HIV初篩實(shí)驗(yàn)室SOP文件

1、HIV抗體初篩實(shí)驗(yàn)室SOP文件科室：檢驗(yàn)科第一部分 工作制度-2-實(shí)驗(yàn)室工作制度-2-HIV標(biāo)本采集與接收登記制度-3 -艾滋病實(shí)驗(yàn)室制度-3-艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室常規(guī)消毒清理工作制度-4-差錯事故處理制度-5-報(bào)告單簽發(fā)審核制度-6-設(shè)備管理制度-7-試劑管理制度-8-艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)制度-9-艾滋病病毒職業(yè)暴露預(yù)防處理方案-10-第二部分 標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程-13-第二章樣品采集與處理-13-第二章標(biāo)準(zhǔn)操作程序-14-一、金豪-14-二、科華生物-15-三、英科新創(chuàng)-16-第三章結(jié)果報(bào)告與注意事項(xiàng)-18-第三部分 設(shè)備SOP文件-20-一、多功能自動酶標(biāo)儀DNM-9602-20-二、DG3O

2、8O 洗板機(jī)-22-三、電熱恒溫水箱-25-第四部分流程圖-26-一、HIV抗體篩查流程圖-26-二、暴露級別的評估-27-附件：血清加樣表-28-第一部分工作制度實(shí)驗(yàn)室工作制度1 .室應(yīng)經(jīng)常保持整潔，各種儀器設(shè)備要安裝適當(dāng)，器皿試劑擺放整齊，標(biāo)志清 晰，有良好的通風(fēng)設(shè)備。2 .實(shí)驗(yàn)室工作人員工作時(shí)一律穿制服，保持衣帽整潔，試驗(yàn)過程中應(yīng)專心致志、 認(rèn)真負(fù)責(zé)，堅(jiān)守工作崗位，不得隨意串崗、閑談，保持實(shí)驗(yàn)室安靜，下班離 開實(shí)驗(yàn)室前要檢查并關(guān)好水、電、門、窗等，注意實(shí)驗(yàn)室安全。3 .認(rèn)真開展實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制工作，儀器設(shè)備應(yīng)定期保養(yǎng)，有溫度記錄，檢測標(biāo) 本的保存要求符合規(guī)要求。4 .實(shí)驗(yàn)室不得放置與測試無

3、關(guān)的物品，水、溫、濕度、光照、防震、防塵、防 噪聲等，環(huán)境必須符合實(shí)驗(yàn)室的工作要求。5 .實(shí)驗(yàn)和樓道必須配置足夠的安全防火措施，并定期檢查保養(yǎng)。6 .對不同屬性、品種和含量水平的試樣，應(yīng)有足夠的試驗(yàn)區(qū)域，予以分離檢驗(yàn), 尤其是已知具有生物危害的試樣必須分離檢驗(yàn)。防止損害一匚作人員健康和污 染環(huán)境。7 .與檢驗(yàn)無關(guān)人員不得進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室，外單位人員聯(lián)系工作，一律在辦公室接待。8 .實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，應(yīng)及時(shí)清理實(shí)驗(yàn)現(xiàn)場和用品，對染菌帶毒的器具廢棄物應(yīng)嚴(yán)格 進(jìn)行消毒無菌處理。9 .實(shí)驗(yàn)室禁止吸煙、用餐和進(jìn)食。HIV標(biāo)本采集與接收登記制度1、采樣前和接收標(biāo)本時(shí)應(yīng)核對病人身份，嚴(yán)格執(zhí)行查對制度。2、采血時(shí)應(yīng)戴好手

4、套、帽子、口罩。3、HIV標(biāo)本采集應(yīng)建立詳細(xì)的記錄本，記錄容包括：送檢單位、病人、門診號、 數(shù)量、種類（血清）、送樣者、接收者或采集者。4、采集后，應(yīng)將HIV樣本單獨(dú)分裝，勿與其它項(xiàng)目共用。艾滋病實(shí)驗(yàn)室制度為確保艾滋病實(shí)驗(yàn)室所有資料嚴(yán)格，應(yīng)遵守以下制度1、與HIV/AIDS相關(guān)檢測項(xiàng)目的所有資料均應(yīng)嚴(yán)格，包括采樣記錄與檢測記錄 的保管，報(bào)告單的發(fā)放和送確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室檢測等。2、工作人員不得向無關(guān)人員提供檢驗(yàn)結(jié)果，要妥善保存各種實(shí)驗(yàn)記錄。3、對初篩疑似陽性感染者不能告訴受檢者本人，更不能到處亂講。4、實(shí)驗(yàn)室的有關(guān)檢驗(yàn)資料，檔案、結(jié)果記錄其他人不得翻錄查閱，修改和銷毀。5、實(shí)驗(yàn)室工作人員，不能在非正式

5、場合對外提供任何結(jié)果、數(shù)據(jù)。艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室常規(guī)消毒清理工作制度1、檢測可疑樣品時(shí).，充分準(zhǔn)備好廢棄物消毒具及消毒藥、液。如：次氯酸鈉含 有效氯20005000mg/L, 75%乙靜和2%戊二醛。2、實(shí)驗(yàn)室用的吸頭及時(shí)打入消毒器皿中。3、一次性手套，隔離服更換后，應(yīng)丟棄在一次性垃圾袋。4、常用消毒方法4.1、 物理消毒方法4.1.1、 高壓蒸汽消毒，121。（2,保持1520min；4.2、 化學(xué)消毒方法4.2.1、 廢棄物缸：5000mg/L次氯酸鈉422、工作臺面及儀器表面：75%乙醇4.2.3、 溢出物：5000 mg/L次氯酸鈉4.2.4、 污染的臺面和器具：2000mg/L次氯酸鈉5

