人乳頭瘤病毒

1、人乳頭瘤病毒（人乳頭瘤病毒（HPVHPV）基因分型）基因分型檢測檢測湖北省腫瘤醫(yī)院 雷旦生人乳頭瘤病毒（HPV） HPV(人類乳頭瘤病毒)是以人類為唯一宿主的一種DNA病毒，現(xiàn)在已經(jīng)明確，HPV與宮頸癌的發(fā)生高度相關(guān)。醫(yī)學(xué)數(shù)據(jù)表明，6070的女性感染過HPV病毒，99.8的宮頸癌患者中可以檢測到HPV，而HPV陰性者幾乎不會(huì)發(fā)生宮頸癌。除此之外，98以上的宮頸疾病患者體內(nèi)也存在HPV。 目前有100余種型別HPV,約35種型別與生殖道感染有關(guān)，大約20種型別與癌癥相關(guān)。 與宮頸癌相關(guān)的高危型HPV有13種：16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58， 59，68。 與宮頸

2、癌相關(guān)的低危型別有：6，11，40，42，43，44。HPV基因分型檢測的意義宮頸病變及宮頸癌的篩查，通過分型檢測對患者個(gè)體化評估，預(yù)測宮頸病變發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)度, 決定篩查的間隔、治療方案的制定。未明確診斷意義的非典型鱗狀細(xì)胞和腺細(xì)胞（AS-CUS/AGUS）和宮頸上皮內(nèi)低度病變（LSIL）的分流，提高診斷的可信度，降低漏疹風(fēng)險(xiǎn)。宮頸病變治療后的追綜和隨訪 HPV陽性還可提示生殖器贅生物為尖銳濕疣的可能性。 HPV感染與宮頸炎的發(fā)生有密切關(guān)系。 HPV病毒也可引起宮頸糜爛。宮頸癌篩查方案 1.基本篩查方案醋酸或碘染色后肉眼觀察陽性陰性陰道鏡活檢+病理檢查相應(yīng)治療定期隨訪 2.一般篩查方案HPV檢測

3、+傳統(tǒng)巴氏涂片HPV（-）CytoASC-USHPV（+）CytoASC-USHPV（-）CytoASC-HHPV（+）CytoASC-H隨訪（次/3-5年隨訪（次/年陰道鏡檢查/多點(diǎn)活檢+ECC相應(yīng)治療（-）（+） 3.最佳篩查方案HPV檢測+液基細(xì)胞學(xué)檢查HPV（-）CytoASC-USHPV（+）CytoASC-USHPV（-）CytoASC-HHPV（+）CytoASC-H隨訪（次/3-5年隨訪（次/年陰道鏡檢查/多點(diǎn)活檢+ECC相應(yīng)治療（+）（-）HPV基因分型檢測的方法 我科目前采用分子生物學(xué)前沿技術(shù)多重PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）先進(jìn)技術(shù)，通過對HPV-DNA基因分型，可快速、準(zhǔn)確地

4、檢測常見的23種HPV亞型，包括5種低危型（HPV6，11，42，43，44）和18種高危型（HPV16，18，31，33，52等），覆蓋了現(xiàn)有已知的與人生殖道感染有關(guān)的絕大部分HPV亞型。 HPV基因分型芯片技術(shù)特點(diǎn) HPV基因芯片分型檢測，利用L區(qū)相對保守區(qū)的引物對待測樣品中可能HPV亞型進(jìn)行廣譜擴(kuò)增，再將產(chǎn)物與固定在膜芯片上的亞型特異性探針進(jìn)行雜交，顯色并判讀結(jié)果。此技術(shù)靈敏、準(zhǔn)確、高效、快速，并確定具體亞型。GC-HPV檢測實(shí)驗(yàn)流程檢測實(shí)驗(yàn)流程HPV檢測目標(biāo)物： 宮頸脫落細(xì)胞、疣體組織、組織切片、活體組織陰道鏡下“活檢”組織的采集 通過陰道鏡觀察宮頸表面血管的病變，并用宮頸活檢鉗或?qū)m頸

