保健食品安全性毒理學(xué)評價-20101014

1、保健食品毒理和功能保健食品毒理和功能檢驗及評價檢驗及評價仲 偉 鑒上海市疾病預(yù)防控制中心2010.10主要內(nèi)容提綱主要內(nèi)容提綱v 中國保健食品簡介中國保健食品簡介v 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗與評價保健食品安全性毒理學(xué)檢驗與評價v 保健食品新原料安全性毒理學(xué)評價原則保健食品新原料安全性毒理學(xué)評價原則v 保健食品安全性毒理學(xué)評價中存在的問題保健食品安全性毒理學(xué)評價中存在的問題v 保健食品功能性檢驗與評價保健食品功能性檢驗與評價第一部分第一部分中國保健食品簡介中國保健食品簡介保健食品定義保健食品定義 保健食品（保健食品（Functional FoodFunctional Food）系指具）系指具有調(diào)

2、節(jié)人體生理功能、適宜特定人群食用、有調(diào)節(jié)人體生理功能、適宜特定人群食用、不以治療為目的的一類食品。不以治療為目的的一類食品。 特特 點點q 具有特定的保健功能；具有特定的保健功能；q 無毒副作用，食用安全；無毒副作用，食用安全；q 有別于食品和藥品；有別于食品和藥品；q 增強體質(zhì)、預(yù)防疾病為主；增強體質(zhì)、預(yù)防疾病為主；q 適用于特定人群。適用于特定人群。特特 定定 功功 能能q 由國家管理部門指定由國家管理部門指定q 允許申報的功能目前有允許申報的功能目前有27種種q 27種以外的功能，生產(chǎn)企業(yè)在獲得足夠種以外的功能，生產(chǎn)企業(yè)在獲得足夠的技術(shù)資料后（包括評價方案，試驗數(shù)據(jù)的技術(shù)資料后（包括評價

3、方案，試驗數(shù)據(jù)及結(jié)果）向有關(guān)管理部門提出受理申請，及結(jié)果）向有關(guān)管理部門提出受理申請，接受評審。接受評審。特特 定定 人人 群群q正常成人以外，包括嬰幼兒、孕婦、乳正常成人以外，包括嬰幼兒、孕婦、乳母、青少年、中老年、特殊工種的工作母、青少年、中老年、特殊工種的工作者以及常見病病人者以及常見病病人q對于營養(yǎng)保健有特殊的需要對于營養(yǎng)保健有特殊的需要 膳食結(jié)構(gòu)的不同膳食結(jié)構(gòu)的不同 營養(yǎng)素需求的不同營養(yǎng)素需求的不同保健食品的發(fā)展歷程保健食品的發(fā)展歷程第一代保健食品第一代保健食品：在：在保健食品的管理方法保健食品的管理方法頒布頒布以前市場上已有的保健食品。以前市場上已有的保健食品。第二代保健食品第二代

4、保健食品：經(jīng)動物和人體實驗證實具有某種：經(jīng)動物和人體實驗證實具有某種生理調(diào)節(jié)功能的食品。生理調(diào)節(jié)功能的食品。第三代保健食品第三代保健食品：不僅需要經(jīng)人體及動物實驗證實：不僅需要經(jīng)人體及動物實驗證實具有某種功能，而且需要研究提具有某種功能，而且需要研究提供該功能因子、含量及其作用機供該功能因子、含量及其作用機理。理。發(fā)發(fā) 展展 趨趨 勢勢q根據(jù)新的疾病譜和健康問題，開發(fā)新的保健功能根據(jù)新的疾病譜和健康問題，開發(fā)新的保健功能q根據(jù)新的養(yǎng)生保健概念，開發(fā)新的保健功能根據(jù)新的養(yǎng)生保健概念，開發(fā)新的保健功能q根據(jù)現(xiàn)代營養(yǎng)科學(xué)理論，開發(fā)新的膳食有效成分根據(jù)現(xiàn)代營養(yǎng)科學(xué)理論，開發(fā)新的膳食有效成分q根據(jù)中醫(yī)藥

5、理論，開發(fā)中藥類有效成分根據(jù)中醫(yī)藥理論，開發(fā)中藥類有效成分q根據(jù)生命科學(xué)理論，開發(fā)新的人體所需營養(yǎng)素根據(jù)生命科學(xué)理論，開發(fā)新的人體所需營養(yǎng)素保健食品開發(fā)中的注意點保健食品開發(fā)中的注意點q中草藥中草藥q新資源新資源q野生動植物及其產(chǎn)品野生動植物及其產(chǎn)品q核酸類核酸類q真菌類真菌類q益生菌類益生菌類q酶制劑、氨基酸螯合物、金屬硫蛋白以及直酶制劑、氨基酸螯合物、金屬硫蛋白以及直接以微生物發(fā)酵的接以微生物發(fā)酵的中草藥類中草藥類q 中草藥作為原料應(yīng)注意中草藥作為原料應(yīng)注意：1.1.不能采用有明顯毒副作用的中藥材、不能采用有明顯毒副作用的中藥材、 獲國家藥政管理部門批準(zhǔn)的中成藥、獲國家藥政管理部門批準(zhǔn)的中

6、成藥、 受國家中藥保護的中藥成方受國家中藥保護的中藥成方2.2.用量應(yīng)控制在臨床用量的用量應(yīng)控制在臨床用量的50%50%以下以下新資源類新資源類q 新資源作為原料時必須具備的有關(guān)資料新資源作為原料時必須具備的有關(guān)資料：q 名稱及國內(nèi)外研究利用情況；名稱及國內(nèi)外研究利用情況；q 名稱、配方及生產(chǎn)工藝；名稱、配方及生產(chǎn)工藝；q 產(chǎn)品成分（包括營養(yǎng)物質(zhì)、有生物效應(yīng)物質(zhì)及有毒產(chǎn)品成分（包括營養(yǎng)物質(zhì)、有生物效應(yīng)物質(zhì)及有毒有害物質(zhì)等）的分析報告；有害物質(zhì)等）的分析報告；q 安全性毒理學(xué)評價報告或有關(guān)文獻資料；安全性毒理學(xué)評價報告或有關(guān)文獻資料；q 個別地區(qū)有食用習(xí)慣的應(yīng)提供有關(guān)食用歷史的證明個別地區(qū)有食用

7、習(xí)慣的應(yīng)提供有關(guān)食用歷史的證明資料；資料；q 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。野生動植物及其產(chǎn)品類野生動植物及其產(chǎn)品類q 以野生動植物及其產(chǎn)品為原料的有關(guān)限制以野生動植物及其產(chǎn)品為原料的有關(guān)限制：q 受保護的野生動物。受保護的野生動物。q 禁止使用自然的、人工馴養(yǎng)繁殖或人工栽培的國家禁止使用自然的、人工馴養(yǎng)繁殖或人工栽培的國家一級和自然的二級保護野生動植物及其產(chǎn)品。一級和自然的二級保護野生動植物及其產(chǎn)品。q 人工馴養(yǎng)繁殖或人工栽培的國家二級保護野生動植人工馴養(yǎng)繁殖或人工栽培的國家二級保護野生動植物及其產(chǎn)品，國家保護的有益的或者有重要經(jīng)濟、物及其產(chǎn)品，國家保護的有益的或者有重要經(jīng)濟、科學(xué)研究價值的陸生野生動

8、物及其產(chǎn)品應(yīng)提供省級科學(xué)研究價值的陸生野生動物及其產(chǎn)品應(yīng)提供省級以上農(nóng)業(yè)（漁業(yè)）、林業(yè)行政主管部門的批準(zhǔn)文件。以上農(nóng)業(yè)（漁業(yè)）、林業(yè)行政主管部門的批準(zhǔn)文件。q 以野生動植物及其產(chǎn)品為原料的有關(guān)限制以野生動植物及其產(chǎn)品為原料的有關(guān)限制：中華人民共和國林業(yè)植物新品種保護名錄中植物及中華人民共和國林業(yè)植物新品種保護名錄中植物及其產(chǎn)品，如果該種植物已獲其產(chǎn)品，如果該種植物已獲“品種權(quán)品種權(quán)”，應(yīng)提供該，應(yīng)提供該種植物品種權(quán)所有人許可使用的證明；如該種植物種植物品種權(quán)所有人許可使用的證明；如該種植物尚未取得品種權(quán)，應(yīng)提供國務(wù)院林業(yè)主管部門出具尚未取得品種權(quán)，應(yīng)提供國務(wù)院林業(yè)主管部門出具的該種品種尚未取得

