標準的PCR實驗室建設(shè)方案

1、標準的PCR實驗室建設(shè)方案發(fā)布時間：2009-11-5 10:15:17一、主體結(jié)構(gòu)主體為彩鋼板、鋁合金型材。室內(nèi)所有陰角、陽角均采用鋁合金50內(nèi)圓角鋁，從而解決容易污染、 積塵、不易清掃等問題。結(jié)構(gòu)牢固，線條簡明，美觀大方，密封性好。二、標準的三區(qū)分隔和氣壓調(diào)節(jié)將PCR過程分成試劑準備、標本制備和PCRT增檢測三個獨立的實驗區(qū)。整個區(qū)域有一個整體緩沖走廊。每個獨立實驗區(qū)設(shè)置有緩沖區(qū)，同時各區(qū)通過氣壓調(diào)節(jié)，使整個PCR實驗過程中試劑和標本免受氣溶膠的污染并降低擴增產(chǎn)物對人員和環(huán)境的污染?？纱蜷_緩沖區(qū)I,緩沖區(qū)H和PCR擴增區(qū)的排風(fēng)扇往外排氣， 在實驗區(qū)的外墻上和各扇門上都安 裝有風(fēng)量可調(diào)的回風(fēng)

2、口，空氣通過回風(fēng)口向室內(nèi)換氣。三、消毒在三個實驗區(qū)和三個緩沖區(qū)頂部以及傳送窗內(nèi)部安裝有紫外燈，供消毒用。在試劑準備區(qū)和標本制備區(qū)還設(shè)置移動紫外線燈，對實驗桌進行局部消毒。四、機械連鎖不銹鋼傳遞窗試劑和標本通過機械連鎖不銹鋼（不建議使用電子連鎖方式）傳遞窗傳遞，保證試劑和標本在傳 遞過程中不受污染（人物分流）。五、地面地面建議使用PVC卷材地面或自流坪地面，整體性好。便于進行清掃，耐腐蝕。沒有條件的也可 采用水磨石地面，或大塊的瓷磚（至少800mrW800mm接縫需要小于 2mm六、照明燈具要選用凈化燈具，能達到便于清洗、不積塵的特點。在建設(shè)的過程中應(yīng)注意：（1）規(guī)范的安裝流程和全面的服務(wù)流程。

3、（2）嚴格按照規(guī)范科學(xué)設(shè)計的安裝流程。（3）安裝前需要確定以下安裝條件，如：電源電壓，電源進線位置，電話網(wǎng)絡(luò)線進線位置，進水 水壓，最小安裝空間，地面平整度，通風(fēng)孔、進水管和下水管的位置等，理想狀態(tài)的空間尺寸和通風(fēng)口尺 寸。臨床基因擴增（PCR）實驗室設(shè)計探討發(fā)布時間：2009-4-10 10:39:25簡介：介紹了什么叫做基因擴增實驗室以及基因擴增實驗室是如何保證實驗結(jié)果的安全性和可靠性的。并從平面布置、通風(fēng)空調(diào)系統(tǒng)設(shè)計、污染的預(yù)防與控制幾個方面探討了基因擴增實驗室設(shè)計的主要特點和 應(yīng)注意的問題。關(guān)鍵字：基因擴增 基因擴增實驗室相關(guān)站中站：潔凈實驗室/生物實驗室1概述臨床基因擴增實驗又稱 P

4、CR實驗，是專門用來檢驗艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病 的一種檢測手段。它可以通過將病毒體內(nèi)所含的基因進行擴增的方法，測岀一些病毒含量不高的感染者體內(nèi)是否含有特定的病毒。由于該檢測方法可以測岀普通檢驗難以檢測岀的病毒并具有靈敏度高、特異性高、快捷、對樣品要求低等優(yōu)點，因此被臨床醫(yī)生廣為認可，已廣泛應(yīng)用于醫(yī)院的臨床診斷和各防疫檢測部門 的禽疫病診斷。但是，這種實驗需要有能保證絕對安全、配置合理的實驗室和非常規(guī)范的操作為前提。近 年來對臨床基因擴增檢驗實驗室的建設(shè)越來越得到重視，因為它對檢測結(jié)果的可靠性、準確性和安全性起到至關(guān)重要的作用。本文主要從臨床基因擴增檢驗實驗室的平面布局，空調(diào)通

5、風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計、氣流控制和污 染的防制幾個方面對實驗室設(shè)計中的主要特點進行了闡述。臨床基因擴增檢驗實驗室設(shè)計的核心問題是如何避免污染。因此，實驗室的平面布局、空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計、氣流控制等都是圍繞這個核心問題進行的。下面就對這幾個方面分別進說明。2 PCR實驗室平面布局臨床基因擴增檢驗實驗室原則上分為四個單獨的工作區(qū)域：試劑貯存和準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴 增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)。為避免交叉污染，進入各個工作區(qū)域必須嚴格遵循單一方 向進行，即只能從試劑貯存和準備區(qū)T標本制備區(qū)T擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)T擴增產(chǎn)物分析區(qū)。各實驗區(qū)之間的試劑及樣品傳遞應(yīng)通過傳遞窗進行。PCR實驗室平面布置