6、、實(shí)驗(yàn)室中發(fā)生可疑樣品溢出時(shí)，應(yīng)及時(shí)用75%乙醇噴灑，然后用消毒劑浸泡 的吸水物質(zhì)覆蓋10-15分鐘，最后再用消毒劑清洗該地方，擦干。6、全部實(shí)驗(yàn)工作結(jié)束后，應(yīng)對實(shí)驗(yàn)臺、儀器、設(shè)備（接觸部位）地面進(jìn)行徹底 消毒處理。7、廢棄物處理 從HIV實(shí)驗(yàn)室出來的所有廢棄物，包括不再需要的樣品、包裝 盒和其他物品，均應(yīng)視為感染性廢棄物。差錯事故處理制度1.艾滋病檢測工作人員必須要有高度的責(zé)任心和嚴(yán)肅的法制觀念，嚴(yán)防差 錯事故的發(fā)生。2,由于責(zé)任心不強(qiáng)、不認(rèn)真執(zhí)行規(guī)章制度，不遵守操作規(guī)程或技術(shù)因素而 引發(fā)檢驗(yàn)錯誤，對病人未造成嚴(yán)重后果的，稱為差錯。差錯按程度不同, 分為一般差錯和嚴(yán)重差錯。一級差錯記差錯一次

7、，二級差錯扣款50元， 三級差錯扣除當(dāng)月效益工資。一級差錯：（1）違反操作規(guī)程，導(dǎo)致標(biāo)本損壞，需重新采集標(biāo)本或由于接收標(biāo)本未認(rèn)真查對，違反查 對制度，影響檢驗(yàn)者。（2）工作環(huán)境不能做到5s管理、違反生物安全者。（3）未按時(shí)記錄結(jié)果、繪制質(zhì)控圖、當(dāng)發(fā)現(xiàn)失控時(shí)隱瞞不報(bào)者。二級差錯：（1）未按時(shí)間先后順序使用試劑，導(dǎo)致試劑過期或由于存放不當(dāng)造成試劑變質(zhì)者。（2）項(xiàng)目漏查、做錯項(xiàng)目，且標(biāo)本已處理，需再次采取標(biāo)本檢驗(yàn)者。（3）因操作不當(dāng)，導(dǎo)致設(shè)備故障，影響較大者。三級差錯：（1）漏做、錯做一般標(biāo)本的檢驗(yàn)?zāi)康?，編錯試管，標(biāo)錯標(biāo)本聯(lián)號、采錯病人標(biāo)本，寫錯檢 驗(yàn)結(jié)果并已發(fā)出報(bào)告者。（2）粗心大意寫錯報(bào)告難以挽

8、回者。（3）因責(zé)任心不強(qiáng)、管理不善導(dǎo)致陽性標(biāo)本丟失者。報(bào)告單簽發(fā)審核制度1、 各崗位的工作由本崗位人員進(jìn)行操作檢驗(yàn)，然后填寫檢驗(yàn)報(bào)告單。工作完成后，再對本崗位所有的檢驗(yàn)報(bào)告進(jìn)行核查一次，在你認(rèn)為可以發(fā)出時(shí)， 蓋上檢驗(yàn)者印章，填寫好報(bào)告日期。交給本實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人或有資質(zhì)的高年資 檢驗(yàn)人員核查簽名；但在危急情況下或單獨(dú)一人值班時(shí)（如夜班）除外。2、 沒有上崗證人員不得單獨(dú)簽發(fā)檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告單。3、 專業(yè)責(zé)任主管技師對本專業(yè)的所有報(bào)告單進(jìn)行審核，審核的基本容有：1、臨床醫(yī)師所申請的檢驗(yàn)項(xiàng)目是否已全部檢驗(yàn)，有無漏項(xiàng)：2、檢驗(yàn)結(jié)果的填寫是否清楚、正確；3、檢驗(yàn)報(bào)告單上所有容是否全部填寫完整；4、有無非常異常

9、的、難以解釋的結(jié)果；5、有無書寫錯誤；6、是否有需要復(fù)查的結(jié)果當(dāng)發(fā)現(xiàn)檢驗(yàn)結(jié)果有凝議時(shí)可指令本崗位人員對檢驗(yàn)項(xiàng)目進(jìn)行復(fù)查。確認(rèn)報(bào)告 無問題時(shí)蓋章后，方可發(fā)出報(bào)告。設(shè)備管理制度1 .由科主任或科室主管負(fù)責(zé)監(jiān)督和檢查儀器設(shè)備的使用狀況，定期校準(zhǔn)儀器的 準(zhǔn)確度。2 .各科應(yīng)對本科室儀器設(shè)備建立臺賬明細(xì)。3 .每月應(yīng)向總庫遞交儀器設(shè)備使用狀況表，并存檔。4 .貴重儀器應(yīng)由專人負(fù)責(zé)管理。5 .儀器操作前必須培訓(xùn)、考核，仔細(xì)閱讀儀器操作說明書，熟練掌握該儀器的 使用方法及維護(hù)辦法，考核合格后方可操作。6 .當(dāng)班者在使用中應(yīng)嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，遇到問題應(yīng)作及時(shí)處理，并詳細(xì)記錄。 問題嚴(yán)重者，應(yīng)及時(shí)上報(bào)科主任或主

10、管加以解決。7 .每次使用完畢，應(yīng)檢查儀器的電源、廢液傾倒情況，并詳細(xì)記錄該次使用情 況。8 .對有溫度要求的儀器設(shè)備，如冰箱冷藏室、冷凍室及恒溫培養(yǎng)箱、水浴箱等, 均應(yīng)建立登記本，每天監(jiān)測溫度。試劑管理制度1 .為了更好地管理檢驗(yàn)科試劑，由主管對檢驗(yàn)科試劑申購、品牌、質(zhì)量、價(jià)格、 使用及管理情況進(jìn)行督查。2 .每周上報(bào)周計(jì)劃，各組人員根據(jù)各崗情況，認(rèn)真、詳細(xì)填寫計(jì)劃表，務(wù)必注 明詳細(xì)的名稱、規(guī)格、數(shù)量及品牌。3 .檢驗(yàn)科試劑必須由主管審核，并負(fù)責(zé)報(bào)物流中心采購，品牌不得隨意更改。 杜絕浪費(fèi)和積壓。4 .所用的試劑必須符合質(zhì)量要求，必須有三證。不得使用過期、劣質(zhì)試劑。5 .供應(yīng)商所送的試劑由總