5、管刮勺從宮頸上提取可疑組織，裝入有保存液的洗脫管中，旋緊管蓋，做好標(biāo)識(shí) 疣體樣本的采集 用棉拭子在疣體表面剮蹭4-6遍，也可以把通過手術(shù)切除下來的疣體直接作為檢測樣本。專用的宮頸脫落細(xì)胞采集器專用的宮頸脫落細(xì)胞采集器步驟1.標(biāo)本采集擴(kuò)陰器暴露宮頸口，用棉拭子將分泌物擦去將宮頸刷伸入宮頸口，單向輕柔轉(zhuǎn)動(dòng)4-5周將其放入有保存液的洗脫管中旋緊管蓋，做好標(biāo)識(shí)將宮頸刷折斷，刷頭留在管中步驟二：提取步驟二：提取HPV DNAHPV DNA13000rpm10分鐘，棄上清 將標(biāo)本轉(zhuǎn)移到將標(biāo)本轉(zhuǎn)移到1.5mL微量離心管中微量離心管中加加50 L 裂解液充分裂解液充分懸浮沉淀懸浮沉淀100加熱10分鐘 130

6、00rpm離心離心10分鐘，分鐘，保留上清待用保留上清待用步驟三：步驟三：PCRPCR擴(kuò)增擴(kuò)增 5015min 95 10min 94 30s 42 90s 40 cycles 72 30s 72 5min 51洗脫15min步驟四：雜交與洗脫步驟四：雜交與洗脫 設(shè)定雜交儀的溫度，無需看守，于51雜交1小時(shí) PCR產(chǎn)物加入雜交緩沖液中,沸水浴變性10min步驟五步驟五 顯色與結(jié)果判讀顯色與結(jié)果判讀 POD孵育 POD洗滌 顯色前準(zhǔn)備 配制顯色液,顯色檢測結(jié)果： 膜條顯色直接提示感染的HPV亞型，包括高危及低危亞型。HPV6HPV11HPV16HPV18HPV31HPV33HPV35HPV39H

7、PV42HPV43HPV45HPV51HPV52HPV53HPV56HPV58HPV44HPV59HPV66HPV68HPV73HPV83HPVMM4PC適用人群： 三年以上性行為或21歲以上有性行為的女性 宮頸病變及宮頸癌患者治療后的隨訪 尖銳濕疣患者 咽喉部HPV感染導(dǎo)致的疣體增生的嬰幼兒受檢前須知： 月經(jīng)來潮后10-18天為最佳檢查時(shí)間 檢查前三天內(nèi)不要用避孕藥膏等陰道內(nèi)用藥物及陰道沖洗 檢查前24小時(shí)最好不要有性生活HPV檢驗(yàn)報(bào)告單 將分為高危及低危兩組報(bào)告結(jié)果，并注明兩組中具體的陽性亞型，未注明的表示為陰性。例： HPV-DNA分型報(bào)告單 高危組 陽性（+） 16，33 低危組 陰性

8、（-）結(jié)果分析 HPV-DNA陽性： 2030的HPV病毒感染會(huì)引起疾病，如果HPV-DNA陽性，并伴隨宮頸病變，應(yīng)采取進(jìn)一步醫(yī)學(xué)檢查，以明確病變性質(zhì)。 6070的人僅是HPV陽性而未見宮頸病變，提示雖然發(fā)生HPV感染但并沒有導(dǎo)致宮頸病變或?qū)m頸癌，只需每年進(jìn)行一次HPV病毒篩查及相關(guān)其它檢查即可。 HPV-DNA陰性： 如果30歲以上的女性HPV檢測結(jié)果為陰性，同時(shí)細(xì)胞學(xué)檢查提示沒有發(fā)生任何病變，35年內(nèi)都無需再做類似檢查。HPV檢測后的處理HPV基因分型檢測陰性常規(guī)篩查陽性低危高危無癥狀一年后復(fù)查疣體組織相應(yīng)治療（冷凍、激光）液基細(xì)胞學(xué)檢查（TCT）正常一年后復(fù)查HPV 和TCTAS-CUS一年后復(fù)查HPV 和TCT或陰道鏡檢查ASC-H陰道鏡活檢/多點(diǎn)活檢+ECC6個(gè)月后復(fù)查HPV 和TCT（-）（+）相應(yīng)治療標(biāo)本收集時(shí)間及結(jié)果報(bào)告 標(biāo)本可于每天規(guī)定工作時(shí)間（8：00AM5：00PM）送檢驗(yàn)科，未及時(shí)送檢的可于4冰箱保存。 在臨床送檢的標(biāo)本量滿足每天檢測前提下，當(dāng)日8：30后送檢的標(biāo)本，次日下午發(fā)出報(bào)告，若標(biāo)本量較少，則集中在每周三、五進(jìn)行檢測。HPV感染后的教育信息 HPV檢測陽性只說明一種病毒感染，而不是疾病。感