9、品種權(quán)的證明。的該種品種尚未取得品種權(quán)的證明。q 進口保健食品中使用進口保健食品中使用瀕危野生動植物種國際貿(mào)易瀕危野生動植物種國際貿(mào)易公約公約名錄中動植物及其產(chǎn)品的，應(yīng)提供國務(wù)院農(nóng)名錄中動植物及其產(chǎn)品的，應(yīng)提供國務(wù)院農(nóng)業(yè)（漁業(yè)）、林業(yè)行政主管部門批準(zhǔn)文件、進出口業(yè)（漁業(yè)）、林業(yè)行政主管部門批準(zhǔn)文件、進出口許可證及海關(guān)的證明文件。許可證及海關(guān)的證明文件。野生動植物及其產(chǎn)品類野生動植物及其產(chǎn)品類核酸類核酸類q 核酸類保健食品申報時需提供的特殊資料核酸類保健食品申報時需提供的特殊資料：q 具體成份名稱、來源、含量；具體成份名稱、來源、含量；q 與所申報功能直接相關(guān)的科學(xué)文獻依據(jù)；與所申報功能直接相關(guān)

10、的科學(xué)文獻依據(jù)；q 企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中標(biāo)出核酸各成份的含量、純度和相應(yīng)的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中標(biāo)出核酸各成份的含量、純度和相應(yīng)的定性、定量檢測方法以及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；定性、定量檢測方法以及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；q 詳細生產(chǎn)工藝（包括加工助劑名稱、用量）；詳細生產(chǎn)工藝（包括加工助劑名稱、用量）；q 核酸原料純度的檢測報告。核酸原料純度的檢測報告。核酸類核酸類q 核酸類保健食品申報時的注意事項核酸類保健食品申報時的注意事項：q 不得以單一的不得以單一的DNADNA或或RNARNA作為原料申報。作為原料申報。q 單一原料純度應(yīng)大于單一原料純度應(yīng)大于8080。q 功能申報范圍暫限定為免疫調(diào)節(jié)功能。如申報其他功能，功能申報范圍暫限定為免疫調(diào)

11、節(jié)功能。如申報其他功能，需向衛(wèi)生部提交申請并納入審批范圍后，方可申報。需向衛(wèi)生部提交申請并納入審批范圍后，方可申報。q 核酸成份的每日推薦食用量為核酸成份的每日推薦食用量為0.6g-1.2g0.6g-1.2g。q 不得以不得以“核酸核酸”命名。命名。q 說明書及標(biāo)簽中的說明書及標(biāo)簽中的“不適宜人群不適宜人群”除按保健食品相關(guān)規(guī)除按保健食品相關(guān)規(guī)定標(biāo)注外，應(yīng)明確標(biāo)注出定標(biāo)注外，應(yīng)明確標(biāo)注出“痛風(fēng)患者痛風(fēng)患者”。真菌類真菌類q 真菌類保健食品的部分規(guī)定真菌類保健食品的部分規(guī)定 ：q 生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)建立有關(guān)的檔案資料。生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)建立有關(guān)的檔案資料。q 生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具備相應(yīng)的生產(chǎn)條件。生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具備相應(yīng)的生

12、產(chǎn)條件。q 對生產(chǎn)菌種及工藝變更的相應(yīng)規(guī)定。對生產(chǎn)菌種及工藝變更的相應(yīng)規(guī)定。q 冠名規(guī)定。冠名規(guī)定。q 發(fā)酵過程中，除培養(yǎng)基外，不得加入具有功效成分發(fā)酵過程中，除培養(yǎng)基外，不得加入具有功效成分的動植物及其它物質(zhì)。的動植物及其它物質(zhì)。q 不能使用經(jīng)過基因修飾的菌種。不能使用經(jīng)過基因修飾的菌種。益生菌類益生菌類q 益生菌類保健食品的部分規(guī)定益生菌類保健食品的部分規(guī)定：q 生產(chǎn)用菌種應(yīng)滿足一定的條件。生產(chǎn)用菌種應(yīng)滿足一定的條件。q 生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具備的一定條件。生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具備的一定條件。q 菌種及生產(chǎn)工藝不得變更，否則產(chǎn)品必須重新申報。菌種及生產(chǎn)工藝不得變更，否則產(chǎn)品必須重新申報。q 不提倡以液態(tài)形式生

13、產(chǎn)活菌產(chǎn)品。不提倡以液態(tài)形式生產(chǎn)活菌產(chǎn)品。q 在保存期內(nèi)活菌數(shù)目不得少于在保存期內(nèi)活菌數(shù)目不得少于 106cfu/mL(g) 106cfu/mL(g) 。益生菌類益生菌類q 益生菌類保健食品的部分規(guī)定益生菌類保健食品的部分規(guī)定：q 如需在特殊條件下保存，應(yīng)在標(biāo)簽和說明書中標(biāo)示如需在特殊條件下保存，應(yīng)在標(biāo)簽和說明書中標(biāo)示q 所用菌種在其發(fā)酵過程中，除培養(yǎng)基外，不得加入所用菌種在其發(fā)酵過程中，除培養(yǎng)基外，不得加入具有功效成分的動植物及其物質(zhì)具有功效成分的動植物及其物質(zhì)q 不能使用經(jīng)過基因修飾的菌種不能使用經(jīng)過基因修飾的菌種其他類別其他類別q 對酶制劑、氨基酸螯合物、金屬硫蛋白以及對酶制劑、氨基酸螯

14、合物、金屬硫蛋白以及直接以微生物發(fā)酵為原料限制的部分規(guī)定直接以微生物發(fā)酵為原料限制的部分規(guī)定：q 未列入未列入食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)或衛(wèi)生部公告或衛(wèi)生部公告名單中的食品添加劑新品種的酶制劑不得用于保健名單中的食品添加劑新品種的酶制劑不得用于保健食品的生產(chǎn)。食品的生產(chǎn)。q 不再審批以金屬硫蛋白為原料生產(chǎn)的保健食品。不再審批以金屬硫蛋白為原料生產(chǎn)的保健食品。其他類別其他類別q 使用微生物發(fā)酵直接生產(chǎn)保健食品的，需提使用微生物發(fā)酵直接生產(chǎn)保健食品的，需提供的特殊資料供的特殊資料：q 菌種來源及菌種檢定報告菌種來源及菌種檢定報告q 菌種的毒力試驗報告及安全性評價報告菌種的毒力試驗

15、報告及安全性評價報告 q 國內(nèi)外該菌種使用于食品生產(chǎn)的文獻資料國內(nèi)外該菌種使用于食品生產(chǎn)的文獻資料 q 發(fā)酵終產(chǎn)物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（包括純度、雜質(zhì)成分及含發(fā)酵終產(chǎn)物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（包括純度、雜質(zhì)成分及含量）量） 其他類別其他類別q 使用氨基酸螯合物生產(chǎn)保健食品的，需提供使用氨基酸螯合物生產(chǎn)保健食品的，需提供的特殊資料的特殊資料：q 提供明確的化學(xué)結(jié)構(gòu)式、理化性質(zhì)，配體與金屬離提供明確的化學(xué)結(jié)構(gòu)式、理化性質(zhì)，配體與金屬離子之比、游離元素和總元素之比。子之比、游離元素和總元素之比。 q 提供定性、定量的檢測方法及驗證報告。提供定性、定量的檢測方法及驗證報告。q 急性毒性試驗加做停食急性毒性試驗加做停食161