11、庫清點(diǎn)后才能接收，特殊試劑由檢驗(yàn)科主管清點(diǎn)后才 能在貨單上簽字，有出入者必須向科主任或物流中心主任報(bào)告，再將貨單交 物流中心統(tǒng)一結(jié)賬。6 .領(lǐng)用時(shí)應(yīng)檢查物品質(zhì)量和試劑品名、廠家、人份、批號、過期時(shí)間及外包裝 有無滲漏等，若有問題，應(yīng)及時(shí)向總庫反映。7 .冰箱不能貯存乙醛、異戊烷或類似的易燃、可燃性液體。艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)制度為確保實(shí)驗(yàn)室人員的工作安全，防止交義感染，請嚴(yán)格遵守安全防護(hù)制度 1、工作人員要完成與工作有關(guān)的充足有效的技術(shù)培訓(xùn)，要了解HIV危害，提高 全員安全意識，實(shí)驗(yàn)室安全負(fù)責(zé)人要對工作和環(huán)境的安全負(fù)責(zé)，所有工作人員都 有責(zé)任保護(hù)自己和他人的安全。3、對有放試劑、樣品血清的冰

12、箱專人管理。4、實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)熟練掌握操作知識和消毒技術(shù)。5、進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室應(yīng)穿隔離衣，戴手套，傳染性危險(xiǎn)大時(shí)應(yīng)戴雙層手套，戴防護(hù)鏡, 口罩，如防護(hù)用具破損應(yīng)及時(shí)更換，不用戴手套的手觸摸暴露的皮膚等部位。6、實(shí)驗(yàn)期間盡量避免使用利器，易碎器皿，禁止采用口腔吸液管。7、送檢樣品應(yīng)視為有潛在傳染性，由專人接管，登記，存放，提取。9、實(shí)驗(yàn)用吸頭、手套、隔離服、污染物、廢棄物均放在指定垃圾袋中統(tǒng)一進(jìn)行 消毒，焚燒到無害化處理。10、不得在實(shí)驗(yàn)室中吃食物，化妝打扮等，不得在實(shí) 驗(yàn)室會客。11、實(shí)驗(yàn)室用品（包括工作服）不得用于其他用途，不可將私人和無關(guān)的物品帶 入實(shí)驗(yàn)室。12、工作完畢，脫去手套后洗手，再脫去工作

13、服，用肥皂和流動水洗手，洗手后 離開實(shí)驗(yàn)室。13、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，要對工作平臺、儀器、地面進(jìn)行消毒處理。14、遇有意外事故，應(yīng)立即口頭和書面報(bào)告上級部門，并進(jìn)行局部處理，如含氯 消毒劑浸泡傷口，洗眼，漱口等，如遇高危意外事故，除進(jìn)行局部處理外，同時(shí) 應(yīng)立即采取預(yù)防措施，包括對其隨訪，HIV檢測，休息并暫離崗位二個月，按醫(yī) 囑服用HIV藥物等。艾滋病病毒職業(yè)暴露預(yù)防處理方案為維護(hù)醫(yī)務(wù)人員及其他部門有關(guān)人員的職業(yè)安全，有效預(yù)防在工作中發(fā)生職 業(yè)暴露感染艾滋病病毒，一旦發(fā)生職業(yè)暴露后最大限度的避免或減少艾滋病病毒 感染，特制定本方案。一、職業(yè)暴露（-）職業(yè)暴露是指醫(yī)務(wù)人員以及有關(guān)工作人員，在從事艾滋病防

14、治工作及相關(guān) 工作的過程中意外被艾滋病毒感染者或者艾滋病患者的血液、體液污染了皮膚或 者粘膜，或者被含有艾滋病病毒的血液、體液污染了的針頭及其他銳器刺破皮膚, 有可能被艾滋病病毒感染的情況。（二）數(shù)據(jù)分析表明，醫(yī)護(hù)和預(yù)防保健等人員對艾滋病病毒和艾滋病患者從事醫(yī) 療和實(shí)驗(yàn)檢測活動是比較安全的。執(zhí)行嚴(yán)格的安全操作及防護(hù)措施，醫(yī)護(hù)及檢驗(yàn) 等人員的暴露事件是可以避免的。二、職業(yè)暴露的預(yù)防1、醫(yī)務(wù)人員對所有病人的血液、體液（包括羊水、心包液、胸腔液、腹腔液、腦 脊液、滑液、陰道分泌物等人體物質(zhì)，下同）及被血液、體液污染的物品均視為 具有傳染性的病原物質(zhì)，在接觸這些物質(zhì)時(shí)，必須采取防護(hù)措施。2、醫(yī)務(wù)人員進(jìn)

15、行有可能接觸血液、體液的診療和護(hù)理操作時(shí)必須戴手套，操作 完畢，脫去手套后立即洗手，必要時(shí)進(jìn)行手消毒。3、在診療、護(hù)理操作過程中，有可能發(fā)生病人血液、體液飛濺到醫(yī)務(wù)人員的面 部時(shí)，醫(yī)務(wù)人員應(yīng)當(dāng)戴手套、具有防滲透性能的口罩、防護(hù)眼鏡；有可能發(fā)生血 液、體液大面積飛濺或者有可能污染醫(yī)務(wù)人員的身體時(shí)，還應(yīng)當(dāng)穿戴具有防滲性 能的隔離衣或者圍裙。4、醫(yī)務(wù)人員手部皮膚發(fā)生破損，在進(jìn)行有可能接觸病人血液、體液的診療和護(hù) 理操作時(shí)必須戴雙層手套。5、醫(yī)務(wù)人員在進(jìn)行侵襲性診療、護(hù)理操作過程中，要保證充足的，并特別注意 防止被針頭、縫合針、刀片等銳器刺傷或劃傷。6、使用后的銳器應(yīng)當(dāng)直接放入耐刺、防滲漏的利器盒，或

