論文 高效液相色譜在藥物分析中的應用

1、高效液相色譜法在藥物分析中的應用與發(fā)展 摘要：色譜分析作為重要的分離分析技術，已成為藥物研制開發(fā)、生產(chǎn)單位、藥品檢驗部門及醫(yī)院臨床檢驗等各個領域中藥物質量控制必不可少的方法和技術。高效液相色譜法是20世紀60年代末70年代初出現(xiàn)的分析速度快、分離效率高、操作自動化的新型色譜分析方法。它已逐漸成為藥物分析領域中重要的分析手段及主要制備方式之一。關鍵詞：高效液相色譜法 藥物分析  1.    前言高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography , HPLC），又稱“高壓液相色譜法”或“高速液相色譜法”，是20世紀

2、60年代末，在經(jīng)典液相色譜的基礎上引入氣相色譜的理論與實驗方法，并加以改進而發(fā)展起來的一種重要分離分析方法。HPLC采用了高壓輸液泵，高效固定相和高靈敏度在線檢測器等技術，具有分離效能高、分析速度快、靈敏度高、色柱可以反復使用、流動相可選擇范圍寬、流出組容易收集、適用范圍廣和安全等優(yōu)點，特別適合揮發(fā)性低、熱穩(wěn)定性差、分子量大的高分子化合物以及離子型化合物的分離分析測試，廣泛應用于醫(yī)學、藥學、化學、生化、工業(yè)、農(nóng)業(yè)、環(huán)保、商檢和法檢等科學領域Error! Reference source not found.。近年來，高效液相色譜法在藥物分析中發(fā)揮著越來越重要的作用，主要是鑒別相關物質、檢查藥物

3、中有關物質的含量限度以及測定有效成分或主要成分含量，世界各國已將該法收載于藥典。本文就高效液相色譜法在藥物分析研究中的應用和發(fā)展綜述如下。 2.    高效液相色譜法在藥物分析中的應用2.1            高效液相色譜法在藥物鑒別中的應用在HPLC法中，保留時間與組分的結構和性質有關，是定性的參數(shù)，可用于藥物的鑒別。如中國藥典收載的藥物頭孢羥氨芐的鑒別項下規(guī)定：在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品主峰的保留時間應與對照品主峰的保留時間一致

4、。頭孢拉定、頭孢噻酚鈉等頭孢類藥物以及地西泮注射液、曲安奈德注射液等多種藥物均采用HPLC法進行鑒別。王維劍Error! Reference source not found.等以ODS柱，甲醇-0.5%乙酸(1:9)為流動相，DVD檢測器，波長329 nm測定了一種新型抗腫瘤藥替莫唑胺(temzolo-mide)，為申報新藥提供了數(shù)據(jù)。崔靜茹Error! Reference source not found.等以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，分別以甲醇-冰乙酸-水(30466)和以乙腈-0·1%磷酸液(991)為流動相，檢測波長分別為283 nm、207 nm，對半夏止咳糖漿中的陳

5、皮、麻黃進行鑒別，方法簡便準確，專屬性強，重復性好，可用于控制此中藥制劑的內在質量。王小平Error! Reference source not found.等還采用HPLC指紋圖譜法對蜂膠和樹膠進行鑒別。這些應用無疑為進一步完善、開發(fā)藥物鑒別的方法提供了一種新的思路。2.2 高效液相色譜法在含量測定中的應用用高效液相色譜法測定含量可以消除藥物中的雜質，制劑中的附加劑及共存的藥物對測定的干擾，因此藥物成分含量測定中HPLC法應用廣泛。杜洪光Error! Reference source not found.等采用HPLC法測定苯甲酸雌二醇貼片中苯甲酸雌二醇(EB)的含量，李立Erro

6、r! Reference source not found.等用HPLC法測鹽酸青藤堿含量，操作簡便，回收率高，快速準確。劉娜Error! Reference source not found.等以HPLC法測定2,3,5,4'-四羥基二苯乙烯-2-o-D-葡萄糖苷的含量，可用于舒冠膠囊的質量控制。此外，張小華等應用RP-HPLC法成功測定了阿莫西林-鹽酸環(huán)丙沙星可溶性粉的含量。李妮等采用RP-HPLC法測定鹽酸齊拉西酮的含量。胡云珍等采用RP-HPLC法測定佐米曲普坦的含量，并對其純度進行考察。2.3       

7、     高效液相色譜法在添加違禁藥物檢查中的應用近年來，食品、藥品、保健品以及動物飼料等各方面頻頻出現(xiàn)非法添加違禁藥物的事件，這類成分往往對患者造成病情不受控制、藥物中毒等不良反應，嚴重者甚至威脅到患者生命。高效液相色譜法對添加違禁藥物的日常檢驗工作提供了有力的技術支持。薛恒躍Error! Reference source not found.等建立化學官能團專屬性鑒別方法和高效液相色譜法對抗癲癇類中藥制劑中添加化學藥品苯巴比妥進行初步確認，用高效液相色譜-質譜聯(lián)用技術以對照品比對做最終確認，結果準確可靠。高青Error! Reference sour

8、ce not found.等采用氰基( 25 cm×4.6 mm)色譜柱，以0.01 mol/L庚烷磺酸鈉溶液(用20%磷酸調節(jié)pH值至2.7)-乙腈(73)為流動相，柱溫35，流速1 mL/min，檢測波長230 nm，265 nm。在此色譜條件下，中藥制劑中非法添加的6種化學合成降壓藥（比索洛爾、吲達帕胺、硝苯地平、尼群地平、非洛地平及利血平）有很好的分離度，檢測靈敏度及最小檢出量均為2 ng；連續(xù)5針進樣色譜圖中各組分保留時間的相對標準偏差均小于1.0%。車寶泉Error! Reference source not found.等采用Utimates XB-C18色譜柱，梯度洗

