、鑒定（個(gè)體生物學(xué)水平）2 2、檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了、檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNAmRNA3 3、檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)、檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等方法方法: :分分 子子 雜雜 交交方法方法: :抗原抗體雜交抗原抗體雜交過(guò)程過(guò)程: : 用上述探針和轉(zhuǎn)基因生物的用上述探針和轉(zhuǎn)基因生物的mRNAmRNA雜交雜交, ,若出若出現(xiàn)雜交帶現(xiàn)雜交帶, ,表明目的基因轉(zhuǎn)錄出了

43、表明目的基因轉(zhuǎn)錄出了mRNAmRNA多細(xì)胞生物的檢測(cè)，將每個(gè)受體細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)并誘導(dǎo)多細(xì)胞生物的檢測(cè)，將每個(gè)受體細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)并誘導(dǎo)發(fā)育成完整個(gè)體，檢測(cè)這些個(gè)體是否攝入目的基因，攝發(fā)育成完整個(gè)體，檢測(cè)這些個(gè)體是否攝入目的基因，攝入的基因是否表達(dá)（是否表現(xiàn)出相應(yīng)的性狀）。淘汰無(wú)入的基因是否表達(dá)（是否表現(xiàn)出相應(yīng)的性狀）。淘汰無(wú)變化的個(gè)體，保留有相應(yīng)變化的個(gè)體進(jìn)一步培養(yǎng)、研究。變化的個(gè)體，保留有相應(yīng)變化的個(gè)體進(jìn)一步培養(yǎng)、研究。例：用棉鈴飼喂棉鈴蟲(chóng)，例：用棉鈴飼喂棉鈴蟲(chóng)，如蟲(chóng)吃后不出現(xiàn)中毒癥狀，如蟲(chóng)吃后不出現(xiàn)中毒癥狀，說(shuō)明未攝入目的基因或攝入說(shuō)明未攝入目的基因或攝入目的基因未表達(dá)。如蟲(chóng)吃后目的基因未表達(dá)。

44、如蟲(chóng)吃后中毒死亡，則說(shuō)明攝入了抗中毒死亡，則說(shuō)明攝入了抗蟲(chóng)基因并得到表達(dá)。蟲(chóng)基因并得到表達(dá)。類型類型步驟步驟 檢測(cè)內(nèi)容檢測(cè)內(nèi)容 方法方法 結(jié)果顯示結(jié)果顯示分子分子檢測(cè)檢測(cè)第一步第一步轉(zhuǎn)基因生物染轉(zhuǎn)基因生物染色體的色體的DNA上上是否插入了目是否插入了目的基因的基因DNA分子雜交分子雜交（DNA和和DNA之間）之間）是否顯示出雜交是否顯示出雜交帶帶第二步第二步目的基因是否目的基因是否轉(zhuǎn)錄出轉(zhuǎn)錄出mRNA分子雜交技術(shù)分子雜交技術(shù)（DNAmRNA 之間）之間）是否顯示出雜交是否顯示出雜交帶帶第三步第三步目的基因是否目的基因是否翻譯出蛋白質(zhì)翻譯出蛋白質(zhì)抗原抗原抗體雜抗體雜交交是否顯示出雜交是否顯示出雜

45、交帶帶個(gè)體個(gè)體水平水平鑒定鑒定包括抗蟲(chóng)，抗病的接種實(shí)驗(yàn)，以確定是否有抗性以及抗性包括抗蟲(chóng)，抗病的接種實(shí)驗(yàn)，以確定是否有抗性以及抗性的程度；基因工程產(chǎn)品需要與天然產(chǎn)品的活性比較，以確的程度；基因工程產(chǎn)品需要與天然產(chǎn)品的活性比較，以確定其功能是否相同等定其功能是否相同等目的基因的檢測(cè)和鑒定分子水平和個(gè)體水平上的比較目的基因的檢測(cè)和鑒定分子水平和個(gè)體水平上的比較1.1.科學(xué)家在某種植物中找到了抗枯萎病的基因，并以質(zhì)科學(xué)家在某種植物中找到了抗枯萎病的基因，并以質(zhì)粒為運(yùn)載體，采用轉(zhuǎn)基因方法培育出了抗枯萎病的金粒為運(yùn)載體，采用轉(zhuǎn)基因方法培育出了抗枯萎病的金茶花新品種。下列有關(guān)說(shuō)法正確的是：茶花新品種。下列

