瀉心湯不同煎煮法對涼血止血功效的影響

1、瀉心湯不同煎煮法對涼血止血功效的影響潘寶峰、全嬿嬿、高斌、杜程昊、陳吉、卞青、高惠峰指導教師：李福鳳（上海中醫(yī)藥大學01級七年制臨床醫(yī)學方向，上海201203）摘要 目的：觀察瀉心湯不同煎煮法對熱盛小鼠模型涼血止血功效的影響。方法：用溫熱藥加補氣藥造成小鼠熱證，分別灌以沸水浸泡而成的瀉心湯和普通煎煮法而成的瀉心湯進行治療。測定服用用不同煎煮法瀉心湯小鼠的凝血時間，PT、APTT、Fbg。結(jié)果：在凝血時間上各組存在差異（p<0.05），而PT、APTT、Fbg各組卻不存在差異（p>0.05）。結(jié)論：這可能與造模時間過短，尚未引起相應(yīng)的病理生理改變。關(guān)鍵詞 三黃瀉心湯；中藥煎煮法；涼血

2、止血；凝血古人對中藥藥物的煎煮十分講究，例如古方銀翹散方后注中要求：“共杵為散，每服六錢，鮮葦根湯煎，香氣大出，即取服，勿過煮。肺藥取輕清，過煮則味厚而入中焦也?！卑谆?、竹葉石膏湯的煎煮法中要求應(yīng)煮至“米熟”（方內(nèi)有粳米）1。李時珍說：“凡服湯藥，雖品物專精，修治如法，而煎煮者，魯莽造次，水火不良，火候失度則藥亦無功?！鼻叭藢χ兴幖逯笕绱酥匾?，其原因就在于煎煮方法會影響到藥物的療效?，F(xiàn)代臨床除了對中藥先煎、后下、包煎、烊化等仍有強調(diào)以外，已經(jīng)對其它的煎煮方面不太重視，關(guān)于煎煮方法對方藥影響的研究也較少，因此我們選取瀉心湯，觀察不同煎煮法對涼血止血功效的影響。瀉心湯出自金匱要略，其方組成為大黃

3、、黃芩、黃連，主治心火亢盛、迫血妄行。傷寒論中有大黃黃連瀉心湯，主治“心下痞，按之濡，其脈關(guān)上浮者”，據(jù)林億方后注，湯中當有黃芩，現(xiàn)多數(shù)醫(yī)家也認為湯中當有黃芩。故兩方組成相同，但兩方的煎煮方法卻有異，金匱要略中“以水三升，煎取一升”，傷寒論中則是“以麻沸湯二升，漬之須臾，絞去滓”。從張仲景的文中可知，同一方的不同煎煮方法可能直接影響其主治。本次實驗我們對該方不同煎煮法對于涼血止血功效是否存在差異？存在多大差異？作一探索。1. 材料與方法1.1 動物及分組選用雄性昆明種小鼠40只，由上海中醫(yī)藥大學動物房提供，體重為20g至30g。將小鼠隨機分為空白對照組和熱盛模型組，空白對照組每天灌服普通飲用水

4、1ml/只，熱盛模型組每天灌服造模藥1ml/只。所有小鼠均以普通飼料和飲用水喂養(yǎng)。1.2 實驗試劑實驗所有藥物均購自上海市徐匯區(qū)中醫(yī)特色門診藥房，配制比例如下：（1）造模藥：附子、干姜、肉桂、黨參、黃芪、白術(shù)為1：1：1：1：1：1，制成的0.72g/ml水煎劑。先加水浸泡20分鐘后，用武火煎開，再用文火煎20分鐘，取藥汁，并在其中溶解普通蜂皇漿巧克力7塊，用兩層紗布過濾后，濃縮成所需藥量，放入4冰箱保存。（2）治療藥：瀉心湯按大黃：黃芩：黃連為2：1：1制成2g/ml水煎劑和以沸水浸泡而成的湯劑。水煎劑先加水浸泡20分鐘后，用武火煎開，再用文火煎20分鐘，取藥汁，沸水浸泡劑用100沸水浸泡藥

5、材5分鐘后取藥汁。兩瀉心湯用兩層紗布過濾后，濃縮成所需藥量，放入4冰箱保存。凝血指標檢測試劑，包括凝血酶原時間（PT）測定試劑盒、活化部分凝血活酶時間（APTT）測定試劑盒、纖維蛋白原（Fbg）測定試劑盒均為上海太陽生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，在使用前按說明書要求配制試劑。1.3 實驗方法（1）體表溫度測定使用數(shù)字溫度計，將探頭置于小鼠腹正中線處記測小鼠體表溫度，探頭測溫時間每次2min。測溫時間安排在17時18時，測溫同時，記錄室溫。（2）用毛細玻管法測定小鼠的凝血時間，將毛細玻管插入小鼠內(nèi)眥球后靜脈叢，深約45mm，自有血液流進管內(nèi)開始計時，血液注滿后取出毛細玻管平放于桌上，每隔30s折斷毛細玻

6、管約5mm，觀察折斷處是否有血凝絲，一旦有血凝絲出現(xiàn)，其所歷時間即為凝血時間2 。（3）運用摘除小鼠眼球法取血，使用3.2%的枸櫞酸鈉溶液與全血1：9抗凝，以3000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，取上層血漿，運用C2000-2型血凝儀測定每只小鼠的PT、APTT、Fbg。1.4 統(tǒng)計與處理本試驗所得結(jié)果以平均值±SD表示，使用EXCEL軟件的分析工具庫進行數(shù)據(jù)的方差分析。2. 實驗結(jié)果2.1 動物造模情況造模過程中，模型組小鼠飲水量有增多趨勢。造模結(jié)束后，測定小鼠腹部體溫，發(fā)現(xiàn)較造模前升高，造模組小鼠腳掌、尾部較空白對照組稍紅，造模組第1、2籠活動明顯較造模前減弱，而造模組第3籠活動明顯較造

