分子translation2014lsl單擊此處編輯母版標題

1、分子生物學分子生物學 I 00818501/2 I 00818501/2（Molecular Biology I)Molecular Biology I)柳素玲柳素玲 辦公室辦公室: : 生命科學院生命科學院 318 318 電郵電郵: : 電話電話: : 助教：鄭撼助教：鄭撼 課代表課代表: :白冠華白冠華 翻譯：在細胞質(zhì)中翻譯：在細胞質(zhì)中, ,以以mRNAmRNA為模板為模板, ,合成具有一定氨合成具有一定氨基酸順序的蛋白質(zhì)的過程。基酸順序的蛋白質(zhì)的過程。思考：思考： 組成蛋白質(zhì)的氨基酸：組成蛋白質(zhì)的氨基酸： 信使信使RNARNA的堿基：的堿基：4 4種堿基如何決定蛋白質(zhì)的種堿基如何決定蛋

2、白質(zhì)的2020種氨基酸呢？種氨基酸呢？2020種種4 4種種如果如果1 1個堿基決定個堿基決定1 1個氨基酸就只能決定個氨基酸就只能決定_種，即種，即如果如果3 3個堿基決定個堿基決定1 1個氨基酸就可決定個氨基酸就可決定_種，即種，即如果如果2 2個堿基決定個堿基決定1 1個氨基酸就只能決定個氨基酸就只能決定_種，即種，即4 416166464實驗驗證：實驗驗證：19611961年英國的年英國的CrickCrick和同事用實驗證明一個和同事用實驗證明一個氨基酸是由氨基酸是由mRNAmRNA的的3 3個堿基決定，即三聯(lián)體密碼子個堿基決定，即三聯(lián)體密碼子信使信使RNARNA上決定一個氨基酸的上決

3、定一個氨基酸的3 3個相鄰的堿基個相鄰的堿基密碼子密碼子: :決定氨基酸的密碼子共有多少種？決定氨基酸的密碼子共有多少種？氨基酸有多少種氨基酸有多少種? ?UCAUG A UUAmRNAmRNA密碼子密碼子密碼子密碼子密碼子密碼子遺傳密碼字典遺傳密碼字典lsense codons: 61 （start codon: 1）lstop codon: 3lThe degeneracy of the codel20 a.a.4有相同含義的密碼子有相同含義的密碼子稱為同義密碼子。但稱為同義密碼子。但是他們被使用的幾率是他們被使用的幾率相差很大。相差很大。密碼子與反密碼子密碼子與反密碼子A A U亮氨酸亮

4、氨酸AC U天冬氨酸天冬氨酸一種一種tRNAtRNA只能攜帶一種氨基酸只能攜帶一種氨基酸? ? 一種氨基酸只能由一種一種氨基酸只能由一種tRNAtRNA攜帶攜帶? ? AUG異亮氨酸異亮氨酸對對錯錯61 1、掌握遺傳密碼的基本規(guī)律和特性、掌握遺傳密碼的基本規(guī)律和特性2 2、掌握蛋白質(zhì)合成的體系和蛋白質(zhì)生物合成的、掌握蛋白質(zhì)合成的體系和蛋白質(zhì)生物合成的 基本過程?；具^程。3 3、掌握蛋白質(zhì)合成后加工的主要方式以及蛋、掌握蛋白質(zhì)合成后加工的主要方式以及蛋 白質(zhì)合成后的輸送。白質(zhì)合成后的輸送。78Where? RibosomesDirection on mRNA: 5-to- 3 directio

5、nDirection of protein synthesis: N-terminal to C-terminal9 1011l 20種氨基酸作為原料種氨基酸作為原料l 酶及蛋白因子，如酶及蛋白因子，如IF、eIF等等l ATP、GTP、無機離子、無機離子l 三種三種RNAl mRNAl rRNAl tRNA12遺傳學將編碼一個多肽的遺傳單位稱為順反子遺傳學將編碼一個多肽的遺傳單位稱為順反子（cistron)cistron)。19551955年，美國分子生物學家本澤年，美國分子生物學家本澤（BenzerBenzer）通過）通過 對大腸桿菌的噬菌體對大腸桿菌的噬菌體T4T4的的rIIrII區(qū)基因

