微生物實驗課件：實驗4 常用培養(yǎng)基的制備和濕熱滅菌

1、常用培養(yǎng)基的制備和濕常用培養(yǎng)基的制備和濕熱滅菌熱滅菌 l了解常用培養(yǎng)基的配制原理和方法，掌了解常用培養(yǎng)基的配制原理和方法，掌握其配制過程。握其配制過程。l掌握加壓蒸汽滅菌法的原理及其使用方掌握加壓蒸汽滅菌法的原理及其使用方法。法。l正確掌握培養(yǎng)基的配制方法是從事微生物學(xué)實驗工作的重要基礎(chǔ)。由于微生物種類及代l謝類型的多樣性因而用于培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基的種類也很多，它們的配方及配制方法雖各有差異。但一般培養(yǎng)基的配制程序卻大致相同例如器皿的準(zhǔn)備，培養(yǎng)基的配制與分裝，棉塞的制作，培養(yǎng)基的滅菌，斜面與平板的制作以及培養(yǎng)基的無菌檢查等基本環(huán)節(jié)大致相同。培養(yǎng)基分類培養(yǎng)基分類據(jù)組成成分可分為據(jù)組成成分可分為:

2、1.合成培養(yǎng)基：由各種純化學(xué)物質(zhì)按一定比例配制而成。合成培養(yǎng)基：由各種純化學(xué)物質(zhì)按一定比例配制而成。 2.半合成培養(yǎng)基：有一部分純化學(xué)物質(zhì)和另一部分天然物半合成培養(yǎng)基：有一部分純化學(xué)物質(zhì)和另一部分天然物質(zhì)配制而成。質(zhì)配制而成。3.天然培養(yǎng)基：利用天然來源的有機物配制而成。天然培養(yǎng)基：利用天然來源的有機物配制而成。據(jù)用途可分為據(jù)用途可分為1.基礎(chǔ)培養(yǎng)基：能滿足各種微生物的營養(yǎng)需求基礎(chǔ)培養(yǎng)基：能滿足各種微生物的營養(yǎng)需求加富培養(yǎng)基：加入某種微生物生長繁殖所需的營養(yǎng)物質(zhì)，加富培養(yǎng)基：加入某種微生物生長繁殖所需的營養(yǎng)物質(zhì)，使其快速生長，便于分離使其快速生長，便于分離3.選擇培養(yǎng)基：加入某種物質(zhì)抑制其他微

3、生物生長，使目選擇培養(yǎng)基：加入某種物質(zhì)抑制其他微生物生長，使目標(biāo)微生物得到富集，便于分離標(biāo)微生物得到富集，便于分離4.鑒別培養(yǎng)基：用來檢測微生物的某些代謝特性。鑒別培養(yǎng)基：用來檢測微生物的某些代謝特性。l按培養(yǎng)基的物理狀態(tài)可分為按培養(yǎng)基的物理狀態(tài)可分為 1.液體培養(yǎng)基：不加凝固劑的液體狀態(tài)培養(yǎng)基。液體培養(yǎng)基：不加凝固劑的液體狀態(tài)培養(yǎng)基。 2.固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入2%左右的凝固劑左右的凝固劑的固體狀態(tài)的培養(yǎng)基或農(nóng)副產(chǎn)品培養(yǎng)基。的固體狀態(tài)的培養(yǎng)基或農(nóng)副產(chǎn)品培養(yǎng)基。3.半固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入半固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入0.20.5%凝固凝固劑而成

4、的半固體狀培養(yǎng)基。劑而成的半固體狀培養(yǎng)基。常用凝固劑為瓊脂（其次為明膠），又叫洋菜、凍粉。常用凝固劑為瓊脂（其次為明膠），又叫洋菜、凍粉。l消毒：消毒：使用理化因素方法殺死物體表面絕大多數(shù)微生物的使用理化因素方法殺死物體表面絕大多數(shù)微生物的方法。方法。l滅菌：滅菌：采用強烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有微生物的方采用強烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有微生物的方法。法。l干熱滅菌法：電熱烘箱作為干熱滅菌器干熱滅菌法：電熱烘箱作為干熱滅菌器l加壓蒸汽滅菌法其步驟如下：加壓蒸汽滅菌法其步驟如下：1.1.滅菌器內(nèi)加入一定量的水，將包扎好的物品放入其中。滅菌器內(nèi)加入一定量的水，將包扎好的物品放入其中。2.2.接

5、通電源，進行加熱接通電源，進行加熱3. 3. 排除高壓鍋內(nèi)的冷空氣，可將排氣閥打開，待排出大排除高壓鍋內(nèi)的冷空氣，可將排氣閥打開，待排出大氣后關(guān)閉排氣閥；或關(guān)閉排氣閥，待壓力上升到氣后關(guān)閉排氣閥；或關(guān)閉排氣閥，待壓力上升到0.5kg/cm0.5kg/cm2 2時再打開排氣閥，待壓力回復(fù)到時再打開排氣閥，待壓力回復(fù)到0 0時再關(guān)閉排氣時再關(guān)閉排氣閥。閥。4.4.當(dāng)壓力達(dá)當(dāng)壓力達(dá)1.05kg/cm1.05kg/cm2 2時，此時滅菌器內(nèi)的溫度為時，此時滅菌器內(nèi)的溫度為1211210 0C C，維持維持30min30min。對熱不穩(wěn)定的培養(yǎng)基如含有葡萄糖、氨基酸。對熱不穩(wěn)定的培養(yǎng)基如含有葡萄糖、氨基

