植物根系(脫氫酶)活力檢測(cè)試劑盒(TTC比色法)

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上 植物根系(脫氫酶)活力檢測(cè)試劑盒(TTC比色法)簡(jiǎn)介： 植物根系是活躍的吸收器官和合成器官，根的生長(zhǎng)情況和代謝水平即根系活力直接影響植物地上部的生長(zhǎng)和營(yíng)養(yǎng)狀況以及最終產(chǎn)量，是植物生長(zhǎng)的重要生理指標(biāo)之一。TTC(2，3，5-氯化三苯基四氮唑)是一種氧化還原物質(zhì)，是標(biāo)準(zhǔn)氧化電位為80mV的氧化還原色素，溶解于水為無(wú)色，可以檢測(cè)根系活力。Leagene 植物根系(脫氫酶)活力檢測(cè)試劑盒(TTC比色法)檢測(cè)原理是在弱酸性條件下，以TTC為底物，植物根系中脫氫酶能夠還原TTC生成紅色而不溶于水的三苯基甲腙(TTF)，生成的TTF比較穩(wěn)定(不會(huì)被空氣中的氧自動(dòng)氧化)，于分光光度

2、計(jì)或酶標(biāo)儀485nm處檢測(cè)吸光度，計(jì)算TTC還原量，以該還原量表示脫氫酶活性，并作為植物根系活力的指標(biāo)。該試劑盒主要用于定量測(cè)定植物根系中根系活力或脫氫酶活性。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。組成： 編號(hào) 名稱TP102340TStorage試劑(A): TTC2×0.5g RT 避光試劑(B): TTC Assay buffer2×250ml RT 試劑(C): TTC終止液100ml RT 使用說(shuō)明書(shū)1份操作步驟(僅供參考)：1、 配制TTC Assay buffer工作液：取0.5g TTC完全溶解于TTC Assay buffer中，即為T(mén)TC

3、Assay buffer工作液，即配即用，短期4避光保存。2、 制作TTC標(biāo)準(zhǔn)曲線：取0.25ml TTC Assay buffer工作液置于離心管或容量瓶，加入少許NaS2O4粉末(一般2mg左右，各管量一致)，混勻，產(chǎn)生紅色的TTF，用乙酸乙酯補(bǔ)加至10ml，混勻。按下表，分別取上述溶液0.25、0.5、1、2、3ml置于離心管或容量瓶中，用乙酸乙酯補(bǔ)加至10ml，即TTF含量為的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，以乙酸乙酯為空白調(diào)零，以分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀測(cè)定485nm處吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 加入物(ml)12345TTC Assay buffer工作液0.250.5123乙酸乙酯9.759.5987相當(dāng)于

4、TTF含量(g/10ml)25501002003003、 準(zhǔn)備樣品：取植物須根系，洗凈，用濾紙吸干，完全浸沒(méi)于TTC Assay buffer工作液，37避光孵育，加入 TTC終止液?？瞻讓?duì)照：先加入2ml TTC終止液，加入干凈的植物須根系，完全浸沒(méi)于TTC Assay buffer工作液，37避光孵育，以次液作為空白對(duì)照。4、 加樣：把上述根系取出，濾紙吸干水分，放入研缽或勻漿器中，加入乙酸乙酯，充分研磨或勻漿，以提取出TTF。把紅色提取液轉(zhuǎn)移至離心管，并用少量乙酸乙酯把殘?jiān)礈?-3次，再將洗滌液一并轉(zhuǎn)移至離心管，最后補(bǔ)加乙酸乙酯至。5、 根系檢測(cè)：以空白調(diào)零，比色杯光徑1.0cm，以分

5、光光度計(jì)或酶標(biāo)儀測(cè)定485nm處TTF吸光度。計(jì)算： 以系列標(biāo)準(zhǔn)溶液TTF濃度(25g、50g、100g、200g、300g10ml)為橫坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制TTF標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)TTF與吸光度計(jì)算回歸方程，根據(jù)回歸方程計(jì)算出待測(cè)樣品的四氮唑還原量，即為根系活力或脫氫酶活性。 根系(脫氫酶)活力(mg/g·h)=C×V/(1000×W×t) 式中：C=根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的樣品提取液的濃度(g/ml) V=樣品提取液總體積(ml) W=植物須根系的重量(g) t=孵育時(shí)間(h)=1(h)注意事項(xiàng)：1、 配制好的TTC Assay buffer工作液應(yīng)避光保存，如果見(jiàn)光會(huì)變紅，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。2、 提高溫度可以增加反應(yīng)速度，但會(huì)降低重氮鹽的穩(wěn)定性，所以反應(yīng)需在相同條件下進(jìn)行。3、 如果沒(méi)有分光光度計(jì)，也可以使用普通的酶標(biāo)儀測(cè)定，但應(yīng)注意酶標(biāo)板每孔最大檢測(cè)體積。編號(hào)名稱CC0007磷酸緩沖鹽溶液(10×PBS,無(wú)鈣鎂)CM0004LB培養(yǎng)基DC0032Masson三色染色液DF0135