6、的深入研究，區(qū)基因的深入研究，揭示了基因內(nèi)部揭示了基因內(nèi)部 的精細結(jié)構(gòu)。提出了基因的順反子（的精細結(jié)構(gòu)。提出了基因的順反子（CistronCistron）概念。順反子即結(jié)概念。順反子即結(jié) 構(gòu)基因，為決定一條多肽鏈合成的功能單位。構(gòu)基因，為決定一條多肽鏈合成的功能單位。順反子是一個遺傳功順反子是一個遺傳功 能單位，一個順反子決定一條多肽鏈，這就使能單位，一個順反子決定一條多肽鏈，這就使以前一個基因一種酶以前一個基因一種酶 的假說發(fā)展為一個基因一種多肽的假說。的假說發(fā)展為一個基因一種多肽的假說。 原核細胞中數(shù)個結(jié)構(gòu)基因常串聯(lián)為一個轉(zhuǎn)錄單位，原核細胞中數(shù)個結(jié)構(gòu)基因常串聯(lián)為一個轉(zhuǎn)錄單位，轉(zhuǎn)錄生成的轉(zhuǎn)錄

7、生成的mRNAmRNA可編碼幾種功能相關(guān)的蛋白質(zhì)，可編碼幾種功能相關(guān)的蛋白質(zhì)，為多順反子（為多順反子（polycistronpolycistron）。）。真核生物一個真核生物一個mRNAmRNA只編碼一種蛋白質(zhì)，為單順只編碼一種蛋白質(zhì)，為單順反子（反子（monocistronmonocistron）。）。 1314internal ribosome entry site , IRES可以同時表達多個基因mRNAmRNA結(jié)構(gòu)簡圖結(jié)構(gòu)簡圖15編碼序列編碼序列(codon sequence，CDS)：一條多肽鏈對應(yīng)：一條多肽鏈對應(yīng)的的mRNA序列，即位于起始密碼子和終止密碼子之序列，即位于起始密碼子

8、和終止密碼子之間的核苷酸序列。間的核苷酸序列。5CTGTCATAAAGATGTCACGGCCGAGACTTATAGTCGCT. .CATGAAAGCCGCTCTGGGGCTGAAATAAAACCGCGCCCGG316基因在結(jié)構(gòu)上，分為編碼區(qū)和非編碼區(qū)兩部分（其中非編碼區(qū)對基因的表達主要起調(diào)控作用，如啟動子等位于該區(qū)）。近來，實驗證實非編碼區(qū)也非常重要（ncRNA)。17非編碼RNA（Non-coding RNA, ncRNA）是指不編碼蛋白質(zhì)的RNA。其中包括rRNA，tRNA，snRNA，snoRNA, microRNA和LncRNA等多種已知功能的 RNA，還包括未知功能的RNA。這些RN

9、A的共同特點是都能從基因組上轉(zhuǎn)錄而來，但是不翻譯成蛋白，在RNA 水平上就能行使各自的生物學功能了。非編碼RNA 從長度上來劃分可以分為3類：小于50 nt，包括microRNA，siRNA (Small interfering RNA )，piRNA (Piwi-interacting RNA) ；50 nt到500 nt，包括rRNA，tRNA，snRNA(small nuclear RNA)，snoRNA( small nucleolar RNA ) 等等；大于500 nt，包括LncRNA，長的不帶polyA 尾巴的非編碼RNA等等。microRNAs 18 -25 nucleotid

10、e (nt) non-coding RNAs. Bind to the 3 untranslated region (UTR) of target mRNAs to repress their translation and stabilitymicroRNA: Small molecular, Big worldSmall is beautiful!Small is powerful! Oncology Bladder Breast Cervical Colon Leukemia Lung Pancreas Prostate Thyroid Brain Alzheimers Multiple