16、者利用針頭處理設(shè)備 進(jìn)行安全處置，也可以使用具有安全性能的注射器、輸液器等醫(yī)用銳器，以防刺 傷。7、禁止將使用后的一次性針頭重新套上針頭套。禁止用手直接接觸使用后的針 頭、刀片等銳器。三、艾滋病病毒暴露后的預(yù)防處理（一）緊急局部處理：1、用肥皂液和流動水清洗污染的皮膚，用生理鹽水沖洗粘膜。2、如有傷口，應(yīng)當(dāng)在傷口旁端輕輕擠壓，盡可能擠出損傷處的血液，用再肥皂 液和流動清水沖洗；禁止進(jìn)行傷口的局部擠壓。3、受傷部位的傷口沖洗后，應(yīng)當(dāng)用消毒液，如70%乙醇或者0.5%碘伏進(jìn)行消毒, 并包扎傷口；被暴露的粘膜，應(yīng)當(dāng)反復(fù)用生理鹽水沖洗干凈。（二）暴露后的報(bào)告及處理程序1、醫(yī)護(hù)人員發(fā)生艾滋病病毒職業(yè)暴露

17、后，要立即上報(bào)醫(yī)院領(lǐng)導(dǎo)（具體由醫(yī)院確 定院程序，注意給暴露者）。及時(shí)報(bào)告天山區(qū)疾控中心，組織專家對暴露的級別 和暴露源的病毒教量水平進(jìn)行評估和確定。2、醫(yī)務(wù)人員發(fā)生艾滋病病毒職業(yè)暴露后，區(qū)疾控中心應(yīng)當(dāng)會同相關(guān)醫(yī)療衛(wèi)生單 位對其進(jìn)行隨訪和咨詢。隨訪和咨詢的容包括：在暴露后第4周、第8周、第 12周及6個月時(shí)對艾滋病病毒抗體進(jìn)行檢測，對服用藥物的毒性進(jìn)行監(jiān)控處理, 觀察和記錄艾滋病病毒感染的早期癥狀等。不進(jìn)行暴露后預(yù)防用藥者，也要定期 檢測艾滋病病毒抗體，檢測時(shí)間同上。3、在對艾滋病病毒職業(yè)暴露事件的整個處理過程中，必須始終做好工作。凡涉 及暴露者個人的相關(guān)資料，不得向無關(guān)單位和人員泄露。四、暴露

18、后預(yù)防性用藥對發(fā)生艾滋病病毒職業(yè)暴露的醫(yī)務(wù)人員應(yīng)當(dāng)根據(jù)暴露源病毒教量水平實(shí)施 預(yù)防性用藥方案。預(yù)防性用藥應(yīng)當(dāng)在發(fā)生艾滋病病毒職業(yè)暴露后盡早開始，最好在4小時(shí)實(shí)施, 最遲不得超過24小時(shí)；即使超過24小時(shí)，也應(yīng)當(dāng)實(shí)施預(yù)防性用藥。暴露后預(yù)防性用藥的推薦方案：1、基本用藥程序：兩種逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，使用常規(guī)治療劑量，連續(xù)服用28天。 如雙汰芝（AZT與3TC聯(lián)合制劑）300 mg/次，每日2次，用藥時(shí)間為連續(xù)服用 28天?；騾⒖伎共《局委熤笇?dǎo)方案。本程序適用于輕度低危暴露。2、強(qiáng)化用藥程序：基本用藥程序加一種蛋白酶抑制劑，如佳息患或利托那韋。均使用常規(guī)治療 劑量，連續(xù)服用28天。本程序適用于嚴(yán)重暴露。

19、鑒于醫(yī)務(wù)人員暴露后的感染率很低而用藥的毒、副作用很大，所以應(yīng)嚴(yán)格掌 握用藥的指征。第二部分標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程第二章樣品采集與處理一、樣本采集1、接患者申請單后，填寫血樣采集記錄，記錄包括患者日期、年齡、門診號、 采集人簽名等。2、用帶分離膠的負(fù)壓管采集一定量的靜脈血，顛倒混勻56次，室溫下自然放 置半小時(shí)，待血液凝固、血塊收縮后再用3000r/min離心15min。二、標(biāo)本采集注意事項(xiàng)1、樣本采集嚴(yán)格按靜脈穿刺規(guī)操作。2、采集樣本時(shí)應(yīng)注意安全，直接接觸HIV感染/艾滋病病人血液的操作，應(yīng)戴雙 層手套，里層是PE手套，外層為乳膠手套。三、樣本保存在一周檢測的樣本，可存放于28；在一周以后檢測的樣本，須

20、存放于-20 o四、樣本運(yùn)送1、樣本運(yùn)送一般為血清或血漿，不運(yùn)送全血。2、容器要求：血清應(yīng)置于帶蓋的1.5ml離心管，管外應(yīng)有明顯的標(biāo)記，與門 診號要清晰；在離心周圍應(yīng)墊有可緩沖吸水材料，以免破碎；隨樣品應(yīng) 附有送檢單，送檢單應(yīng)與樣本分開放置。外層容器要求耐受性好、防滲漏、 容納并保護(hù)第一層容器。3、天氣過熱，需采用干冰或冰壺冷藏運(yùn)輸。第二章標(biāo)準(zhǔn)操作程序一、金豪【方法】雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法【原理】本試劑盒采用HIV特異性抗原gp160和gp36等包被微孔反應(yīng)板，用 gp36、gp41標(biāo)記辣根過氧化物酶、采用雙抗原夾心法捕獲人血清、血漿標(biāo)本中 的HIV （1+2）抗體。【HIV篩查試驗(yàn)操作程序】

21、（一）試驗(yàn)前準(zhǔn)備：1、試驗(yàn)開始前將試劑和樣品放置于室溫（1823）半小時(shí)。2、換隔離衣，戴好帽子、口罩、雙層手套。3、緩沖液配制：用蒸儲水1： 25倍稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配?；蛞后w有結(jié)晶，應(yīng)放置在 37c直至溶解。（二）試驗(yàn)操作：1、裝好所需使用數(shù)目的孔條。設(shè)空白對照孔2孔，2個陰性對照孔，2個HIV-1 陽性對照孔。取陽性對照和陰性對照分別充分混勻各503加入對照孔中，空白 對照孔只加樣品稀釋液。2、每檢測孔加入樣品稀釋液50ul,待檢樣品50ul,可振搖510S。3、覆蓋粘膠紙，37±2孵育30min。4、置洗板機(jī)上洗滌5遍（用洗液將反映孔完全加滿，靜置30S,共洗滌5遍， 洗完后孔上方