6、示意圖如圖1所示。圖1 PCR實驗室平面布置示意圖3實驗室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計及壓力控制PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求，但是為避免各個實驗區(qū)域間交叉污染的可能性，宜采用全送 全排的氣流組織形式。同時，要嚴格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實驗區(qū)的壓力要求。3.1試劑貯存和準備區(qū)該實驗區(qū)主要進行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于標 本制作的材料應(yīng)直接運送至該區(qū)，不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成 所需的貯存試劑。對與氣流壓力的控制，本區(qū)并沒有嚴格的要求。3.2標本制備區(qū)該區(qū)域主要進行的操作為臨床標本的保存、核酸（RNA DNA提取、貯存及其加入

7、至擴增反應(yīng)管和測定RNA寸cDNA的合成。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為正壓，以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。另外， 由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染，所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動。3.3擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)該區(qū)域主要進行的操作為 DNA或 cDNA擴增。此外，已制備的 DNA模板和合成的cDNA來自樣本制備區(qū)）的加入和主反應(yīng)混合液（來自試劑貯存和制備區(qū)）制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進行。在巢式PCR測定中，通常在第一輪擴增后必須打開反應(yīng)管，因此巢式擴增有較高的污染危險性，第二次加樣必須在本 區(qū)內(nèi)進行。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓，以避免氣溶膠從本

8、區(qū)漏岀。為避免氣溶膠所致 的污染，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動。個別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺內(nèi)進行。3.4擴增產(chǎn)物分析區(qū)該區(qū)域主要進行的操作為擴增片段的測定。如使用全自動封閉分析儀器檢測，此區(qū)域可不設(shè)。本區(qū)是最主要的擴增產(chǎn)物污染來源，因此對本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓，以避免擴增產(chǎn)物從本區(qū)擴散至其它區(qū)域。4污染的預(yù)防與控制PCR實驗室設(shè)計的核心問題是如何避免污染。在實際工作中，常見的有以下幾種污染類型：擴增產(chǎn)物的污染；天然基因組 DNA的污染；試劑的污染以及標本間的污染。由于一旦發(fā)生污染，實驗就必須停 止，直到找到污染源為止，而且實驗結(jié)果必須作廢，需重新進行實驗。所以發(fā)生污染

9、后再圍繞實驗室來尋 找污染源不但耗時而且繁瑣，浪費人力物力。因此要避免污染，首先應(yīng)是預(yù)防，而不是排除。4.1工作區(qū)域的嚴格劃分（1）各個實驗區(qū)域設(shè)置合理；（2）各個實驗區(qū)域要有明顯的標記（如醒目的門牌或不同的地面顏色等），以避免各個不同實驗區(qū)域設(shè)備物品、試劑等發(fā)生混淆。4.2合理的系統(tǒng)設(shè)置（1）合理的空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)置，盡量采用全送全排的空調(diào)系統(tǒng)；（2）嚴格的氣流壓力控制，保證不同的實驗區(qū)內(nèi)不同的壓力要求。4.3規(guī)范的操作（1）臨床基因擴增檢驗實驗室的技術(shù)人員必須進行上崗培訓(xùn)，經(jīng)培訓(xùn)合格后才能從事臨床基因擴增檢驗的工作；（2）在實驗操作過程中，操作者必須戴手套，并經(jīng)常更換。此外，操作中使用一次性

10、帽子也是一個 有效地防止污染的措施；（3）清潔工作及時、正確。實驗工作結(jié)束后，必須立即對本區(qū)進行清潔。除常規(guī)的消毒液體對表面進行擦拭消毒或紫外線燈的照射消毒外，對一些實驗設(shè)備還應(yīng)進行高壓消毒處理。4.4嚴格的管理（1）嚴格控制進岀實驗室的人員。與實驗無關(guān)的人員不得隨意進岀實驗室，有條件的情況下要設(shè)置獨立的通道和進岀整個實驗區(qū)的門；（2）在各個實驗區(qū)域使用帶有明顯區(qū)別標志的工作服（如不同顏色），當工作人員離開時不得將本區(qū)的工作服帶至其它區(qū)域；（3）盡量減少在實驗區(qū)內(nèi)不必要的走動以減少交叉污染的可能性。（4）擴增產(chǎn)物分析區(qū)是最主要的擴增產(chǎn)物污染來源，廢液不能在實驗室中傾倒，必須經(jīng)消毒液浸泡消毒后在遠離實驗室的地