16、6小時后空腹一次灌胃試驗小時后空腹一次灌胃試驗和和3030天喂養(yǎng)試驗的組織病理報告。天喂養(yǎng)試驗的組織病理報告。q 國內(nèi)外使用于食品生產(chǎn)的文獻資料。國內(nèi)外使用于食品生產(chǎn)的文獻資料。安全，無毒、副作用安全，無毒、副作用功能，保健功效功能，保健功效理化、微生物特性：理化、微生物特性： 有害成分物質(zhì)和污染物有害成分物質(zhì)和污染物毒理學(xué)特性：毒理學(xué)特性： 劑量反應(yīng)（效應(yīng)）關(guān)系劑量反應(yīng)（效應(yīng)）關(guān)系保健食品質(zhì)量控制保健食品質(zhì)量控制生物活性物質(zhì)生物活性物質(zhì)功效成分功效成分通過檢驗和評通過檢驗和評價，加以控制價，加以控制第二部分第二部分保健食品安全性毒理學(xué)保健食品安全性毒理學(xué)檢驗及評價檢驗及評價主主 要要 內(nèi)內(nèi)

17、容容q 檢驗評價依據(jù)檢驗評價依據(jù)q 審評基本要求審評基本要求q 選擇毒理學(xué)試驗的基本原則選擇毒理學(xué)試驗的基本原則q 實驗動物的選擇實驗動物的選擇q 樣品的預(yù)處理原則樣品的預(yù)處理原則q 毒理學(xué)試驗項目要點介紹毒理學(xué)試驗項目要點介紹q 毒理學(xué)安全性評價時應(yīng)考慮的問題毒理學(xué)安全性評價時應(yīng)考慮的問題q 審評結(jié)論的判定審評結(jié)論的判定毒性及功能檢驗評價依據(jù)毒性及功能檢驗評價依據(jù)19961996年年3 3月衛(wèi)生部月衛(wèi)生部保健食品的管理方法保健食品的管理方法 保健食品的標(biāo)準(zhǔn)、功能評價、審批程序和監(jiān)督管理辦法保健食品的標(biāo)準(zhǔn)、功能評價、審批程序和監(jiān)督管理辦法19961996年年7 7月月GB15193GB1519

18、3食品安全性毒理學(xué)評價程序和方法食品安全性毒理學(xué)評價程序和方法 衛(wèi)生部衛(wèi)生部保健食品功能學(xué)評價程序和檢驗方法保健食品功能學(xué)評價程序和檢驗方法 僅包含了僅包含了1212項功能檢驗及評價方法項功能檢驗及評價方法20012001年年7 7月月 衛(wèi)生部衛(wèi)生部保健食品功能學(xué)評價程序和檢驗方法保健食品功能學(xué)評價程序和檢驗方法 可受理和評價的功能調(diào)整到可受理和評價的功能調(diào)整到3131項項20032003年年2 2月衛(wèi)生部月衛(wèi)生部保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范 將功能學(xué)、毒理學(xué)、功效成分及衛(wèi)生指標(biāo)檢驗評價方法三者合一將功能學(xué)、毒理學(xué)、功效成分及衛(wèi)生指標(biāo)檢驗評價方法三者合一審評的基本要求審

19、評的基本要求1. 1. 配方配方 原（輔）料、用量、理化性質(zhì)原（輔）料、用量、理化性質(zhì)2. 2. 劑量劑量 食用方法及用量食用方法及用量3. 3. 工藝工藝 規(guī)格化產(chǎn)品規(guī)格化產(chǎn)品 符合配方、工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)符合配方、工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)4. 4. 批號批號 注意批號是否一致注意批號是否一致, ,益生菌、奶制品等保質(zhì)期短的除外益生菌、奶制品等保質(zhì)期短的除外1. 1. 毒理學(xué)評價的四個階段毒理學(xué)評價的四個階段第一階段：急性毒性試驗第一階段：急性毒性試驗 經(jīng)口急性毒性試驗：經(jīng)口急性毒性試驗：LD50LD50，聯(lián)合急性毒性，一次最大耐受量試驗，聯(lián)合急性毒性，一次最大耐受量試驗第二階段：遺傳毒性試驗，第二階段：

20、遺傳毒性試驗，3030天喂養(yǎng)試驗，傳統(tǒng)致畸試驗天喂養(yǎng)試驗，傳統(tǒng)致畸試驗 遺傳毒性試驗：原核細胞和真核細胞，體內(nèi)試驗和體外試驗相結(jié)合遺傳毒性試驗：原核細胞和真核細胞，體內(nèi)試驗和體外試驗相結(jié)合AmesAmes或基因突變試驗；微核試驗或染色體畸變試驗；精子畸變試驗等或基因突變試驗；微核試驗或染色體畸變試驗；精子畸變試驗等第三階段：亞慢性毒性試驗第三階段：亞慢性毒性試驗 9090天喂養(yǎng)試驗、繁殖試驗、代謝試驗天喂養(yǎng)試驗、繁殖試驗、代謝試驗第四階段：慢性毒性試驗（包括致癌試驗）第四階段：慢性毒性試驗（包括致癌試驗）選擇毒理學(xué)試驗的基本原則選擇毒理學(xué)試驗的基本原則2.2.無需進行毒性試驗的保健食品無需進行

21、毒性試驗的保健食品q以普通食品和衛(wèi)生部規(guī)定的藥食同源物質(zhì)為原料生產(chǎn)以普通食品和衛(wèi)生部規(guī)定的藥食同源物質(zhì)為原料生產(chǎn)的；的； 1 1）以傳統(tǒng)工藝生產(chǎn)且食用方式與傳統(tǒng)方式相同的）以傳統(tǒng)工藝生產(chǎn)且食用方式與傳統(tǒng)方式相同的 2 2）以水提物配制生產(chǎn)、服用量為原料常規(guī)用量，且資料）以水提物配制生產(chǎn)、服用量為原料常規(guī)用量，且資料未提示具有不安全性未提示具有不安全性q用已列入營養(yǎng)強化劑或營養(yǎng)素補充劑名單的營養(yǎng)素化用已列入營養(yǎng)強化劑或營養(yǎng)素補充劑名單的營養(yǎng)素化合物為原料的，如其原料來源、生產(chǎn)工藝和產(chǎn)品質(zhì)量合物為原料的，如其原料來源、生產(chǎn)工藝和產(chǎn)品質(zhì)量均符合國家有關(guān)要求；均符合國家有關(guān)要求；選擇毒理學(xué)試驗的基本原

22、則選擇毒理學(xué)試驗的基本原則3. 3. 需進行一階段和三項致突變毒性試驗的保健食品需進行一階段和三項致突變毒性試驗的保健食品 屬于普通食品和衛(wèi)生部規(guī)定的藥食同源的物質(zhì)且用水屬于普通食品和衛(wèi)生部規(guī)定的藥食同源的物質(zhì)且用水提以外的其它常用工藝生產(chǎn)的：提以外的其它常用工藝生產(chǎn)的：（1 1）服用量與常規(guī)用量相同）服用量與常規(guī)用量相同 急性毒性、三項致突變試驗急性毒性、三項致突變試驗（2 2）服用量大于常規(guī)用量）服用量大于常規(guī)用量 還需加做還需加做3030天喂養(yǎng)試驗，必要時進行傳統(tǒng)致畸試天喂養(yǎng)試驗，必要時進行傳統(tǒng)致畸試驗和第三階段毒性試驗驗和第三階段毒性試驗選擇毒理學(xué)試驗的基本原則選擇毒理學(xué)試驗的基本原則

