殘留溶劑測定法

1、殘留溶劑測定法1 簡述藥品中的殘留溶劑系指在原料藥或輔料的生產中， 以及在制劑制備過程中使 用過，但在工藝過程中未能完全去除的有機溶劑。 藥物中常見的殘留溶劑及限度 參照?中國藥典? 2022年版四部通那么 0861附表 1的規(guī)定，除另有規(guī)定外， 第一、 第二、第三類溶劑的殘留量應符合其規(guī)定； 對其他溶劑， 應根據生產工藝的特點， 制訂相應的限度，使其符合產品質量標準的要求。本法照氣相色譜法 ?中國藥 典? 2022 年版四部通那么 0521測定。本測定方法適用于對各論項下未收載殘留溶劑檢測方法的品種中殘留溶劑 的檢驗，也可用于指導建立各論項下具體品種的殘留溶劑檢查方法。2 儀器和用具氣相色譜

2、儀，帶 FID 檢測器，頂空進樣器。電腦，安裝工作站軟件。色譜柱 毛細管柱除另有規(guī)定外，極性相近的同類色譜柱之間可以互代使用。.1 非極性色譜柱 固定液為 100%的二甲基聚硅氧烷的毛細管柱。.2極性色譜柱固定液為聚乙二醇(PEG-20M)的毛細管柱。.3 中極性色譜柱 固定液為 (35%)二苯基 -(65%)二甲基聚硅氧烷， (50%)二苯基 -(50%)二甲基聚硅氧烷， (35%)二苯基 -(65%)二甲基亞芳基聚硅氧烷， (14%)氰丙 基苯基 -(86%)二甲基聚硅氧烷， (6%)氰丙基苯基 -(94%)二甲基聚硅氧烷的毛細管 柱。.4 弱極性色譜柱固定液為 (5%)苯基-(95%)甲

3、基聚硅氧烷， (5%)二苯基 -(95%)二甲基亞芳基硅氧烷共聚物的毛細管柱。填充柱 以直徑為0.180.25mm的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球或 其他適宜的填料作為固定相。3 供試品溶液和對照品溶液的制備供試品溶液的制備頂空進樣 除另有規(guī)定外，精密稱取供試品0.11g；通常以水為溶劑；對于非 水溶性藥物，可采用 N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜或其他適宜溶劑；根據供 試品和待測溶劑的溶解度， 選擇適宜的溶劑且應不干擾待測溶劑的測定。 根據品 種正文中殘留溶劑的限度規(guī)定配制供試品溶液，濃度滿足系統(tǒng)定量測定的需要。溶液直接進樣 精密稱取供試品適量， 用水或適宜的有機溶劑使溶解； 根據品

4、種正文中殘留溶劑的限度規(guī)定配制供試品溶液， 其濃度應滿足系統(tǒng)定量測定的需 要。對照品溶液的制備 精密稱取各品種項下規(guī)定檢查的有機溶劑適量， 采用與制 備供試品溶液相同的方法和溶劑制備對照品溶液。 假設為限度檢查， 根據殘留溶 劑的限度規(guī)定確定對照品溶液的濃度； 假設為定量測定， 為保證定量結果的準確 性，應根據供試品中殘留溶劑的實際殘留量確定對照品溶液的濃度； 通常對照品 溶液的色譜峰面積與供試品溶液中對應的殘留溶劑的色譜峰面積以不超過 2 倍 為宜。必要時，應重新調整供試品溶液和對照品溶液的濃度。4 系統(tǒng)適用性試驗用待測物的色譜峰計算，毛細管色譜柱的理論板數均應大于5000；填充柱法的理論板

5、數一般應大于 1000。色譜圖中，待測物色譜峰與其相鄰的色譜峰的別離度應大于；4.3 以內標法測定時，對照品溶液連續(xù)進樣 5 次，所得待測物與內標物峰面積 之比的相對標準偏差(RSD)應不大于5%;假設以外標法測定，所得待測物峰面 積的相對標準偏差(RSD)應不大于10%。5 測定法第一法 毛細管柱頂空進樣等溫法 當需要檢查的有機溶劑數量不多，并極性差異較小時，可采用此法。色譜條件 柱溫應根據待測溶劑及配制供試液的溶劑的沸點決定。 為防止溶 劑在柱內凝結，提高保存的重現性，柱溫不宜太低，通常在40C l00C間適中選 定；常以氮氣為載氣，流速為每分鐘；以水為溶劑時頂空瓶平衡溫度為 7085C,