46、有關(guān)說(shuō)法正確的是：A A質(zhì)粒是最常用的運(yùn)載體之一，它僅存在于原核細(xì)質(zhì)粒是最常用的運(yùn)載體之一，它僅存在于原核細(xì)胞中。胞中。B B獲得抗枯萎病基因并將其連接到質(zhì)粒上，用到的獲得抗枯萎病基因并將其連接到質(zhì)粒上，用到的工具酶是工具酶是DNADNA連接酶。連接酶。C C為保證金茶花植株抗枯萎病，只能以受精卵細(xì)胞作為保證金茶花植株抗枯萎病，只能以受精卵細(xì)胞作為基因工程的受體細(xì)胞。為基因工程的受體細(xì)胞。D D通過(guò)該方法獲得的抗病金茶花，將來(lái)產(chǎn)生的配子通過(guò)該方法獲得的抗病金茶花，將來(lái)產(chǎn)生的配子不一定含抗病基因。不一定含抗病基因。D D2.利用基因工程生產(chǎn)蛋白質(zhì)藥物的方法之一是將人的利用基因工程生產(chǎn)蛋白質(zhì)藥物的

47、方法之一是將人的基因轉(zhuǎn)入動(dòng)物體內(nèi)，再飼養(yǎng)這些轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，從動(dòng)物基因轉(zhuǎn)入動(dòng)物體內(nèi)，再飼養(yǎng)這些轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，從動(dòng)物乳汁或尿液中提取藥物。這一過(guò)程不涉及：乳汁或尿液中提取藥物。這一過(guò)程不涉及： ADNA以其一條鏈為模板合成以其一條鏈為模板合成RNA BDNA按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則自我復(fù)制按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則自我復(fù)制CRNA以自身為模板自我復(fù)制以自身為模板自我復(fù)制 D按照按照RNA密碼子的排列順序合成蛋白質(zhì)密碼子的排列順序合成蛋白質(zhì)C4.19974.1997年，科學(xué)家將動(dòng)物體內(nèi)的能夠合成胰島素的基年，科學(xué)家將動(dòng)物體內(nèi)的能夠合成胰島素的基因與大腸桿菌的因與大腸桿菌的DNADNA分子重組，并且在大腸桿菌中表達(dá)

48、分子重組，并且在大腸桿菌中表達(dá)成功。如下圖，請(qǐng)據(jù)圖回答問(wèn)題。成功。如下圖，請(qǐng)據(jù)圖回答問(wèn)題。(1)(1)此圖表示的是采取此圖表示的是采取_ _ _方方法獲取法獲取_ _ _基因的過(guò)程?；虻倪^(guò)程。(2)(2)圖中圖中DNADNA是以是以_ _ _為為模板，模板，_ _ _形成單鏈形成單鏈DNADNA，在酶的作用下合成雙鏈在酶的作用下合成雙鏈DNADNA，從而獲，從而獲得了所需要的得了所需要的_。人工合成基因人工合成基因原胰島素目的原胰島素目的原胰島素原胰島素mRNA原胰島素目的基因原胰島素目的基因逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄(3)(3)圖中圖中代表的是代表的是_酶，在它的作用下將質(zhì)粒酶，在它的作用下將質(zhì)粒切出切出_末端。末端。(4)(4)圖中圖中代表重組代表重組DNADNA含含_基因基因(5)(5)圖中圖中表示將表示將_。特定的限制酶特定的限制酶黏性黏性重組重組原胰島素基因原胰島素基因1 1下圖為用于基因工程的一個(gè)質(zhì)粒示意圖。用下圖為用于基因工程的一個(gè)質(zhì)粒示意圖。用EcoREcoR 限制酶切割目的基因和該質(zhì)粒，再用限制酶切割目的基因和該質(zhì)粒，再用DNADNA連接酶連接形連接酶連接形成重組質(zhì)粒，然后導(dǎo)入大腸桿菌，最后將大腸桿菌放成重組質(zhì)粒，然后導(dǎo)入大腸桿菌，最