23、選擇毒理學(xué)試驗的基本原則選擇毒理學(xué)試驗的基本原則4.4. 需進行一、二階段毒性試驗的保健食品需進行一、二階段毒性試驗的保健食品r 以普通食品和衛(wèi)生部規(guī)定的藥食同源物質(zhì)以及允以普通食品和衛(wèi)生部規(guī)定的藥食同源物質(zhì)以及允許用作保健食品的物質(zhì)以外的動植物或動植物提取許用作保健食品的物質(zhì)以外的動植物或動植物提取物、微生物、化學(xué)合成物等為原料生產(chǎn)的保健食品，物、微生物、化學(xué)合成物等為原料生產(chǎn)的保健食品，原則上須進行第一、二階段的毒性試驗，必要時進原則上須進行第一、二階段的毒性試驗，必要時進行下一階段的毒性試驗。行下一階段的毒性試驗。r衛(wèi)生部規(guī)定允許使用的動植物及其提取物或微生物衛(wèi)生部規(guī)定允許使用的動植物及

24、其提取物或微生物為原料的。為原料的。5.5.需進行一至三階段毒性試驗的情況：需進行一至三階段毒性試驗的情況：q一、二階段試驗結(jié)果與國外產(chǎn)品不一致的一、二階段試驗結(jié)果與國外產(chǎn)品不一致的q國外少數(shù)國家或地區(qū)食用的原料或成分國外少數(shù)國家或地區(qū)食用的原料或成分q水提取物，大于常規(guī)服用量水提取物，大于常規(guī)服用量q用水提以外的其它常用工藝生產(chǎn)的，大于常規(guī)用量用水提以外的其它常用工藝生產(chǎn)的，大于常規(guī)用量選擇毒理學(xué)試驗的基本原則選擇毒理學(xué)試驗的基本原則6.6.需進行一至四階段毒性試驗的原料和成分需進行一至四階段毒性試驗的原料和成分國內(nèi)外均無食用先例國內(nèi)外均無食用先例7.7.敏感指標(biāo)及敏感試驗的保健食品敏感指標(biāo)

25、及敏感試驗的保健食品不同食用人群和（或）不同功能的保健食品不同食用人群和（或）不同功能的保健食品選擇毒理學(xué)試驗的基本原則選擇毒理學(xué)試驗的基本原則對受試保健食品的要求對受試保健食品的要求q 單一已知化學(xué)成分，應(yīng)提供物理和化學(xué)性質(zhì)單一已知化學(xué)成分，應(yīng)提供物理和化學(xué)性質(zhì)q 多種原料的配方產(chǎn)品，應(yīng)提供配方多種原料的配方產(chǎn)品，應(yīng)提供配方q 配方產(chǎn)品，必要時還應(yīng)提供各組分，功效成分的配方產(chǎn)品，必要時還應(yīng)提供各組分，功效成分的 q 物理和化學(xué)性質(zhì)及其檢測報告物理和化學(xué)性質(zhì)及其檢測報告q 提供原料來源、生產(chǎn)工藝、人的可能攝入量。使提供原料來源、生產(chǎn)工藝、人的可能攝入量。使q 用說明書等有關(guān)資料用說明書等有關(guān)資

26、料q 受試物應(yīng)符合既定配方和生產(chǎn)工藝的規(guī)格化產(chǎn)品受試物應(yīng)符合既定配方和生產(chǎn)工藝的規(guī)格化產(chǎn)品實驗動物的選擇及給樣量實驗動物的選擇及給樣量1.1.根據(jù)各項實驗的具體要求，合理選擇實驗動物根據(jù)各項實驗的具體要求，合理選擇實驗動物 常用大鼠和小鼠，品系不限，推薦使用近交系。常用大鼠和小鼠，品系不限，推薦使用近交系。2.2.動物應(yīng)符合動物應(yīng)符合實驗動物管理條例實驗動物管理條例 清潔級或清潔級以上清潔級或清潔級以上 動物合格證號及動物實驗室合格證號動物合格證號及動物實驗室合格證號3.3.灌胃量灌胃量 大鼠：大鼠：10 ml/kg10 ml/kgBWBW（若以水為溶劑，推薦（若以水為溶劑，推薦 20 ml/

27、kg20 ml/kgBWBW） 小鼠：小鼠：20ml/kg20ml/kgBWBW樣品的預(yù)處理原則樣品的預(yù)處理原則1.1.介質(zhì)的選擇介質(zhì)的選擇 應(yīng)選擇適合于受試動物的溶劑、乳化劑、助懸劑，要求無毒、應(yīng)選擇適合于受試動物的溶劑、乳化劑、助懸劑，要求無毒、與受試物不發(fā)生反應(yīng)、穩(wěn)定性好。與受試物不發(fā)生反應(yīng)、穩(wěn)定性好。 常用的介質(zhì)有：蒸餾水、食用植物油、淀粉、明膠及羧甲基常用的介質(zhì)有：蒸餾水、食用植物油、淀粉、明膠及羧甲基纖維素等。纖維素等。2.2.液體類液體類 受試物濃縮倍數(shù)應(yīng)符合試驗要求。受試物濃縮倍數(shù)應(yīng)符合試驗要求。 濃縮方法不應(yīng)破壞其有效成份，常用的有濃縮方法不應(yīng)破壞其有效成份，常用的有6060

28、7070減壓或減壓或常壓蒸發(fā)、冷凍干燥。常壓蒸發(fā)、冷凍干燥。 按工藝要求。按工藝要求。樣品的預(yù)處理原則樣品的預(yù)處理原則3.3.袋泡茶類袋泡茶類 處理方法與產(chǎn)品推薦飲用方法相同處理方法與產(chǎn)品推薦飲用方法相同 推薦用：推薦用：80-90 80-90 常壓用水浸泡常壓用水浸泡30min30min 水量為受試物的水量為受試物的1010倍，提取倍，提取2 2次，次，2 2次提取液合并濃縮至次提取液合并濃縮至所需濃度所需濃度 標(biāo)明該濃縮液與受試物的比例標(biāo)明該濃縮液與受試物的比例樣品的預(yù)處理原則樣品的預(yù)處理原則4.4.含乙醇類含乙醇類（1 1）不需濃縮的受試物）不需濃縮的受試物 乙醇濃度乙醇濃度151515

29、 乙醇濃度應(yīng)調(diào)至乙醇濃度應(yīng)調(diào)至1515（2 2）需濃縮的受試物）需濃縮的受試物 乙醇濃度乙醇濃度151515 濃縮后調(diào)至濃縮后調(diào)至1515乙醇濃度乙醇濃度 在進行乙醇濃度調(diào)整時必須用原酒基在進行乙醇濃度調(diào)整時必須用原酒基樣品的預(yù)處理原則樣品的預(yù)處理原則5.5.膨脹系數(shù)較高的受試物膨脹系數(shù)較高的受試物 選擇可溶性介質(zhì)選擇可溶性介質(zhì) 給受試物的方法：灌胃給受試物的方法：灌胃 其最高濃度最大灌胃量時達不到人體推薦量的其最高濃度最大灌胃量時達不到人體推薦量的100100倍，倍，按采用實際達到的倍數(shù)按采用實際達到的倍數(shù) 標(biāo)明受試物的膨脹系數(shù)標(biāo)明受試物的膨脹系數(shù)樣品的預(yù)處理原則樣品的預(yù)處理原則6.6.益生

30、菌等微生物類保健食品益生菌等微生物類保健食品 在進行在進行 AmesAmes試驗或體外細胞試驗時需將受試物滅活。試驗或體外細胞試驗時需將受試物滅活。 需濃縮的應(yīng)采用低溫干燥法或由企業(yè)提供所需濃度的受試物（附方需濃縮的應(yīng)采用低溫干燥法或由企業(yè)提供所需濃度的受試物（附方法、技術(shù)參數(shù)）。法、技術(shù)參數(shù)）。7.7.以食品為載體的受試物以食品為載體的受試物 （1 1）有營養(yǎng)價值：按設(shè)計量進行飼料的營養(yǎng)成份調(diào)整，提供詳細的說）有營養(yǎng)價值：按設(shè)計量進行飼料的營養(yǎng)成份調(diào)整，提供詳細的說明。明。 （2 2）大豆蛋白、乳清蛋白）大豆蛋白、乳清蛋白 如質(zhì)量、工藝等符合食品標(biāo)準(zhǔn)和安全要求，允許去除。如質(zhì)量、工藝等符合食