11、 Sclerosis Prion Disease Stroke Miscellaneous Atherosclerosis Cardiac Hypertrophy Diabetes HIV/HPV Infection Lupus Cellular Process Angiogenesis Apoptosis Cell Cycle Neuronal Differentiation Proliferation Telomerase Activity T-cell Activation Various Cell TreatmentmiRNA Disease AnalysisRegulate nume

12、rous aspects of normal and pathologic cellular processes, including cancer真核生物基因的編碼區(qū)是不連續(xù)的，分為外顯子和內(nèi)含子（其中外顯子是可以最終實現(xiàn)表達（表現(xiàn)在蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)上），內(nèi)含子則最終不能表達（所以真核生物基因表達過程中，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA不能直接進行翻譯，而是要修剪掉內(nèi)含子部分后才能去指導翻譯)。原核生物的基因是連續(xù)的，所以談不上外顯子、內(nèi)含子的區(qū)分。22mRNA分子上從分子上從5至至3方向，由方向，由AUG開始，每開始，每3個核苷酸為一組，決定肽鏈個核苷酸為一組，決定肽鏈上某一個氨基酸或蛋白質(zhì)合成的起始、終

13、上某一個氨基酸或蛋白質(zhì)合成的起始、終止 信 號 ， 稱 為 三 聯(lián) 體 密 碼 （止 信 號 ， 稱 為 三 聯(lián) 體 密 碼 （ t r i p l e t codon）。）。2353m7GpppAAAAn3非翻譯區(qū)5非翻譯區(qū)編碼區(qū)AUGUAAORF從從mRNA 5端起始密碼子端起始密碼子AUG到到3端終止密碼子之間的核苷酸序列，各個三聯(lián)端終止密碼子之間的核苷酸序列，各個三聯(lián)體密碼連續(xù)排列編碼一條多肽鏈，稱為開放體密碼連續(xù)排列編碼一條多肽鏈，稱為開放閱讀框架閱讀框架 (open reading frame, ORF)。 24原核生物原核生物mRNAS-D序列序列 ：在原核生物，：在原核生物，m

14、RNA起始密碼起始密碼AUG上上游約游約813個核苷酸處，有個核苷酸處，有49個核苷酸組成的富含個核苷酸組成的富含嘌呤的一段序列，以嘌呤的一段序列，以AGGA為核心，因發(fā)現(xiàn)者為核心，因發(fā)現(xiàn)者是是Shine-Dalgamo而得名為而得名為S-D序列序列 (1974年年)，又稱，又稱為核糖體為核糖體16S rRNA 3端相結(jié)合的位點（端相結(jié)合的位點（ribosomal binding site，RBS）。）。 25 The 16S rRNA 3-terminus recognizes A special Shine-Dalgarno sequence, AGGA on mRNA.Prokaryot

15、es2627AGGA真核生物真核生物mRNA帽子結(jié)構(gòu)：結(jié)合核糖體，增加穩(wěn)定性；帽子結(jié)構(gòu)：結(jié)合核糖體，增加穩(wěn)定性；poly(A) 尾：增加穩(wěn)定性，提高翻譯效率。尾：增加穩(wěn)定性，提高翻譯效率。28由由rRNArRNA和多種蛋白質(zhì)結(jié)合而成的一種較大的核糖核酸蛋白和多種蛋白質(zhì)結(jié)合而成的一種較大的核糖核酸蛋白體（核糖體），是蛋白質(zhì)生物合成的場所（裝置）。體（核糖體），是蛋白質(zhì)生物合成的場所（裝置）。29核糖體是最小的細胞器，光鏡下見不到的結(jié)構(gòu)。在核糖體是最小的細胞器，光鏡下見不到的結(jié)構(gòu)。在19531953年由年由RibinsonRibinson和和BrounBroun用電鏡觀察植物細胞時發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)中存在一