6、 頂空瓶平衡時間3060分鐘；進樣口溫度一般為150C200C；如采用FID檢測 器，溫度為250C。測定法 取對照品溶液和供試品溶液， 分別連續(xù)進樣不少于 2次，測定待測峰 的峰面積。 由于靜態(tài)頂空進樣時， 抽取的是處于氣液平衡的頂空氣， 所以每個頂 空瓶只能去取樣一次；供試溶液必須放入 2(n)個頂空瓶中，以保證2(n)次進樣的 要求。第二法 毛細管柱頂空瓶進樣系統(tǒng)程序升溫法當需要檢查的有機溶劑數量較多并極性差異較大時， 可采用此法。 色譜條件如 為非極性色譜系統(tǒng)，柱溫一般先在 30C維持7分鐘，再以8C/min的速度升至 120C，維持15分鐘；如為極性色譜系統(tǒng)，柱溫一般先在 60C維持

7、6分鐘；再 以8C/min的升溫速率升至100C，維持20分鐘；以氮氣為載氣，流速為；以水 為溶劑時頂空瓶平衡溫度7085C，頂空瓶平衡時間3060分鐘；進樣口溫度為 200r ;如采用FID檢測器，溫度為250C。具體到某個藥品的殘留溶劑檢查時， 可根據該品種項下的殘留溶劑組成調整升 溫程序。測定法 取對照品溶液和供試品溶液， 分別連續(xù)進樣不少于 2次，測定待測峰 的峰面積。第三法 溶液直接進樣法主要適用于企業(yè)對生產工藝中特定的殘留溶劑的控制， 可采用填充柱， 亦可采 用適宜極性的毛細管柱。不應采用酸或堿作為溶劑。測定法 取對照品溶液和供試品溶液，分別連續(xù)進樣 23次，每次12pl，測 定待

8、測峰的峰面積。6 計算法6.1 限度檢查 除另有規(guī)定外，按各品種項下規(guī)定的供試溶液濃度測定。以內 標法測定時，供試品溶液所得被測溶劑峰面積與內標峰面積之比不得大于對照品 溶液的相應比值。 以外標法測定時， 供試品溶液所得被測溶劑峰面積不得大于對 照品溶液的相應峰面積。定量測定 按內標法或外標法計算各殘留溶劑的量。7 考前須知頂空條件的選擇應根據供試品中殘留溶劑的沸點選擇頂空溫度。 對沸點較高的殘留溶劑， 通常 選擇較高的頂空平衡溫度； 但此時應兼顧供試品的熱分解特性， 盡量防止供試品 產生的揮發(fā)性熱分解產物對測定的干擾。頂空平衡時間一般為 3045 分鐘，以保證供試品溶液的氣 -液兩相有足夠的

9、時 間到達平衡。頂空平衡時間通常不宜過長，如超過 60 分鐘，可能引起頂空瓶的 氣密性變差，導致定量準確性的降低。對于有傳輸管的頂空進樣器，傳輸管溫度應適當，通常設定在110°C 120C。對照品溶液與供試品溶液必須使用相同的頂空條件。7.2 定量方法的驗證 當采用頂空色譜系統(tǒng)測定時，供試品與對照品處于不完 全相同的基質中， 故應考慮氣液平衡過程中的基質效應。 由于標準參加法可以消 除供試品溶液基質與對照品溶液基質不同所致的基質效應的影響， 故通常采用標 準參加法驗證定量方法的準確性。當標準參加法與其他定量方法的結果不一致 時，應以標準參加法的結果為準。7.3 干擾峰的排除 供試品中

10、的未知雜質或其揮發(fā)性熱降解物易對殘留溶劑的 測定產生干擾。干擾作用包括在測定的色譜系統(tǒng)中未知雜質或其揮發(fā)性熱降解物 與待測物的保存值相同 共出峰 ；或熱降解產物與待測物的結構相同 如甲氧基熱 裂解產生甲醇 。當測定的有機溶劑殘留量超出限度，但未能確定供試品中是否 有未知雜質或其揮發(fā)性熱降解物對測定有干擾作用時， 應通過試驗排除干擾作用 的存在。對第一類干擾作用， 通常采用在另一種極性相反的色譜柱系統(tǒng)中對相同 樣品再進行測定， 比擬不同色譜系統(tǒng)中測定的結果。 如二者結果一致， 那么可以排 除測定中有共出峰的干擾；如二者結果不一致，那么說明測定中有共出峰的干擾。 對第二類干擾作用，通常要通過測定不