31、品標(biāo)準(zhǔn)和安全要求，允許去除。 如僅以該原料生產(chǎn)的，可申請免做毒理學(xué)試驗。如僅以該原料生產(chǎn)的，可申請免做毒理學(xué)試驗。毒理學(xué)試驗項目要點介毒理學(xué)試驗項目要點介紹紹q 急性經(jīng)口毒性試驗急性經(jīng)口毒性試驗q 鼠傷寒沙門氏菌（鼠傷寒沙門氏菌（AmesAmes）試驗）試驗q 骨髓細胞微核試驗骨髓細胞微核試驗q 哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗q 小鼠精子畸形試驗小鼠精子畸形試驗q 小鼠睪丸染色體畸變試驗小鼠睪丸染色體畸變試驗q 3030天喂養(yǎng)試驗天喂養(yǎng)試驗急性經(jīng)口毒性試驗急性經(jīng)口毒性試驗?zāi)康模耗康模簻y定測定LDLD5050，毒性分級。了解毒性強度、性質(zhì)和可能的靶，毒性分級。了解毒

32、性強度、性質(zhì)和可能的靶器官，為進一步的毒性試驗提供劑量和觀察指標(biāo)的選擇依據(jù)。器官，為進一步的毒性試驗提供劑量和觀察指標(biāo)的選擇依據(jù)。原理：原理：急性毒性：經(jīng)口一次性、急性毒性：經(jīng)口一次性、24h24h內(nèi)多次給予，短時間內(nèi)的毒性反內(nèi)多次給予，短時間內(nèi)的毒性反應(yīng)。致死劑量通常用半數(shù)致死劑量應(yīng)。致死劑量通常用半數(shù)致死劑量LDLD5050表示。表示。急性聯(lián)合毒性：兩種或兩種以上的受試物，可能發(fā)生拮抗、相急性聯(lián)合毒性：兩種或兩種以上的受試物，可能發(fā)生拮抗、相加或協(xié)同的聯(lián)合方式，可以根據(jù)一定的公式計算和判定標(biāo)準(zhǔn)來加或協(xié)同的聯(lián)合方式，可以根據(jù)一定的公式計算和判定標(biāo)準(zhǔn)來確定這三種不同的作用。確定這三種不同的作用

33、。急性經(jīng)口毒性試驗急性經(jīng)口毒性試驗時間周期時間周期：一般為：一般為3 3周周 3-53-5天，大、小鼠適應(yīng)期天，大、小鼠適應(yīng)期 7-147-14天，染毒及實驗觀察期天，染毒及實驗觀察期 發(fā)生動物死亡時，應(yīng)進行大體解剖發(fā)生動物死亡時，應(yīng)進行大體解剖觀察和評價指標(biāo)觀察和評價指標(biāo)：毒性反應(yīng)癥狀：各器官系統(tǒng)的異常表現(xiàn)（中樞、自主神經(jīng)、呼毒性反應(yīng)癥狀：各器官系統(tǒng)的異常表現(xiàn)（中樞、自主神經(jīng)、呼吸、心血管、胃腸、生殖泌尿系統(tǒng)、皮毛、粘膜等）及體重變吸、心血管、胃腸、生殖泌尿系統(tǒng)、皮毛、粘膜等）及體重變化化死亡情況：死亡的時間、數(shù)量、性別、表現(xiàn)等。死亡情況：死亡的時間、數(shù)量、性別、表現(xiàn)等。大體尸檢結(jié)果：如果發(fā)

34、生死亡動物大體尸檢結(jié)果：如果發(fā)生死亡動物急性毒性（急性毒性（LDLD5050）劑量分級表）劑量分級表級級 別別大鼠口服大鼠口服LD50， mg/kg相當(dāng)于人的致死量相當(dāng)于人的致死量mg/kgg/人人極毒極毒150005000002500急性經(jīng)口毒性試驗急性經(jīng)口毒性試驗試驗結(jié)果的判定：試驗結(jié)果的判定：1. LD501. LD50人可能攝入量的人可能攝入量的100100倍，放棄；反之繼續(xù)下倍，放棄；反之繼續(xù)下一步試驗。一步試驗。2. LD5010g/kgbw2. LD5010g/kgbw或按最大耐受量染毒而未出現(xiàn)動或按最大耐受量染毒而未出現(xiàn)動物死亡的，可繼續(xù)下一步試驗。物死亡的，可繼續(xù)下一步試驗。

35、鼠傷寒沙門氏菌（鼠傷寒沙門氏菌（Ames）試驗）試驗?zāi)康模耗康模簷z測受試物的誘變性，預(yù)測其遺傳危害和潛在致癌作用的可檢測受試物的誘變性，預(yù)測其遺傳危害和潛在致癌作用的可能性。能性。 時間周期：時間周期：一般為一般為2 2周周 第一周，鼠傷寒沙門氏菌種、試劑、培養(yǎng)基準(zhǔn)備第一周，鼠傷寒沙門氏菌種、試劑、培養(yǎng)基準(zhǔn)備 第二周，染毒，培養(yǎng)第二周，染毒，培養(yǎng)48h48h，菌落計數(shù)，菌落計數(shù)劑量設(shè)計：劑量設(shè)計：決定受試物最高劑量的因素是對細菌的毒性及其溶解度。決定受試物最高劑量的因素是對細菌的毒性及其溶解度。最低劑量為最低劑量為0.2ug/0.2ug/皿；最高劑量為皿；最高劑量為5mg/5mg/皿，或最大溶

36、解劑量，最大皿，或最大溶解劑量，最大飽和劑量以及最小毒性劑量?？稍O(shè)五個劑量組，組間距不超過飽和劑量以及最小毒性劑量?？稍O(shè)五個劑量組，組間距不超過5 5倍。倍。同時設(shè)：陽性對照組，溶劑對照組和未處理對照組。同時設(shè)：陽性對照組，溶劑對照組和未處理對照組。鼠傷寒沙門氏菌（鼠傷寒沙門氏菌（Ames）試驗）試驗觀察及評價指標(biāo)：觀察及評價指標(biāo)： 各受試物組及三個對照組的四種菌株（各受試物組及三個對照組的四種菌株（TA97aTA97a，TA98TA98，TA100TA100和和TA102TA102）分別在加和不加）分別在加和不加S9S9情況下的菌落計數(shù)。情況下的菌落計數(shù)。結(jié)果評價（摻入法）：結(jié)果評價（摻入法

37、）： 受試物組回變菌落數(shù)增加一倍以上（即回變菌落數(shù)受試物組回變菌落數(shù)增加一倍以上（即回變菌落數(shù)22未處理對照組數(shù)），并有劑量反應(yīng)關(guān)系或有可重復(fù)未處理對照組數(shù)），并有劑量反應(yīng)關(guān)系或有可重復(fù)的陽性反應(yīng)，即可判試驗陽性。的陽性反應(yīng)，即可判試驗陽性。骨髓細胞微核試驗骨髓細胞微核試驗?zāi)康哪康模簷z測整體動物體內(nèi)骨髓嗜多染紅細胞微核發(fā)生率，以評檢測整體動物體內(nèi)骨髓嗜多染紅細胞微核發(fā)生率，以評價受試物致突變的可能性。價受試物致突變的可能性。原理原理：微核是在細胞有絲分裂后期染色體有規(guī)律地進入子細胞微核是在細胞有絲分裂后期染色體有規(guī)律地進入子細胞形成細胞核時，仍然留在細胞質(zhì)中的色單體或染色體的形成細胞核時，仍然