9、脫：流動相A為含0.1%醋酸的20 mmol·L-1醋酸銨溶液，流動相B為甲醇,流速為1 mL·min-1。選擇正負離子全掃描方式檢測臨床常用的10種減肥藥，利用質譜解析軟件研究了上述化合物的質譜裂解規(guī)律，通過比較樣品峰與對照品峰的一級質譜、二級質譜質荷比，確定樣品中是否摻雜了化學藥物。結果各色譜峰間分離度良好，質譜分辨率符合要求，最小檢出量為2 ng至100 ng。  3.    高效液相色譜法在藥物分析中的發(fā)展3.1         

10、;   聯(lián)用技術隨著色譜技術的發(fā)展，結合計算機各種軟件的開發(fā)，使HPLC與各種檢測儀器聯(lián)用，更加拓寬了HPLC的應用范圍。如HPLC與質譜聯(lián)用(HPLC-MS)技術是以高效液相色譜為分離手段，以質譜為鑒定工具的一種分離分析技術，具有高度的專屬性，對多數(shù)藥物的檢測靈敏度超過其他分析方法，使定量測試速度顯著加快，可以對混合物中的微量組分進行分析Error! Reference source not found.，在國外已成為測定低濃度生物藥品中藥物及代謝物的首選方法。液相色譜法與化學發(fā)光聯(lián)用(HPLC-CL)，已成為一種有效的痕量及超痕量分析技術，用于測定復雜的、含量低的混合物

11、中組分的分析Error! Reference source not found.。蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)對所有不揮發(fā)溶質都有響應，其特點是靈敏度高，檢出限為10ng，不受溶劑成分及溫度波動的影響，亦可用于梯度洗脫，HPLC與ELSD的聯(lián)用也已得到廣泛的應用Error! Reference source not found.Error! Reference source not found.。3.2            微柱高效液相色譜法高效液相色譜法具有很多優(yōu)點但也存在一些不足

12、，如流動相消耗量大，所用溶劑大多有毒且價格昂貴等。特別是對于一些較復雜樣品的分析，用單相分離分析方法往往很難完成。微柱高效液相色譜由于填充粒度小而密集，就等效于理論塔板數(shù)的增多，可使色譜柱的柱效提高。采用內徑較小的柱子，可使縱向擴散減少，峰展寬效應大大降低，進而縮短了分析時間又提高了檢測靈敏度。采用微柱還可以分析極少量的樣品，使流動相用量大為減少，利于節(jié)約溶劑和環(huán)境保護Error! Reference source not found.。3.3            進樣富集處理對于流

13、體中待檢物含量較少，基質干擾較大的待測物，直接使用高效液相色譜法檢測靈敏度不高，需對待測物進行富集處理，固相萃取(SPE)是近年發(fā)展起來一種樣品預處理技術，由液固萃取和柱液相色譜技術相結合發(fā)展而來，主要用于樣品的分離、純化和濃縮，與傳統(tǒng)的液液萃取法相比較可以提高分析物的回收率，更有效的將分析物與干擾組分分離，減少樣品預處理過程，操作簡單、省時、省力。SPE與HPLC技術結合已有很多成功的應用Error! Reference source not found.。 4.    結束語高效液相色譜法是現(xiàn)代藥物分析中最高效、快捷的方法之一，具有專屬性強、靈敏度高

14、等特點，既可用于藥物分離，也可用于定性定量分型，適用范圍廣因此在藥物成分的分離與測定方面能夠充分發(fā)揮其它分析方法無與倫比的優(yōu)勢。而且隨著計算機軟件的開發(fā)、專家系統(tǒng)的應用、檢測手段的進步、各種聯(lián)用技術的出現(xiàn)以及其他一些相關問題的解決，HPLC將稱為今后質量規(guī)范化，國際化的重要途徑之一。 參考文獻1   劉斌. 高效液相色譜法在藥物分析領域中的應用J. 中國中醫(yī)藥咨訊, 2009.1(4):107.2   孫毓慶. 現(xiàn)代色譜法及其在醫(yī)藥中的應用M. 北京:人民衛(wèi)生出版社.2000.3   呂璨慧，溫哲. 高效液相色譜在中藥研究中

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18、的方法學研究J. 浙江大學學報（醫(yī)學版）. 2004, 33(1): 37-40.16 薛恒躍, 王玉蘭, 于黎明等. 中藥制劑中添加化學藥品苯巴比妥的檢測方法研究J. 時珍國醫(yī)國藥. 2006, 17(2): 216-217.17 高青, 張韶, 車寶泉. 6種抗高血壓藥物液相色譜鑒別方法的研究J. 中國醫(yī)科大學學報. 2005, 36(4): 330-333.18 車寶泉, 張喆, 黃曉君等. 液質聯(lián)用檢查中藥制劑及保健食品中減肥類藥物J. 藥物分析雜志. 2009, 29(4): 633-635.19 謝英新, 王豐. HPLC-MS聯(lián)用技術在藥學中的應用J. 黑龍江醫(yī)藥. 2007, 20(5): 495-496.20 衛(wèi)洪清, 劉二保, 張敏. 高效液相色譜-化學發(fā)光法在藥物分析中的運用J. 山