11、含該溶劑的對照樣品來加以判斷。7.4 含氮堿性化合物的測定 普通氣相色譜的不銹鋼管路、進樣器的襯管等對 有機胺等含氮堿性化合物具有較強的吸附作用， 致使其檢出靈敏度降低。 當采用 頂空進行系統(tǒng)測定此類化合物時， 應采用惰性的硅鋼材料或鎳鋼材料管路； 或采 用溶液直接進樣法測定。 供試品溶液應不呈酸性， 以免待測物與酸反響后不易氣 化。通常采用弱極性的色譜柱或填料經堿處理過的色譜柱分析含氮堿性化合物， 如果采用胺分析專用柱進行分析， 效果更好。 對不宜采用氣相色譜法測定的含氮 堿性化合物，可采用其他方法如離子色譜法等測定。7.5 檢測器的選擇對含鹵素元素的殘留溶劑如氯仿等，采用 ECD 檢測器，

12、易得 到高的靈敏度。7.6 由于不同的實驗室在測定同一藥品時可能采用了不同的實驗方法，當測定結果處于合格不合格邊緣時，以采用內標及標準參加法為準。8 應用8.1 樣品中殘留溶劑的種類測定方法的初步選擇根據待測藥品的結構和溶解性， 選擇適宜的頂空條件和溶劑； 根據質量標準 或工藝流程確定待檢測樣品中的殘留溶劑種類，在表 2、表 3 中選定適合的色譜 柱系統(tǒng)以到達最好的別離，并選擇一種與待測殘留溶劑無干擾的內標。測定方法的考察與優(yōu)化.1 用所選溶劑配制對照品溶液并參加內標， 并在所選色譜柱系統(tǒng)考察是否能夠 到達別離要求，內標是否適宜。如果不能到達要求，根據情況進行適當的調整， 如調整柱溫、流速等或

13、選用其他色譜柱系統(tǒng)。.2精密稱取樣品置20m1頂空瓶中，加溶劑1溶解，加蓋密封作為供試品溶液。 在所確定的色譜條件下測定， 考察供試品中待測殘留溶劑是否到達別離要求， 內 標出峰處是否有干擾。 如果不能到達要求， 根據情況進行適當的調整， 如調整柱 溫、流速等或選用其他色譜柱系統(tǒng)。.3 最終確定色譜條件和內標。定量測定.1 配制足夠量的一定濃度的內標溶液備用。精密稱取供試品約置頂空瓶中，加 內標溶液溶解， 加蓋密封作為供試品溶液。 根據供試品溶液的濃度計算出按照中 國藥典的限度應配制的對照品濃度，并用內標溶液配制。.2 在相同的頂空條件和色譜條件下測定對照品和供試品并按內標法計算結果。 結果判

14、定.1 測定結果小于中國藥典規(guī)定限度的組分，為殘留溶劑項符合規(guī)定的組分。.2 當存在有干擾組分、限度邊緣組分、不符合規(guī)定的組分時，要改變測定條件 做進一步的考察，以排除干擾因素，得到正確結論。未知樣品中殘留溶劑的種類初步判斷.1 精密稱取藥品約置 20mI 頂空瓶中， 加溶劑溶解， 加蓋密封作為供試品溶液；.2 分別采用程序升溫法，在非極性和極性兩種色譜柱系統(tǒng)條件下，按推薦的程序升溫條件用頂空氣相色譜法測定藥品中所有揮發(fā)性組分的保存時間； 在相同色 譜條件下測定丁酮的保存時間；.3 計算藥品中所有揮發(fā)性組分相對于丁酮的相對保存時間。.4 將兩個柱系統(tǒng)中的揮發(fā)性組分相對于丁酮的保存時間分別與表 3 中的相對保 留時間比擬，找出相對保存時間相差小于 3%的有機溶劑，作為可能存在的殘留 溶劑；.5 找出在兩個柱系統(tǒng)中共同的可能存在的殘留溶劑， 即為藥品中可能存在的殘 留溶劑。確定根據初步判斷結果， 使用有機溶劑標樣配制對照品溶液， 選擇適當的等溫色 譜系統(tǒng)測定對照品溶液和供試品溶液， 供試品溶液中殘留溶劑的保存時間應與對