16、種用電鏡觀察植物細胞時發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)中存在一種顆粒物質(zhì)。顆粒物質(zhì)。19551955年年P(guān)aladePalade在動物細胞中也看到同樣的顆粒在動物細胞中也看到同樣的顆粒, ,進一進一步研究了這些顆粒的化學成份和結(jié)構(gòu)。步研究了這些顆粒的化學成份和結(jié)構(gòu)。19581958年年RobertsRoberts根據(jù)化根據(jù)化學成份命名為核糖核蛋白體學成份命名為核糖核蛋白體, ,簡稱核糖體簡稱核糖體RibosomeRibosome。又稱核蛋白。又稱核蛋白體。體。核糖體除哺乳類成熟的紅細胞外核糖體除哺乳類成熟的紅細胞外, ,一切活細胞一切活細胞( (真核細胞、原真核細胞、原核細胞核細胞) )中均有中均有, ,它是進行蛋白

17、質(zhì)合成的重要細胞器它是進行蛋白質(zhì)合成的重要細胞器, ,在快速增殖、在快速增殖、分泌功能旺盛的細胞中尤其多。分泌功能旺盛的細胞中尤其多。成熟的哺乳動物的紅細胞是沒有細胞器和細胞核的（紅細胞成熟后，均被排出細成熟的哺乳動物的紅細胞是沒有細胞器和細胞核的（紅細胞成熟后，均被排出細胞外），成熟紅細胞內(nèi)的各種蛋白質(zhì)胞外），成熟紅細胞內(nèi)的各種蛋白質(zhì)( (血紅蛋白、各種和有氧呼吸有關(guān)的酶血紅蛋白、各種和有氧呼吸有關(guān)的酶) )，是，是靠它未分化之前的細胞產(chǎn)生的。成熟的紅細胞壽命極短就是因為它沒有細胞核?？克捶只暗募毎a(chǎn)生的。成熟的紅細胞壽命極短就是因為它沒有細胞核。31按存在的生物類型可分為兩種類型：真

18、核生物核糖體(80S)和原核生物核糖體(70S)。按核糖體存在的部位可分為三種類型:細胞質(zhì)核糖體、線粒體核糖體、葉綠體核糖體。核糖體分類核糖體分類核糖體無膜結(jié)構(gòu)，主要由蛋白質(zhì)(r-protein, 40%）和rRNA(60%）構(gòu)成。核糖體按沉降系數(shù)分為兩類，一類（70S）存在于細菌等原核生物中，另一類（80S）存在于真核生物的細胞質(zhì)中。他們有的漂浮在細胞內(nèi)，有的結(jié)集在一起。(1S=10-13秒)原核生物原核生物真核生物真核生物核蛋核蛋白體白體原核生物原核生物真核生物真核生物蛋白質(zhì)蛋白質(zhì) S S值值rRNArRNA蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)S S值值rRNArRNA小亞基小亞基2121種種30S30S16S1

19、6S3333種種40S40S18S18S大亞基大亞基3434種種50S50S23S23S5S5S4949種種60S60S28S28S5.8S5.8S5S5S核糖體核糖體70S70S80S80SS: 沉降系數(shù)沉降系數(shù)33342009年10月7日，瑞典皇家科學院在斯德哥爾摩宣布，英國劍橋大學科學家文卡特拉曼拉馬克里希南、美國科學家托馬斯施泰茨和以色列科學家阿達約納特因“對核糖體結(jié)構(gòu)和功能的研究”而共同獲得2009年諾貝爾化學獎。核糖體的功能部位核糖體的功能部位A位：氨酰位：氨酰-tRNA結(jié)合結(jié)合位點（位點（aminoacyl-tRNA binding site，受位）；，受位）；P位：肽?；唬弘?/p>