6、酸等物時，應(yīng)適當(dāng)降低壓力，延長時間。等物時，應(yīng)適當(dāng)降低壓力，延長時間。5.5.滅菌時間一到，切斷電源，待壓力降至零時，才能打開滅菌時間一到，切斷電源，待壓力降至零時，才能打開排氣閥，然后打開滅菌器蓋，取出物品。排氣閥，然后打開滅菌器蓋，取出物品。l間歇滅菌法：間歇滅菌法： 待滅菌的物品放在滅菌器或蒸籠里，每天待滅菌的物品放在滅菌器或蒸籠里，每天蒸煮蒸煮1次，每次煮沸次，每次煮沸1h，連續(xù)，連續(xù)3d重復(fù)進行。重復(fù)進行。在每兩次蒸煮之間，將物品（指培養(yǎng)基）在每兩次蒸煮之間，將物品（指培養(yǎng)基）放在放在370C恒溫條件下培養(yǎng)過夜，這樣可以恒溫條件下培養(yǎng)過夜，這樣可以使每次蒸煮后未殺死殘留的芽孢萌發(fā)成營

7、使每次蒸煮后未殺死殘留的芽孢萌發(fā)成營養(yǎng)體，以便下次蒸煮時殺滅。養(yǎng)體，以便下次蒸煮時殺滅。l過濾除菌法：過濾除菌法： 不能用加熱滅菌的液體物質(zhì)（如維生素、不能用加熱滅菌的液體物質(zhì)（如維生素、血清），一般可用細(xì)菌過濾器進行除菌。血清），一般可用細(xì)菌過濾器進行除菌。l紫外線滅菌法：紫外線滅菌法： 一般一般30W燈管，燈管，9m3空間，距地面空間，距地面2m每次打開每次打開紫外線照射紫外線照射0.5h，就使室內(nèi)空氣滅菌。若照射，就使室內(nèi)空氣滅菌。若照射紫外線時先噴灑石炭酸等化學(xué)消毒劑，可增強紫外線時先噴灑石炭酸等化學(xué)消毒劑，可增強滅菌效果。紫外線雖有較強的殺菌力，但穿透滅菌效果。紫外線雖有較強的殺菌力

8、，但穿透力弱，即使一薄層玻璃或水層就能將大部分紫力弱，即使一薄層玻璃或水層就能將大部分紫外線濾除，因此只適用于空氣及表面殺菌。外線濾除，因此只適用于空氣及表面殺菌。l化學(xué)藥劑消毒滅菌：化學(xué)藥劑消毒滅菌： 微生物實驗室中常用的化學(xué)殺菌劑有升汞、甲微生物實驗室中常用的化學(xué)殺菌劑有升汞、甲醛、高錳酸鉀、酒精、碘酒、龍膽紫、石炭酸、醛、高錳酸鉀、酒精、碘酒、龍膽紫、石炭酸、漂白粉、新潔爾滅、煤酚皂溶液，它們有的是漂白粉、新潔爾滅、煤酚皂溶液，它們有的是殺菌劑，有的是抑菌劑。殺菌劑，有的是抑菌劑。l藥品：牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂；藥品：牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂；l高壓蒸汽滅菌器高壓蒸汽滅菌器l其

9、它：天平、牛角匙、電爐、其它：天平、牛角匙、電爐、1N HCl、1N NaOH、pH試紙（試紙（pH5.5-9.0）、刻度搪瓷）、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、玻棒、帶棉塞的無菌試管、杯、量筒、漏斗、玻棒、帶棉塞的無菌試管、各種包裝紙、繩索、標(biāo)簽、記號筆等。各種包裝紙、繩索、標(biāo)簽、記號筆等。l培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基的配制l高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌l稱量：按照配方正確稱取各種原料放于搪瓷杯中。稱量：按照配方正確稱取各種原料放于搪瓷杯中。l溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒攪勻，加熱溶解。溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒攪勻，加熱溶解。l調(diào)調(diào)pH值：用值：用 NaOH或或HCl調(diào)調(diào)pH，用，用pH試紙對照試紙對照。l加瓊脂溶化：加熱過程中要不斷攪拌，可適當(dāng)補水。加瓊脂溶化：加熱過程中要不斷攪拌，可適當(dāng)補水。l分裝：注意不要污染棉塞。分裝：注意不要污染棉塞。l包扎成捆，掛上標(biāo)簽（必須用鉛筆或記號筆寫），注明包扎成捆，掛上標(biāo)簽（必須用鉛筆或記號筆寫），注明何種培養(yǎng)基。何種培養(yǎng)基。l高壓蒸汽滅菌備用：高壓蒸汽滅菌備用：1210C滅菌滅菌15min，滅菌后需做無菌，滅菌后需做無菌檢查（檢查（370C培養(yǎng)培養(yǎng)24h），方可使用。），方可使用。l用于分離和培養(yǎng)