22、及底部不應(yīng)殘存液體，禁止在濾紙上拍干）。5、每孔加酶結(jié)合物1003,取新粘膠紙覆蓋反應(yīng)板，37±2孵育30min。6、同步驟4。7、每孔加入底物緩沖液50ul, TMB50ul,混勻，不必覆蓋粘膠紙，37±2孵育1 Omino8、每孔加入50ullM硫酸終止反應(yīng),充分混勻。9、在2h置于酶標(biāo)儀讀數(shù)，單波長450nm,或雙波長450/630nm測OD值。（三）試驗(yàn)結(jié)果1、NC<0.022、Cut。任值= 0.1+NC=0.123、標(biāo)本OD值小于Cut off為陰性，大于或等于Cut off為陽性（四）報(bào)告：對呈陰性反應(yīng)的樣品，可由實(shí)施檢測的實(shí)驗(yàn)室出具HIV抗體陰性 報(bào)告

23、；對呈陽性反應(yīng)的樣品，須進(jìn)行復(fù)檢，不能出陽性報(bào)告。二、科華生物【方法】雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法【原理】本試劑盒采用HIV特異性抗原gp160和gp36等包被微孔反應(yīng)板，用 gp36、gp41標(biāo)記辣根過氧化物酶、采用雙抗原夾心法捕獲人血清、血漿標(biāo)本中 的HIV （1+2）抗體。HIV篩查試驗(yàn)操作程序】（一）試驗(yàn)前準(zhǔn)備：1 .試驗(yàn)開始前將試劑和樣品放置于室溫（1823C）半小時(shí)。2 .換隔離衣，戴好帽子、口罩、雙層手套。3 .緩沖液配制：用蒸儲水1： 25倍稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配?；蛞后w有結(jié)晶，應(yīng)放置在 37直至溶解。（二）試驗(yàn)操作：1、裝好所需使用數(shù)目的孔條。設(shè)空白對照孔2孔，2個陰性對照孔，3個HIV-1

24、 陽性對照孔。2、每孔加入lOOul待檢樣品及對照（對照要后加），可振搖15S。3、覆蓋粘膠紙，37±2孵育60±2min。4、置洗板機(jī)上洗滌5遍（用洗液將反映孔完全加滿，靜置30S,共洗滌5遍， 洗完后孔上方及底部不應(yīng)殘存液體，禁止在濾紙上拍干）。5、每孔加酶結(jié)合物1003,取新粘膠紙覆蓋反應(yīng)板，37±2孵育30min。6、同步驟4。7、每孔加入底物緩沖液50ul, TMB50ul,混勻,不必覆蓋粘膠紙,37±2孵育lOmino 8、每孔加入50ul IM硫酸終止反應(yīng),充分混勻。9、在2h置于酶標(biāo)儀讀數(shù)，單波長450nm,或雙波長450/630nm測O

25、D值。（三）試驗(yàn)結(jié)果1、NC<0.082、011（值=陽性對照值、10%3、標(biāo)本OD值小于Cut off為陰性，大于或等于Cut。仟為陽性（四）報(bào)告：對呈陰性反應(yīng)的樣品，可由實(shí)施檢測的實(shí)驗(yàn)室出具HIV抗體陰性 報(bào)告；對呈陽性反應(yīng)的樣品，須進(jìn)行復(fù)檢，不能出陽性報(bào)告。三、英科新創(chuàng)【方法】膠體金法【原理】本試劑盒采用膠體金免疫技術(shù)和層析原理，定性測定血清樣本中的 HIV1/2型抗體。血清陽性樣本中HIV抗體與膠體金標(biāo)記抗原結(jié)合形成復(fù)合物， 由于層析作用復(fù)合物沿紙條向前移動，經(jīng)過檢測線時(shí)與預(yù)包被的重組Au-HIV（1+2） Ag則在對照線處與抗HIV單克隆抗體結(jié)合而富集顯色。陰性標(biāo)本 則僅在對照

26、線處顯色，30分鐘觀察結(jié)果即可。HIV篩查試驗(yàn)操作程序】（一）試驗(yàn)前準(zhǔn)備：1、試驗(yàn)開始前將試劑和樣品放置于室溫（1823）半小時(shí)，編號。2、戴好帽子、口罩、雙層手套。3、將所需測試卡從包裝盒中取出，置于臺面上。（二）試驗(yàn)操作：1、用微量加樣器取603樣本血清，加到測試卡的加樣處。2、加樣后，陽性標(biāo)本可在130分鐘檢出。30分鐘后觀察結(jié)果將造成影響。（三）試驗(yàn)結(jié)果陽性：測試卡在檢測區(qū)和對照區(qū)位置出現(xiàn)兩條紫紅色條帶。如果檢測的紫紅色條 帶隱約可見，應(yīng)用酶免試劑重復(fù)檢測。陰性：測試卡只在對照區(qū)位置出現(xiàn)一條紫紅色條帶。 失效：對照區(qū)未出現(xiàn)紫紅色條帶。【方法】雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法【原理】采用雙抗原夾心兩

27、步法檢測人血清或血漿樣本中的HIV抗體。當(dāng)待檢 樣本中存在HIV抗體時(shí)，在反應(yīng)過程中形成“固相HIV抗原一HIV抗體一酶標(biāo) 記HIV抗原”的免疫復(fù)合物，加入底物后形成顯色反應(yīng)。【HIV篩查試驗(yàn)操作程序】（一）試驗(yàn)前準(zhǔn)備：1 .試驗(yàn)開始前將試劑和樣品放置于室溫（1825C）半小時(shí)，編號。2 .換隔離衣，戴好帽子、口罩、雙層手套。3 .緩沖液配制：用蒸儲水1： 19倍稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配。或液體有結(jié)晶，應(yīng)放置在 37直至溶解。（二）試驗(yàn)操作1 .按順序分別在相應(yīng)孔加入50ul待測樣品及陰、陽性對照血清。2 .覆上封板膜，置37c溫育30min.3 .用洗滌液充分洗滌5次（每次應(yīng)保持3060秒浸泡時(shí)間），