38、留在細胞質(zhì)中的色單體或染色體的無著絲點斷片無著絲點斷片 。末期之后，單獨形成一個或幾個規(guī)則的。末期之后，單獨形成一個或幾個規(guī)則的次核，被包含在細胞胞質(zhì)內(nèi)，因比主核小，故稱為微核。次核，被包含在細胞胞質(zhì)內(nèi)，因比主核小，故稱為微核。骨髓細胞微核試驗骨髓細胞微核試驗時間周期時間周期：一般為：一般為2 2周周 3-53-5天適應(yīng)期天適應(yīng)期 小鼠經(jīng)口染毒，小鼠經(jīng)口染毒，30h30h給受試物法給受試物法 取胸骨或股骨，收集骨髓，涂片，染色，鏡檢取胸骨或股骨，收集骨髓，涂片，染色，鏡檢劑量設(shè)計劑量設(shè)計：至少設(shè)置：至少設(shè)置3 3個劑量，最高劑量組為動物出現(xiàn)嚴重中個劑量，最高劑量組為動物出現(xiàn)嚴重中毒表現(xiàn)和毒表現(xiàn)

39、和/ /或個別動物出現(xiàn)死亡的劑量。低劑量組應(yīng)不出現(xiàn)毒或個別動物出現(xiàn)死亡的劑量。低劑量組應(yīng)不出現(xiàn)毒性反應(yīng)。一般取性反應(yīng)。一般取LD50LD50的的1/21/2、1/41/4、1/81/8作為三個劑量。當(dāng)受試作為三個劑量。當(dāng)受試物的物的LD5010g/kg.bwLD5010g/kg.bw時，最高劑量通常采用時，最高劑量通常采用10g/kg.bw10g/kg.bw。同。同時設(shè)陽性對照組和溶劑對照組。時設(shè)陽性對照組和溶劑對照組。骨髓細胞微核試驗骨髓細胞微核試驗觀察及評價指標(biāo)觀察及評價指標(biāo)：每只動物計數(shù)每只動物計數(shù)10001000個嗜多染紅細胞個嗜多染紅細胞 ，記錄含有微核的細，記錄含有微核的細胞數(shù)，并

40、計算微核千分率。同時觀察嗜多染紅細胞與成胞數(shù)，并計算微核千分率。同時觀察嗜多染紅細胞與成熟紅細胞的比例。熟紅細胞的比例。 結(jié)果評價結(jié)果評價：受試物組與對照組微核率相比，增高呈劑量反應(yīng)關(guān)系并受試物組與對照組微核率相比，增高呈劑量反應(yīng)關(guān)系并有統(tǒng)計學(xué)意義，試驗結(jié)果為陽性。有統(tǒng)計學(xué)意義，試驗結(jié)果為陽性。哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗?zāi)康哪康模簷z測受試物對整體動物骨髓細胞染色體畸變的致：檢測受試物對整體動物骨髓細胞染色體畸變的致突變性，以評價其致突變的可能性。突變性，以評價其致突變的可能性。原理原理：當(dāng)受試物作用于細胞周期：當(dāng)受試物作用于細胞周期G1G1期和期和S S期時，

41、可誘發(fā)期時，可誘發(fā)染色體型畸變，而作用于染色體型畸變，而作用于G2G2期時則誘發(fā)染色體單體型畸期時則誘發(fā)染色體單體型畸變。給動物腹腔注射秋水仙素，抑制細胞分裂時紡錘體變。給動物腹腔注射秋水仙素，抑制細胞分裂時紡錘體的形成，增加中期分裂相細胞的比例，并使染色體絲縮的形成，增加中期分裂相細胞的比例，并使染色體絲縮短、分散，輪廓清晰。在顯微鏡下便可觀察染色體數(shù)目短、分散，輪廓清晰。在顯微鏡下便可觀察染色體數(shù)目和形態(tài)。和形態(tài)。哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗時間周期時間周期：一般為：一般為3 3周周 3-53-5天適應(yīng)期天適應(yīng)期 小鼠或大鼠經(jīng)口染毒小鼠或大鼠經(jīng)口染毒2-42

42、-4次，每次間隔次，每次間隔24h24h，在，在末次染毒末次染毒18-24h18-24h進行取材（取材前進行取材（取材前2-4h2-4h，腹腔注射秋水，腹腔注射秋水仙素）。仙素）。 取股骨，收集骨髓，制片，染色，鏡檢取股骨，收集骨髓，制片，染色，鏡檢劑量設(shè)計劑量設(shè)計：同骨髓細胞微核試驗：同骨髓細胞微核試驗哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗觀察及評價指標(biāo)觀察及評價指標(biāo)：每只動物分析每只動物分析100100個中期相細胞個中期相細胞 ，每個劑量組不少于，每個劑量組不少于10001000個。記錄染色體數(shù)目及結(jié)構(gòu)的改變。個。記錄染色體數(shù)目及結(jié)構(gòu)的改變。結(jié)果評價結(jié)果評價：受試物組

43、與對照組染色體畸變率相比，增高呈劑量反應(yīng)受試物組與對照組染色體畸變率相比，增高呈劑量反應(yīng)關(guān)系并有統(tǒng)計學(xué)意義，試驗結(jié)果為陽性。關(guān)系并有統(tǒng)計學(xué)意義，試驗結(jié)果為陽性。小鼠精子畸形試驗小鼠精子畸形試驗?zāi)康哪康模簷z測整體動物體內(nèi)精子畸形發(fā)生率，以評價受試物對體檢測整體動物體內(nèi)精子畸形發(fā)生率，以評價受試物對體內(nèi)生殖細胞的致突變作用。內(nèi)生殖細胞的致突變作用。原理原理：小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遺傳性，許多常染小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遺傳性，許多常染色體及色體及X X、Y Y性染色體基因決定精子形態(tài)。精子的畸形主性染色體基因決定精子形態(tài)。精子的畸形主要是指形態(tài)的異常，已知精子的畸形是決定精子形成

44、的要是指形態(tài)的異常，已知精子的畸形是決定精子形成的基因發(fā)生突變的結(jié)果。因此形態(tài)的改變提示有關(guān)基因及基因發(fā)生突變的結(jié)果。因此形態(tài)的改變提示有關(guān)基因及其蛋白產(chǎn)物的改變。其蛋白產(chǎn)物的改變。小鼠精子畸形試驗小鼠精子畸形試驗時間周期時間周期：一般為：一般為7 7周周 3-53-5天適應(yīng)期天適應(yīng)期 小鼠經(jīng)口連續(xù)染毒小鼠經(jīng)口連續(xù)染毒5 5天，于首次給樣后的天，于首次給樣后的3535天處死動物天處死動物 取兩側(cè)附睪，收集精子，滴片，染色，鏡檢取兩側(cè)附睪，收集精子，滴片，染色，鏡檢劑量設(shè)計劑量設(shè)計：同骨髓細胞微核試驗：同骨髓細胞微核試驗小鼠精子畸形試驗小鼠精子畸形試驗觀察及評價指標(biāo)觀察及評價指標(biāo)：每只動物檢查每

45、只動物檢查10001000個精子個精子 ，記錄精子畸形數(shù)目及，記錄精子畸形數(shù)目及類型。類型。結(jié)果評價結(jié)果評價：受試物組與對照組精子畸變率相比，增高呈劑量反受試物組與對照組精子畸變率相比，增高呈劑量反應(yīng)關(guān)系并有統(tǒng)計學(xué)意義，試驗結(jié)果為陽性。應(yīng)關(guān)系并有統(tǒng)計學(xué)意義，試驗結(jié)果為陽性。小鼠睪丸染色體畸變試驗小鼠睪丸染色體畸變試驗?zāi)康哪康模簷z測整體動物睪丸染色體畸變發(fā)生率，以評：檢測整體動物睪丸染色體畸變發(fā)生率，以評價受試物對整體哺乳動物睪丸生殖細胞的致突變性。價受試物對整體哺乳動物睪丸生殖細胞的致突變性。原理原理：不同周期的雄性生殖細胞對化學(xué)物質(zhì)的敏感：不同周期的雄性生殖細胞對化學(xué)物質(zhì)的敏感性不同，多數(shù)情