20、?；?tRNA結(jié)結(jié)合位點（合位點（peptidyl-tRNA binding site，給位）；，給位）； E位：空位位：空位(exit site)，專供專供tRNA離開（真核細離開（真核細胞核糖體沒有胞核糖體沒有E位位, 轉(zhuǎn)位轉(zhuǎn)位時卸載的時卸載的tRNA直接從直接從P位脫落）；位脫落）；mRNA結(jié)合位點：核結(jié)合位點：核糖體小亞基；糖體小亞基；P位和位和A位緊密連位緊密連接，各占一個密接，各占一個密碼子的距離。碼子的距離。35轉(zhuǎn)肽酶（轉(zhuǎn)肽酶（Peptidytransferase)Peptidytransferase)部位：形成肽鍵，位于核糖體大亞基部位：形成肽鍵，位于核糖體大亞基36原核生物原

21、核生物 37核糖體在細胞內(nèi)的存在形態(tài)：核糖體在細胞內(nèi)的存在形態(tài)： 核糖體亞基、單核糖體和多核糖核糖體亞基、單核糖體和多核糖體。體。多核糖體：一定數(shù)目的單個核糖體多核糖體：一定數(shù)目的單個核糖體與一個與一個mRNA分子結(jié)合而成的念珠狀分子結(jié)合而成的念珠狀結(jié)構(gòu)；大約每隔結(jié)構(gòu)；大約每隔80個核苷酸結(jié)合一個個核苷酸結(jié)合一個核糖體。核糖體。每個核糖體獨立完成一條肽鏈的合每個核糖體獨立完成一條肽鏈的合成，在多核糖體上可同時進行多條成，在多核糖體上可同時進行多條肽鏈的合成，提高翻譯效率。肽鏈的合成，提高翻譯效率。38翻譯的橋梁翻譯的橋梁/ /接合體接合體 - tRNA - tRNA39tRNAtRNA的種類的

22、種類起始起始tRNAtRNA：真核生物：真核生物tRNAMettRNAMet，原核生物，原核生物tRNAfMettRNAfMet（N-N-甲酰甲硫氨酰甲酰甲硫氨酰tRNAtRNA）。）。同工同工tRNAtRNA：攜帶相同氨基酸而反密碼子不：攜帶相同氨基酸而反密碼子不同的一組同的一組tRNAtRNA。校正校正tRNAtRNA：生物體發(fā)生突變后，校正機制：生物體發(fā)生突變后，校正機制之一是通過校正基因合成一類之一是通過校正基因合成一類tRNAtRNA，經(jīng)過，經(jīng)過其反密碼子上發(fā)生某種突變，以其反密碼子上發(fā)生某種突變，以“代償代償”或校正原有突變所產(chǎn)生的不良后果，以維或校正原有突變所產(chǎn)生的不良后果，以維

23、持翻譯作用譯碼的相對正確性，從而翻譯持翻譯作用譯碼的相對正確性，從而翻譯出正常蛋白質(zhì)，這類出正常蛋白質(zhì)，這類tRNAtRNA稱為校正稱為校正tRNA tRNA ?？捎卸喾N校正可有多種校正tRNAtRNA攜帶同一種氨基酸。攜帶同一種氨基酸。 40The specificity for codon recognition resides in the tRNA portion of an aminoacyl-tRNA: the anticodon41翻譯精確性的保證：翻譯精確性的保證： 密碼子密碼子-反密碼子反密碼子-氨基酸氨基酸1962，Lipmann, Benzer, G. Von Ehren

24、stein核糖體識別氨酰tRNA中的tRNA而非氨基酸Ala-tRNA-Cys42The tRNA anticodon！蘭尼鎳蘭尼鎳半胱氨酸半胱氨酸丙氨酸丙氨酸43蘭尼鎳蘭尼鎳半胱氨酸半胱氨酸丙氨酸丙氨酸反密碼環(huán)反密碼環(huán)氨基酸臂氨基酸臂tRNAtRNA在翻譯過程中起接合在翻譯過程中起接合體（體（adaptoradaptor）作用，又是）作用，又是氨基酸的運載體。氨基酸的運載體。44Enzyme: 20 Aminoacyl-tRNA synthetases for 20 different amino acid.Recognition: tRNAs for the same AA should