28、扣干。4 .分別在每孔中加入酶標(biāo)抗原lOOul。5 .覆上封板膜，置37c溫育30mino6 .用洗滌液充分洗滌5次（每次應(yīng)保持3060秒浸泡時(shí)間），扣干。7 .每孔加底物A、B各50ul,輕拍混勻，覆上封板膜，置37暗置20min。8 .每孔加入終止液50ul。9 .用酶標(biāo)儀測定。（三）試驗(yàn)結(jié)果L陽性對照值應(yīng)大于陰性對照值0.6以上且陰性對照值小于0.1方可認(rèn)為本實(shí)驗(yàn) 有效。2 .Cutoffvalue=0.1+陰性對照均值（若陰性對照小于0.05以0.05計(jì)）3 .樣品OD值大于或等于臨界值為初篩陽性，小于臨界值為陰性。第三章結(jié)果報(bào)告與注意事項(xiàng)【復(fù)檢試驗(yàn)】對初篩呈陽性反應(yīng)的樣品用原有試劑和

29、另外一種不同原理或不同廠家的篩 查試劑重復(fù)檢測。如兩種試劑復(fù)測均呈陰性反應(yīng)，則報(bào)告HIV抗體陰性；如均 呈陽性反應(yīng)，或一陰一陽，需送艾滋病確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確認(rèn)。(具體詳見流程圖)【篩試驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告】對HIV抗體篩查試驗(yàn)，呈陰性反應(yīng)者可出具“HIV抗體陰性”報(bào)告。對初篩試驗(yàn)呈陽性反應(yīng)者不能出陽性報(bào)告，可出具“HIV抗體待復(fù)查”報(bào)告?！境鹾Y試驗(yàn)呈陽性反應(yīng)樣品的轉(zhuǎn)送】如需送上級實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行復(fù)測或確認(rèn)，需要填寫“HIV抗體復(fù)測送檢單”，經(jīng)1 名檢驗(yàn)人員和1名具有中級以上技術(shù)職稱的人員審核簽字，與血樣品一同送天山 區(qū)疾控中心實(shí)驗(yàn)室，再轉(zhuǎn)送市疾控中心艾滋病確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室，或在本實(shí)驗(yàn)室復(fù)檢后 直接送確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室?！静?/p>

30、作臺消毒處理】用35%84消毒液擦拭臺面，如工作臺被溢出物污染，則用消毒液浸泡30 分鐘后，再行擦拭?！痉块g消毒】每日用紫外線照射3060min【方法學(xué)特性及注意事項(xiàng)】a) 試劑盒430干燥保存。有效期16個月。b) 抗凝全血應(yīng)采用EDTA,樣品應(yīng)避免溶血。c) 樣品應(yīng)在收集后7天檢測，28c保存，如果大于7天，應(yīng)冷凍保存。d) 測試卡僅用于HIV抗體的現(xiàn)場初篩，檢測陽性必須用ELISA方法進(jìn)一步確認(rèn)。e) 樣本的加樣應(yīng)使用微量加樣器準(zhǔn)確加入。0實(shí)驗(yàn)環(huán)境應(yīng)保持一定濕度、避風(fēng)，1825進(jìn)行。g)本試劑盒應(yīng)視為有感染源的物品，應(yīng)按生物危險(xiǎn)樣品處理?！狙寮訕颖怼恳姼郊?。每次檢測完畢需填寫血清加樣表

31、，由審核者簽字復(fù)核，存檔，以備查,第三部分設(shè)備SOP文件一、普朗自動酶標(biāo)儀DNM.96021 .儀器簡介RT-2100C是一臺網(wǎng)絡(luò)化的酶標(biāo)免疫測試分析儀器，可廣泛用于傳染病、腫瘤標(biāo)志物、 血液病、艾滋病、分泌障礙測定等診斷領(lǐng)域。2 .儀器原理3 .環(huán)境要求：1）避免直曬2） 溫度：1040,濕度 20%85%3）電源必須接地良好4）電源穩(wěn)定，禁止與大功率用電器共用電源4 .操作步驟5 . 1開機(jī)打開儀器背面的電源開關(guān)，等待約10秒鐘，開機(jī)初始化流程要完成以下工作:1）系統(tǒng)程序加載2）系統(tǒng)自檢3）讀取用戶數(shù)據(jù)4）前端初始化5）等待光源穩(wěn)定：儀器需要等待光源穩(wěn)定約1分鐘左右。6）光路自檢：期間濾光

32、片輪會轉(zhuǎn)動，酶標(biāo)板將往返走板一次。開機(jī)結(jié)束后，進(jìn)行主菜單窗口。4. 2項(xiàng)目設(shè)置在主菜單中按項(xiàng)目設(shè)置鍵，進(jìn)入項(xiàng)目列表窗口。5. 2. 1新建與更改項(xiàng)目按新建或更改鍵，添加或更改項(xiàng)目，如果項(xiàng)目數(shù)己經(jīng)超過100,將無法創(chuàng)建新項(xiàng)目。按 圖所示設(shè)置參數(shù)設(shè)置。1）項(xiàng)目名稱：該項(xiàng)必須輸入，注意不要與已經(jīng)存在的項(xiàng)目名重復(fù)。2）試劑名稱：根據(jù)所用試輸入，也可以不輸入。3）波長：從列表中選取，注意主波長和次波長不能重復(fù)。4）計(jì)算方法：從列表中選取5）雙樣本：若選擇雙樣本，則布板時(shí)每個樣本孔的相鄰孔自動設(shè)置為重復(fù)孔，計(jì)算時(shí)取兩 者吸光度的平均值。6）空白上限：職由試劑要求空白必須不超過0.05,則空白應(yīng)設(shè)為0.05