46、況下化學(xué)誘變劑誘發(fā)染色體畸變必性不同，多數(shù)情況下化學(xué)誘變劑誘發(fā)染色體畸變必須經(jīng)過須經(jīng)過DNADNA復(fù)制期，故在前細線期處理。第復(fù)制期，故在前細線期處理。第121214d14d采樣，以觀察作用于前細線期引起的精母細胞染色采樣，以觀察作用于前細線期引起的精母細胞染色體畸變效應(yīng)。體畸變效應(yīng)。小鼠睪丸染色體畸變試驗小鼠睪丸染色體畸變試驗時間周期時間周期：一般為：一般為7 7周周 3-53-5天適應(yīng)期天適應(yīng)期 小鼠經(jīng)口連續(xù)染毒小鼠經(jīng)口連續(xù)染毒5 5天，與首次給樣后天，與首次給樣后的的12-1412-14天處死動物取材，（取材前天處死動物取材，（取材前6h6h，腹腔注，腹腔注 射射秋水仙素）。取兩側(cè)睪丸，

47、收集生殖細胞，滴片，秋水仙素）。取兩側(cè)睪丸，收集生殖細胞，滴片，染色，鏡檢染色，鏡檢劑量設(shè)計劑量設(shè)計：同骨髓細胞微核試驗：同骨髓細胞微核試驗小鼠睪丸染色體畸變試驗小鼠睪丸染色體畸變試驗觀察及評價指標(biāo)觀察及評價指標(biāo)：每只動物分析每只動物分析100100個中期相細胞個中期相細胞 ，記錄染色體數(shù)目，記錄染色體數(shù)目及結(jié)構(gòu)的改變（包括斷片、易位、畸變細胞率、常及結(jié)構(gòu)的改變（包括斷片、易位、畸變細胞率、常染色體單價體、性染色體單價體等）。染色體單價體、性染色體單價體等）。結(jié)果評價結(jié)果評價：受試物組與對照組的斷片、易位、畸變細胞率、常受試物組與對照組的斷片、易位、畸變細胞率、常染色體單價體、性染色體單價體等

48、差異有統(tǒng)計學(xué)意染色體單價體、性染色體單價體等差異有統(tǒng)計學(xué)意義，試驗結(jié)果為陽性。義，試驗結(jié)果為陽性。遺傳毒性試驗組合遺傳毒性試驗組合試驗結(jié)果的判定試驗結(jié)果的判定：如三項致突變試驗（如三項致突變試驗（AmesAmes試驗，微核或骨髓細胞染試驗，微核或骨髓細胞染色體畸變試驗，精子畸形或睪丸染色體畸變試驗）色體畸變試驗，精子畸形或睪丸染色體畸變試驗）中，體外或體內(nèi)有一項或以上陽性，一般應(yīng)放棄該中，體外或體內(nèi)有一項或以上陽性，一般應(yīng)放棄該受試物用于保健食品。受試物用于保健食品。如三項試驗均為陰性，則可繼續(xù)進行下一步的毒性如三項試驗均為陰性，則可繼續(xù)進行下一步的毒性試驗。試驗。30天喂養(yǎng)試驗天喂養(yǎng)試驗?zāi)康?/p>

49、目的：急性毒性試驗的基礎(chǔ)上，此試驗可進一步了：急性毒性試驗的基礎(chǔ)上，此試驗可進一步了解毒性作用，特別是觀察對生長發(fā)育的影響，并可解毒性作用，特別是觀察對生長發(fā)育的影響，并可初步估計最大觀察到的無作用劑量，估計亞慢性攝初步估計最大觀察到的無作用劑量，估計亞慢性攝入的危害性。入的危害性。原理原理： 以不同劑量受試物每日經(jīng)口給予各組實驗以不同劑量受試物每日經(jīng)口給予各組實驗動物，連續(xù)動物，連續(xù)3030天。染毒期間每日密切觀察動物的毒天。染毒期間每日密切觀察動物的毒性反應(yīng)，染毒結(jié)束后進行大體解剖、血生化及病理性反應(yīng)，染毒結(jié)束后進行大體解剖、血生化及病理檢查，以此觀察重復(fù)喂食不同劑量的受試物對動物檢查，以

50、此觀察重復(fù)喂食不同劑量的受試物對動物引起的有害作用。引起的有害作用。30天喂養(yǎng)試驗天喂養(yǎng)試驗時間周期時間周期：在獲得了急性毒性數(shù)據(jù)后，一般為：在獲得了急性毒性數(shù)據(jù)后，一般為2 2月月 3-53-5天，大鼠適應(yīng)期天，大鼠適應(yīng)期 3030天，染毒及實驗觀察期天，染毒及實驗觀察期 再進行大體解剖、血液、生化、器官病再進行大體解剖、血液、生化、器官病 理檢查。理檢查。30天喂養(yǎng)試驗天喂養(yǎng)試驗劑量設(shè)計劑量設(shè)計：至少設(shè)三個劑量組和一個對照組。高劑量應(yīng)：至少設(shè)三個劑量組和一個對照組。高劑量應(yīng)能引起動物明顯毒效應(yīng)但不造成動物死亡。低劑量應(yīng)不能引起動物明顯毒效應(yīng)但不造成動物死亡。低劑量應(yīng)不出現(xiàn)任何毒作用，同時在

51、這二劑量之間設(shè)幾個中間劑量出現(xiàn)任何毒作用，同時在這二劑量之間設(shè)幾個中間劑量組。組。 對于能獲得對于能獲得LD50LD50的受試物的受試物：最高劑量為：最高劑量為10102525的的LD50LD50，最低劑量組至少為人可能攝入量的，最低劑量組至少為人可能攝入量的3 3倍。倍。 對于不能獲得對于不能獲得LD50LD50的受試物的受試物：最高劑量為人可能攝：最高劑量為人可能攝入量的入量的100100倍，或按最大灌胃劑量或在飼料中的最大摻倍，或按最大灌胃劑量或在飼料中的最大摻入量。入量。30天喂養(yǎng)試驗天喂養(yǎng)試驗觀察及評價指標(biāo)觀察及評價指標(biāo)：一般情況觀察一般情況觀察：每日的表現(xiàn)、行為、中毒和死亡情況。每

52、周：每日的表現(xiàn)、行為、中毒和死亡情況。每周1 1次體重及次體重及2 2次食物攝入量，計算食物利用率。次食物攝入量，計算食物利用率。血液學(xué)指標(biāo)血液學(xué)指標(biāo)：喂養(yǎng)結(jié)束后測定血紅蛋白、紅和白細胞總數(shù)及：喂養(yǎng)結(jié)束后測定血紅蛋白、紅和白細胞總數(shù)及分類，必要時測定血小板或網(wǎng)織紅細胞數(shù)等指標(biāo)。分類，必要時測定血小板或網(wǎng)織紅細胞數(shù)等指標(biāo)。生化學(xué)指標(biāo)生化學(xué)指標(biāo)：喂養(yǎng)結(jié)束后測定谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、尿：喂養(yǎng)結(jié)束后測定谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、尿素氮、肌肝、血糖、白蛋白、總蛋白、膽固醇和甘油三酯。素氮、肌肝、血糖、白蛋白、總蛋白、膽固醇和甘油三酯。病理檢查病理檢查：大體解剖、臟器稱重、組織病理學(xué)檢查。：大體解剖、臟器

53、稱重、組織病理學(xué)檢查。30天喂養(yǎng)試驗天喂養(yǎng)試驗試驗結(jié)果的判定試驗結(jié)果的判定： 對于只要求進行一、二階段試驗者，最大未觀察到有害對于只要求進行一、二階段試驗者，最大未觀察到有害作用劑量作用劑量人可能攝入量的人可能攝入量的100100倍，綜合其它試驗結(jié)果可初倍，綜合其它試驗結(jié)果可初步做出安全性評價。步做出安全性評價。 最小觀察到有害作用劑量最小觀察到有害作用劑量人可能攝入量的人可能攝入量的100100倍，或倍，或觀察到毒性反應(yīng)的最小劑量組其受試物在飼料中比例觀察到毒性反應(yīng)的最小劑量組其受試物在飼料中比例1010，放棄。放棄。 在中低劑量組中個別指標(biāo)與對照組相比有差異，應(yīng)綜合在中低劑量組中個別指標(biāo)與