7、模前增強。表1 造模前后空白對照組與模型組小鼠腹溫比較（室溫23）組別n腹溫（）造模前空白對照組1034.13±0.28造模后空白對照組1034.10±0.26造模前模型組3033.84±0.51造模后模型組2334.25±0.30*注：造模后模型組與造模前比較 *p<0.012.2 凝血時間的測定表2 瀉心湯不同煎煮法對小鼠凝血時間的影響組別n凝血時間（min）空白對照組73.71±0.70模型對照組74.50±0.58*治療組173.50±0.41*治療組284.00±0.38#注：模型對照組與空白對照組

8、比較 *p<0.05；治療組1與模型對照組比較 *p<0.01；治療組1與治療組2比較 #p<0.052.3 PT的測定表3 瀉心湯不同煎煮法對小鼠PT的影響組別nPT（s）空白對照組79.54±0.48模型對照組79.70±5.16治療組179.03±0.69治療組288.43±1.17*注：治療組2與空白對照組比較 *p<0.052.4 APTT的測定表4 瀉心湯不同煎煮法對小鼠APTT的影響組別nAPTT（s）空白對照組717.63±5.69模型對照組717.67±9.06治療組1718.90±

9、11.86治療組2816.18±6.162.5 Fbg的測定表5 瀉心湯不同煎煮法對小鼠Fbg的影響組別nFbg（mg/dl）空白對照組72.50±0.94模型對照組73.12±1.32治療組173.05±0.98治療組282.68±0.673. 討 論3.1 關(guān)于造模從現(xiàn)代研究來看，對于小鼠的實熱證造模研究較少，缺乏統(tǒng)一認可的造模標準。我們造模采用熱性中藥、補氣中藥、巧克力相結(jié)合的方法。使用熱性中藥（附子、干姜、肉桂）依據(jù)臨床過服熱性方藥患者可致體質(zhì)改變而出現(xiàn)熱證。有資料表明3用溫熱藥附子、麻黃、蒼術(shù)、豬苓、干姜以1：1：1：1：1比例做成的

10、水煎劑灌胃小鼠，可在半小時后出現(xiàn)熱證，但僅能觀察7小時。使用補氣中藥（黨參、黃芪、白術(shù)）依據(jù)格致余論：“氣有余便是火”。中醫(yī)名辭術(shù)語解釋：“氣化過盛出現(xiàn)火象火化的陽氣，即不再具有正常的溫化和生氣作用，而只是會產(chǎn)生耗氣，灼津傷津的病理損害，表現(xiàn)為實火實熱證象”。說明補氣太過可產(chǎn)生實熱證。加入巧克力，主要根據(jù)民間巧克力食用過量會導致熱證癥候，甚者鼻出血的現(xiàn)象，這也是我們實驗的創(chuàng)新點之一。從實驗造模的結(jié)果分析，模型組小鼠飲水量有增多趨勢。小鼠腹部體溫升高（p<0.01），造模組小鼠腳掌、尾部較空白對照組稍紅，造模組第1、2籠活動明顯較造模前減弱，而造模組第3籠活動明顯較造模前增強。有資料表明3

11、，熱證小鼠活動增加或少動，飲水量增加，這些結(jié)果均表明我們的造模基本成功。3.2 關(guān)于實驗結(jié)果從先前的各項研究已經(jīng)證實普通煎煮法瀉心湯確實具有明顯的促凝血和止血作用，治療組血小板數(shù)明顯高于模型對照組，治療組凝血時間明顯低于模型對照組。本次實驗由于學校設(shè)備條件有限，我們無法對血小板數(shù)進行測定與比較，但從凝血時間上進行比較，我們研究結(jié)果表明用普通煎煮法煎煮的瀉心湯能明顯縮短熱盛小鼠的凝血時間，且其療效要優(yōu)于用沸水泡制成的瀉心湯。瀉心湯用沸水浸泡不用煎煮，是取其清淡之性味，以清心火，泄胃熱，消痞滿，而將其煎煮以后則顯現(xiàn)出其降火止血之功。對于血熱證型動物實驗PT、APTT指標的測試比較國內(nèi)開展較少。吳潤

12、秋，唐紅波，郭建生4在復方胃熱康對熱盛胃出血模型止血作用的影響研究中報道熱盛小鼠在治療后其PT、APTT有顯著性改變（p<0.05）。我們尚未發(fā)現(xiàn)國內(nèi)有關(guān)血熱證型動物實驗Fbg指標的測試比較。從我們的實驗結(jié)果分析，各組小鼠的PT、APTT、Fbg均無顯著差異。這可能的原因有造模時間過短，尚未引起相應(yīng)的病理生理改變；而凝血時間的測定由于采用的是毛細玻管法，且每隔30s折斷一次，用人工觀察有無血凝絲形成，可能會有較大誤差，故我們不能排除在凝血時間測定上可能也不存在差異的可能性。瀉心湯不同煎煮方法對小鼠的凝血系統(tǒng)沒有影響。樣本量太少等。因此有關(guān)熱盛小鼠的PT、APTT、Fbg等凝血指標的變化情況還有待進一步研究。3.3 實驗創(chuàng)新點1、關(guān)于煎煮方法對方藥影響的研究現(xiàn)代開展較少，尚未發(fā)現(xiàn)對金匱要略與傷寒論中瀉心湯的比較實驗研究。2、造模藥中加入巧克力。3、有關(guān)小鼠出血模型PT