33、,測試時(shí)如果空白孔 吸光度值超過設(shè)定的上限，系統(tǒng)會提示用戶“空白也吸光度值過高”。7）定量計(jì)算，根據(jù)試劑說明輸入：a）標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)量：選擇28個標(biāo)準(zhǔn)品。b）濃度單位：從列表中選擇。c）雙標(biāo)準(zhǔn)：若選擇雙標(biāo)準(zhǔn)：則布板時(shí)每個標(biāo)準(zhǔn)孔的相鄰孔被自動設(shè)置為重復(fù)孔，計(jì)算 時(shí)取兩者吸光度的平均值。d）標(biāo)準(zhǔn)品吸光度：雙擊標(biāo)準(zhǔn)品濃度列表項(xiàng)，可以在彈出窗口中輸入濃度值，注意標(biāo)準(zhǔn) 品濃度順序必須為由小到大。8）計(jì)算，按試劑說明在窗口中輸入：a） Cut-off公式系數(shù)：各鐘試劑的定性公式如有不同形式如S/N, （N-S）/N等均可轉(zhuǎn) 換為 S/ （X*N+Y*P+Fac）的形式。b）陰性對照和陽性對照的吸光度圍：對照的吸

34、光度超出上限和下限進(jìn)分別按上限和下 限計(jì)算。例如有試劑要求陰性對照小于0。05按0。05計(jì)，則陰性對照下限應(yīng)設(shè)為 0。05»c）對照：可以任意設(shè)置對照，但對照的數(shù)量不超過5個，計(jì)算時(shí)取所有對照吸光度的 平均值。9）陰陽性判定設(shè)置窗口在此窗口中輸入判定陰性和陽性的臨界值，吸光度模式下，臨界值為吸光度值： Cut-off方式下，臨界值為樣本與Cut-off值的比值，定量計(jì)算方式下，臨界值為濃度值。 定性方式分為3類：a）正向閾值模式：陰性陰性臨界值，陽性陽性臨界值，兩者之間為灰區(qū)，在此區(qū)間的 樣本判定為可疑。b）反向閾值模式：陰性,陰性臨界值，陽性W陽性臨界值。c）不需要判定陰陽性：在定

35、性方式中選擇“無。所有參數(shù)設(shè)置完畢，按完成鍵。4. 3樣品測試在主菜單中按樣品測試鍵，進(jìn)入如下窗口：a）布板方向：橫向或縱向b）進(jìn)板方式：選擇連續(xù)方式（V5秒）提高測量速度，選擇步進(jìn)方式（V15秒）獲得更高 的測量精度。c）振板參數(shù)：振板速度分快速，中速和慢速3檔，振板時(shí)間卜60秒，也可以選擇不振板。設(shè)定完以上參數(shù)后，按確定鍵，進(jìn)入布板窗口。4. 4布板4. 4. 1樣本任意點(diǎn)擊欲設(shè)置為樣本的孔位，樣本號從1起自動遞增并顯示在該孔位上。如果要修改樣本 號，可再次點(diǎn)擊該孔位。4. 4. 2空白空白孔在項(xiàng)目測試中用以吸光度調(diào)零，即其它孔位的吸光度均要減去空白孔吸光度值。根據(jù) 不同項(xiàng)目測試的要求，可

36、以選擇是否設(shè)定空白。舊空白的保存和使用：空白孔的測試結(jié)果將自動保存，如果在同一項(xiàng)目的后續(xù)測試中不重新 設(shè)定空白，則系統(tǒng)自動用舊空白進(jìn)行計(jì)算。第個項(xiàng)目只允許設(shè)置一個空白孔，如果在設(shè)置空白孔時(shí)多次點(diǎn)擊不同的孔位，那么只有最后 一次點(diǎn)擊的孔位被設(shè)定為空白孔，前面設(shè)置的空白孔被自動清除。4. 4. 3依次設(shè)置陰性對照和陽性對照。按開始鍵，系統(tǒng)確認(rèn)布板無誤后，開始走板測試。走板結(jié)束，系統(tǒng)自動進(jìn)入吸光度顯示。5. 5關(guān)機(jī)在主菜單中按關(guān)機(jī),系統(tǒng)顯示關(guān)機(jī)確認(rèn)窗口，按YES執(zhí)行關(guān)機(jī)程序，按NO返回主菜單。6. 儀器維護(hù)1）保持儀器工作環(huán)境的清潔。2）儀器表面的清潔，可以用中性清潔劑和濕布擦拭。3）液晶顯示器請用

37、柔軟的布清潔4）勿讓任何溶劑，油脂類，腐蝕性物質(zhì)接觸儀器。二、DG3080自動洗板機(jī)1目的規(guī)洗板機(jī)的操作程序，保證洗板機(jī)的正常狀態(tài)。2適用圍本實(shí)驗(yàn)室DNM-9602洗板機(jī)的操作。3操作人員本實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)人員。4操作步驟4.1 拔掉廢液瓶口的塞子（接有與洗板機(jī)相連的廢液管），倒掉廢液瓶的廢液，再把塞子安 緊在廢液瓶口上。注意不要讓廢液管擰緊，以保證廢液管的通暢。4.2 擰開洗液瓶的蓋子（接有與洗板機(jī)相連的洗液管），倒掉前一天洗液瓶里剩的洗液，倒 進(jìn)新配的洗液。擰緊蓋子，注意不要讓洗液管擰緊，以保證洗液管的通暢。43保證待洗反應(yīng)板所有的孔處于同一水平位置，以免孔邊緣過高碰到洗板機(jī)的吸液針。4.4 開

38、機(jī)插上電源，打開電源開關(guān)（按后面板【POWER】鍵），儀器顯示“儀器復(fù)位中，請稍候”儀器 初始化結(jié)束后。儀器顯示：“就緒，當(dāng)前程序#X請選擇功能鍵'X處顯示的數(shù)字(用015 之間)表示當(dāng)前準(zhǔn)備就緒的是第幾號程序。此時(shí)儀器正處于待機(jī)狀態(tài)，用戶可進(jìn)行下一步操 作。4.5 預(yù)洗在待機(jī)狀態(tài)下，使預(yù)洗槽處于清洗頭下方，按下【預(yù)洗/返回】鍵，清洗頭抬起，電磁閥打 開，洗液進(jìn)入預(yù)洗槽。清洗頭將對預(yù)洗槽洗滌3次，清洗容量為400UL,但清洗時(shí)沒有暫 停和浸泡步驟。4.6 編程按下【編程】鍵.進(jìn)入編程菜單界面。畫面最左邊有閃動的指示光標(biāo)“一”，按下【門鍵或 【口鍵移動所需要設(shè)定的參數(shù)前，按下【確定】鍵，