54、對照組相比有差異，應(yīng)綜合分析，決定取舍或進行下一步毒理試驗。分析，決定取舍或進行下一步毒理試驗。其它試驗結(jié)果判斷其它試驗結(jié)果判斷q 傳統(tǒng)致畸試驗傳統(tǒng)致畸試驗： 需大于或等于人攝入量的需大于或等于人攝入量的100100倍。在倍。在5050倍至倍至100100倍之間需倍之間需進行安全性評價，小于進行安全性評價，小于5050倍需放棄。倍需放棄。q 9090天喂養(yǎng)試驗、繁殖試驗天喂養(yǎng)試驗、繁殖試驗：1.1.僅在國外少數(shù)國家或國內(nèi)局部地區(qū)有食用歷史的原料或成僅在國外少數(shù)國家或國內(nèi)局部地區(qū)有食用歷史的原料或成分，需大于或等于人攝入量的分，需大于或等于人攝入量的100100倍。倍。2.2.國內(nèi)外均無食用歷史

55、的原料或成分時，需大于或等于人攝國內(nèi)外均無食用歷史的原料或成分時，需大于或等于人攝入量的入量的300300倍。在倍。在100100倍至倍至300300倍之間需進行慢性毒性試驗，倍之間需進行慢性毒性試驗，小于小于100100倍需放棄。倍需放棄。其它試驗結(jié)果判斷其它試驗結(jié)果判斷q 慢性毒性試驗慢性毒性試驗： 以以LD50LD50或或3030天喂養(yǎng)試驗的最大未觀察到有害作用劑量設(shè)計受試天喂養(yǎng)試驗的最大未觀察到有害作用劑量設(shè)計受試物各劑量組，未見有毒性作用。物各劑量組，未見有毒性作用。q 致癌試驗陽性判定依據(jù)致癌試驗陽性判定依據(jù)：腫瘤只發(fā)生在實驗組動物，對照組中無腫瘤發(fā)生。腫瘤只發(fā)生在實驗組動物，對照

56、組中無腫瘤發(fā)生。實驗組和對照組均發(fā)生腫瘤，但實驗組發(fā)生率高。實驗組和對照組均發(fā)生腫瘤，但實驗組發(fā)生率高。實驗組和對照組腫瘤發(fā)生率無明顯差異，但實驗組發(fā)生時間較早。實驗組和對照組腫瘤發(fā)生率無明顯差異，但實驗組發(fā)生時間較早。符合以上三項中的情況之一，并經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理有統(tǒng)計學(xué)意義，可認符合以上三項中的情況之一，并經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理有統(tǒng)計學(xué)意義，可認為致癌試驗陽性。為致癌試驗陽性。安全性評價的科學(xué)性和藝術(shù)性安全性評價的科學(xué)性和藝術(shù)性安全性評價的藝術(shù)性安全性評價的藝術(shù)性：1.1.動物實驗結(jié)果外推到人必須考慮動物與人的種屬差異；動物實驗結(jié)果外推到人必須考慮動物與人的種屬差異；2.2.安全性標(biāo)準(zhǔn)與社會經(jīng)濟基礎(chǔ)、技術(shù)

57、能力的相符性；安全性標(biāo)準(zhǔn)與社會經(jīng)濟基礎(chǔ)、技術(shù)能力的相符性；3.3.安全性標(biāo)準(zhǔn)與社會和公眾利益之間的平衡性。安全性標(biāo)準(zhǔn)與社會和公眾利益之間的平衡性。結(jié)論結(jié)論：在對化學(xué)物質(zhì)進行科學(xué)地安全性評價之后，應(yīng)結(jié)合試：在對化學(xué)物質(zhì)進行科學(xué)地安全性評價之后，應(yīng)結(jié)合試驗的局限性，社會經(jīng)濟狀況，人們的生活習(xí)慣等因素，對評驗的局限性，社會經(jīng)濟狀況，人們的生活習(xí)慣等因素，對評價結(jié)果作出一個合理的分析，為衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的制定提供具有實價結(jié)果作出一個合理的分析，為衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的制定提供具有實際指導(dǎo)意義的依據(jù)。際指導(dǎo)意義的依據(jù)。應(yīng)綜合考慮的問題應(yīng)綜合考慮的問題1.1.試驗指標(biāo)的統(tǒng)計學(xué)意義和生物學(xué)意義試驗指標(biāo)的統(tǒng)計學(xué)意義和生物學(xué)意義

58、在分析試驗組與對照組指標(biāo)統(tǒng)計學(xué)的顯著性時，在分析試驗組與對照組指標(biāo)統(tǒng)計學(xué)的顯著性時，應(yīng)根據(jù)其有無劑量反應(yīng)關(guān)系及與本實驗室的歷史性應(yīng)根據(jù)其有無劑量反應(yīng)關(guān)系及與本實驗室的歷史性對照值范圍比較的原則對照值范圍比較的原則, ,來綜合考慮指標(biāo)差異有無來綜合考慮指標(biāo)差異有無生物學(xué)意義。生物學(xué)意義。2.2.生理作用與毒性作用生理作用與毒性作用 對實驗中某些指標(biāo)的異常改變，在結(jié)果分析時對實驗中某些指標(biāo)的異常改變，在結(jié)果分析時要注意區(qū)分是生理學(xué)表現(xiàn)還是受試物的毒性作用。要注意區(qū)分是生理學(xué)表現(xiàn)還是受試物的毒性作用。應(yīng)綜合考慮的問題應(yīng)綜合考慮的問題3.3.時間時間- -毒性效應(yīng)關(guān)系毒性效應(yīng)關(guān)系 對由受試物引起的毒性

59、效應(yīng)進行分析評價時，對由受試物引起的毒性效應(yīng)進行分析評價時，要考慮在同一劑量水平下毒性效應(yīng)隨時間的變化要考慮在同一劑量水平下毒性效應(yīng)隨時間的變化情況。情況。4.4.特殊人群和敏感人群特殊人群和敏感人群 對孕婦、乳母或兒童食用的保健食品，應(yīng)特對孕婦、乳母或兒童食用的保健食品，應(yīng)特別注意其胚胎毒性或生殖發(fā)育毒性、神經(jīng)毒性和別注意其胚胎毒性或生殖發(fā)育毒性、神經(jīng)毒性和免疫毒性。免疫毒性。應(yīng)綜合考慮的問題應(yīng)綜合考慮的問題5.5.人的可能攝入量較大的保健食品人的可能攝入量較大的保健食品 應(yīng)考慮給予受試物量過大時，可能影響營養(yǎng)應(yīng)考慮給予受試物量過大時，可能影響營養(yǎng)素攝入量及其生物利用率，從而導(dǎo)致某些毒理學(xué)素

60、攝入量及其生物利用率，從而導(dǎo)致某些毒理學(xué)表現(xiàn)，而非受試物本身的毒性作用所致。表現(xiàn)，而非受試物本身的毒性作用所致。6.6.含乙醇的保健食品含乙醇的保健食品 對實驗中出現(xiàn)的某些指標(biāo)的異常改變，在結(jié)對實驗中出現(xiàn)的某些指標(biāo)的異常改變，在結(jié)果分析評價時應(yīng)注意區(qū)分是乙醇本身還是其它成果分析評價時應(yīng)注意區(qū)分是乙醇本身還是其它成分的作用。分的作用。應(yīng)綜合考慮的問題應(yīng)綜合考慮的問題7.7.動物年齡對試驗結(jié)果的影響動物年齡對試驗結(jié)果的影響 對實驗中出現(xiàn)的某些指標(biāo)的異常改變，要考對實驗中出現(xiàn)的某些指標(biāo)的異常改變，要考慮是否因動物年齡選擇不當(dāng)所致。慮是否因動物年齡選擇不當(dāng)所致。8.8.安全系數(shù)安全系數(shù) 鑒于動物、人的