25、have some common recognition sites (bases next to the anticodon) for the enzyme45氨基酸氨基酸 + tRNA氨酰氨酰- tRNAATP AMPPPi氨酰氨酰-tRNA合成酶合成酶（一）氨酰（一）氨酰-tRNA合成酶合成酶(aminoacyl-tRNA synthetase)461. Aminoacyl-AMP3-OH2. Charged tRNA47第一步反應(yīng)：第一步反應(yīng)： 氨基酸氨基酸ATP ATP 氨基酰氨基酰-AMP-AMP PPi PPi 消耗兩個高能鍵消耗兩個高能鍵PPi48腺苷 氨酰氨酰-tRNA合成酶

26、合成酶第二步反應(yīng)：第二步反應(yīng)：氨基酰氨基酰-AMP -AMP tRNA tRNA 氨基酰氨基酰-tRNA -tRNA AMP AMP 氨基酸活化部位為氨基酸活化部位為-羧基；羧基；氨基酸與氨基酸與tRNA連接方式為酯鍵。連接方式為酯鍵。-羧基羧基49氨酰-tRNA合成酶50末端腺苷酸末端腺苷酸氨基酸氨基酸氨酰氨酰 AMP氨酰氨酰 AMP氨酰氨酰 tRNA氨酰氨酰 tRNA合成酶合成酶氨酰氨酰 tRNA合成酶合成酶焦磷酸鹽焦磷酸鹽51氨基酰氨基酰-AMP-AMP氨基酰氨基酰-tRNA-tRNA氨酰氨酰 tRNA合成酶合成酶tRNA與酶的結(jié)合模型與酶的結(jié)合模型52氨氨(基基)酰酰-tRNA合成酶的

27、特點合成酶的特點專一性專一性對氨基酸有極高的專一性，每種氨基酸都有專一的酶；只作用于對氨基酸有極高的專一性，每種氨基酸都有專一的酶；只作用于L(左旋左旋)-氨基酸，不作用于氨基酸，不作用于D(右旋右旋)-氨基酸；消耗氨基酸；消耗2個高能磷酸鍵。個高能磷酸鍵。（20種氨酰種氨酰-tRNA合成酶）合成酶） 對對tRNA 具有極高專一性（第二遺傳密碼系統(tǒng)具有極高專一性（第二遺傳密碼系統(tǒng) (合成酶來識別對應(yīng)合成酶來識別對應(yīng)的的tRNA并攜帶正確的氨基酸并攜帶正確的氨基酸) -目前大部分還沒有被破譯目前大部分還沒有被破譯,存在于氨存在于氨酰酰-tRNA合成酶的結(jié)構(gòu)中合成酶的結(jié)構(gòu)中)，能識別與此氨基酸相對

28、應(yīng)的一個或多，能識別與此氨基酸相對應(yīng)的一個或多個個tRNA 分子。分子。校對作用：氨酰校對作用：氨酰-tRNA合成酶的水解部位可以水解錯誤活合成酶的水解部位可以水解錯誤活 化的氨基酸。翻譯過程的錯誤頻率化的氨基酸。翻譯過程的錯誤頻率10-4。53l氨酰氨酰-tRNA的表示方法：的表示方法：lAla-tRNAAla lSer-tRNASerlMet-tRNAMet 54氨基酸的活化形式：氨(基)酰tRNA氨基酸的活化部位：羧基氨基酸與tRNA連接方式：酯鍵氨基酸活化耗能：2個Pi(高能鍵）真核生物：真核生物： Met-tRNAiMet Met-tRNAiMet （i-initiationi-in