39、即選中了該參數(shù)項(xiàng)，再按下【門或【1】 鍵設(shè)定該參數(shù)的參數(shù)值。4.7 運(yùn)行按下【運(yùn)行】鍵，系統(tǒng)將立即按照用戶設(shè)定的程序執(zhí)行。4.8 關(guān)機(jī)4.8.1 日常關(guān)機(jī) 最后一次洗板結(jié)束:后，將電源開關(guān)置于【OFF】位：并將酶標(biāo)板托盤上的 預(yù)洗槽用蒸馀水裝滿，使清洗頭浸入預(yù)洗槽。4.8.2 長期關(guān)機(jī)將長時(shí)間不使用洗板機(jī)時(shí)，先用蒸鐲水沖洗一遍整個系統(tǒng)，再進(jìn)行日常關(guān) 機(jī)：并且傾倒、清洗廢液瓶，保持液體干燥，以免清洗液中的緩沖鹽類結(jié)晶而堵塞清洗頭。 5鍵盤功能5.1 【編程】：進(jìn)入編程菜單。用來設(shè)定儀器的運(yùn)行方式及各項(xiàng)參數(shù)。5.2 【運(yùn)行】：執(zhí)行先定的程序。(T1：處于待機(jī)狀態(tài)時(shí)，此鍵用來順次遞增程序號：處于編程

40、狀態(tài)時(shí)，用來使光標(biāo)“一”上移。(11：處于待機(jī)狀態(tài)時(shí)，此鍵用來順次遞減程序號：處于編程狀態(tài)時(shí)，用來使光標(biāo)“一”下移。5.3 【復(fù)位】：終止當(dāng)前操作，使儀器恢復(fù)到開機(jī)狀態(tài)。5.4 【預(yù)洗/返回】：處于待機(jī)狀態(tài)時(shí)，此鍵用來使儀器執(zhí)行預(yù)洗程序；處于編程狀態(tài)時(shí)，此 鍵可使顯示面板界而回到待機(jī)狀態(tài)5.5 【確定】：確認(rèn)光標(biāo)所指示的參數(shù)項(xiàng)。6編制洗滌程序編程菜單中包括清洗方式、清洗頭數(shù)、清洗條數(shù)、清洗容量、加洗次數(shù)、清洗次數(shù)、暫停時(shí) 間、浸泡時(shí)間8種參數(shù)項(xiàng)目。6.1 清洗方式，條洗和板洗。6.2 清洗頭數(shù)，可設(shè)定為12頭或8頭。6.3 清洗條數(shù)，或設(shè)定在卜12圍，該參數(shù)設(shè)置與清洗頭數(shù)有關(guān)，當(dāng)頭數(shù)為12時(shí)條

41、數(shù)最大值 為8。反之當(dāng)頭數(shù)為8時(shí)，條數(shù)最大值為12。6.4 清洗容量,可在 50UL、100UL、150UL、200UL. 25OUL、300UL、35OUL、400UL、 450UL中選擇設(shè)定。6.5 加洗次數(shù)，加洗次數(shù)可在13雨設(shè)定。6.6 清洗次數(shù)，清洗次數(shù)可在110圍設(shè)定。6.7 暫停時(shí)間，當(dāng)清洗方式為知洗時(shí)，清洗頭在注滿前標(biāo)板每行后啟動暫停，時(shí)間可在010 秒任意設(shè)定，增量為1秒：當(dāng)清洗方式為板洗時(shí)，清洗頭在每次過板注滿水后啟動暫停，時(shí) 間可在060秒任意設(shè)定，增量為5秒。6.8 浸泡時(shí)間，一般清洗過程中，清洗頭在酶標(biāo)板最后一行中注滿水后，即啟動浸泡功能。 浸泡時(shí)間可在0300秒任意

42、設(shè)定，增量為30秒，但在加洗程序中不能啟動浸泡功能。7維護(hù)保養(yǎng)程序7.1 平常不用時(shí)，拔掉電源插頭。7.2 每天洗板機(jī)工作結(jié)束時(shí)，要對外其進(jìn)行清潔，用濕抹布擦洗洗板機(jī)的外壁及載物臺，以 保證其潔凈。用蒸馀水將所有的管道清洗一遍，防止洗液的結(jié)晶堵塞管道。7.3 及時(shí)倒棄廢液，以免廢液瓶過滿致使廢液回流而造成洗板機(jī)的故障。7.4 保證待洗的反應(yīng)板的孔邊緣不要過高且水平，以免造成吸液針損傷。7.5 定期將洗液及廢液管道拆卸下來進(jìn)行沖洗，以保證管道的通暢。8儀器消毒8.1 消毒試劑：甲醛溶液10%；酒精70%；戊二醛溶液4%。8.2 消毒步驟8.2.1 準(zhǔn)備10%甲醛溶液200ml, 4%戊二醛溶液2

43、00ml, 70%酒精一瓶，若干醫(yī)用棉球。8.2.2 清洗儀器8.2.2.1 給儀器注入蒸馀水，抬起清洗頭，用戊二醛溶液注滿托盤預(yù)洗槽。8.2.2.2 用清洗頭抽干托盤預(yù)洗槽，再用蒸儲水注滿托盤預(yù)洗槽，抽干。8.2.2.3 移走酶標(biāo)板架和清洗頭，將它們浸泡在戊二醛溶液中24小時(shí)。8.2.2.4 傾倒液體瓶。8.2.2.5 切斷電源，撥掉電源線。8.2.3 儀器消毒1.1 3.1用浸透70%酒精的棉球?yàn)閮x器外殼消毒。1.2 拆離主機(jī)和液體瓶，并打開液體瓶瓶蓋，將儀器放入一個大的塑料袋中。1.3 把在10%甲醛溶液中浸透的棉球放入塑料袋。1.4 4密封塑料袋24小時(shí)。8.3消毒后期處理8.3.1 從袋中取出儀器。8.3.2 用中性清洗液清潔儀器。8.3.3 用70%酒精擦去污染物質(zhì)。8