29、itiation）原核生物：原核生物： fMet-tRNAifMet fMet-tRNAifMetMet-tRNAfMetMet-tRNAfMet甲硫氨酰甲硫氨酰-tRNA-tRNAfMet-tRNAfMetfMet-tRNAfMetN-N-甲酰甲酰- -甲硫氨酰甲硫氨酰-tRNA-tRNA甲酰四氫葉酸甲酰四氫葉酸起始肽鏈合成的氨酰起始肽鏈合成的氨酰-tRNA-tRNAMet-tRNAifMetfMet-tRNAifMet轉(zhuǎn)甲?；窷10-CHO FH455Most fMet is removed by methionine aminopeptidase (MAP) in post-trans

30、lational processing56氨酰氨酰tRNAtRNA合成酶合成酶轉(zhuǎn)甲酰激酶轉(zhuǎn)甲酰激酶 翻譯的起始翻譯的起始 (initiation) 翻譯的延長翻譯的延長 (elongation) 翻譯的終止翻譯的終止 (termination )整個翻譯過程可分為整個翻譯過程可分為 ：5758翻譯的起始翻譯的起始 (initiation)指指mRNAmRNA和起始氨酰和起始氨酰-tRNA-tRNA分別與核糖體結(jié)分別與核糖體結(jié)合而形成翻譯起始復合物合而形成翻譯起始復合物 (translational (translational initiation complex)initiation com

31、plex)。起始氨酰起始氨酰-tRNA-tRNA真核生物：真核生物： Met-tRNAiMet Met-tRNAiMet原核生物：原核生物： fMet-tRNAifMet fMet-tRNAifMet起始之前的兩個重要事件：起始之前的兩個重要事件：1.tRNA1.tRNA負載（負載（tRNA charging)-tRNA charging)-產(chǎn)生氨酰產(chǎn)生氨酰tRNAtRNA。2.2.核糖體解離為兩個亞基。核糖體解離為兩個亞基。The initiator tRNAfMet , the first Met has a blocked amino group-by formyl group -COH

32、Met is added to fMet-tRNA, the transformylase then add the formyl-groupA different Met-tRNA for internal AUG60成熟的蛋白質(zhì)將切除fMet.61Clarke and Marcker 反向流分配實驗：反向流分配實驗：tRNAMet: 移動快，移動快， 可負載甲硫氨酸可負載甲硫氨酸 AUGtRNAfMet: 移動慢，所結(jié)合的甲硫氨酸能被甲?；苿勇Y(jié)合的甲硫氨酸能被甲?；?AUG (90%), UUG (1%), GUG (8%)30S 、50S subunits, mRNA, fMet

33、-tRNAfMet, Initiation factors: IF-1, IF-2, IF-3 GTPMg2+62原核生物翻譯起始復合物形成原核生物翻譯起始復合物形成1、核糖體大小亞基分離；、核糖體大小亞基分離；2、mRNA在小亞基定位結(jié)合；在小亞基定位結(jié)合；3、起始氨基酰、起始氨基酰-tRNA的結(jié)合；的結(jié)合； 4、核糖體大亞基結(jié)合。、核糖體大亞基結(jié)合。63參與起始過程的蛋白質(zhì)因子稱起始因子參與起始過程的蛋白質(zhì)因子稱起始因子（initiation factorinitiation factor，IFIF）。）。原核生物的起始因子：原核生物的起始因子： IF1、IF2和和IF3。IF-1：占據(jù)：占據(jù)A位防止結(jié)合位防止結(jié)合fmet-tRNAfmet。IF-2：促進：促進fMet-tRNAi與小亞基結(jié)合。與小亞基結(jié)合。IF-3：促進大小亞基分離，提高：促進大小亞基分離，提高P位對結(jié)合起始位對結(jié)合起始tRNA敏感性。敏感性。64只有fmet-tRNAfmet能與第一個P位點相結(jié)合，其他所有tRNA都必須通過A位點到達P位點，再由E位點離開核糖體。IF1 prevent fmet-tRNAfmet binds to A site. IF2 help fmet-tRN