苦參素對實驗性肝纖維化的干預(yù)作用

1、苦參素對實驗性肝纖維化的干預(yù)作用                作者：鄂裘愷 郁林曦 朱歆鑫 張慎彥 羅琳 周鳴鳴 鄂群 【摘要】【關(guān)鍵詞】  肝纖維化；細胞外基質(zhì)；大鼠；苦參素；四氯化碳   Abstract   Objective:To investigate the intervention effect of oxymatrine on experimental liver fibrosi

2、s induced by carbon tetrachloride（CCl4） in rats. Methods: Sprague-Dawley （SD） 50 rats were randomly divided into 5 groups: the normal control group， model control group without treatment， model with oxymatrine treatment of low dose（40 mg·kg-1）， middle dose（80 mg·kg-1） and high dose group（1

3、60 mg·kg-1）. The rat liver fibrosis model was prepared by administration of CCl4. In the development of fibrosis， oxymatrine was administered to rats from the 4th week to 10th week after CCl4 induction. Then rats were sacrificed， the serology related indicant in rat serum， liver index， content

4、of HYP and MDA in the homogenate of hepatic tissue were measured. Results: Oxymatrine lower the level of ALT， AST，TBA，GGT in serum and liver index as well reduced the HYP and MDA content in liver tissues in liver fibrosis model rats. Conclusion: Oxymatrine has protective effect on CCl4-induced liver

5、 fibrosis in rats.   Key words   Liver fibrosis; Extracellular matrix; Rat；Oxymatrine; Carbon tetrachloride   肝纖維化（liver fibrosis）是各種慢性肝病發(fā)展為肝硬化（1iver cirrhosis）的必經(jīng)階段。肝纖維化是由各種因素引起肝細胞損害和炎癥，在修復(fù)過程中導(dǎo)致肝臟細胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）異常增多和過度沉積的病理過程?？鄥⑺赜址Q氧化苦參堿，是由中藥苦豆子和苦參根中提取的一

6、種生物堿，一般認為其具有抗炎、抗病毒、調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，抗腫瘤等生物學(xué)作用1-2。本研究觀察苦參素對CCl4誘導(dǎo)的實驗性肝纖維化的干預(yù)作用，為進一步開發(fā)利用苦參素提供實驗依據(jù)。    1   材料與方法   1.1   實驗動物   SD大鼠70只，體重140160 g，雌雄兼用，由南通大學(xué)實驗動物中心提供。動物許可證號：SCXK（蘇）2002-0019。所有動物自由攝食，飲水。   1.2   藥品與試劑   （1）四氯化碳（C

7、Cl4）：宜興市第二化學(xué)試劑廠，批號20010608，使用時用食用花生油配制成40%的油溶液；（2）苦參素：（主要成分為氧化苦參堿oxymatrine， OM）:江蘇正大天晴藥業(yè)股份有限公司，批號:20021004。細結(jié)晶顆粒，按需用滅菌生理鹽水配制呈溶液使用；（3）丙二醛（MDA）測定試劑盒，南京建成生物醫(yī)學(xué)工程研究所，批號：20030307；（4）羥脯氨酸（HYP）含量測定試劑盒，南京建成生物醫(yī)學(xué)工程研究所，批號：20030321。   1.3   實驗方法        

8、;     2   結(jié) 果   2.1   動物一般情況   實驗過程中，正常對照組動物一般情況良好；模型組動物毛色暗淡，活動減少；食量下降，尿色發(fā)黃，部分動物出現(xiàn)慢性腹瀉癥狀；各治療組動物一般情況在給藥后逐漸改善。實驗結(jié)束時可見正常對照組大鼠肝臟大小正常，色澤暗紅，質(zhì)地光滑柔軟，細膩；模型組大鼠肝臟大多明顯腫大，顏色灰白，肝質(zhì)地變硬，邊緣變鈍，表面呈粗糙桔皮狀，可見明顯的、均勻分布的小結(jié)節(jié)，個別動物部分肝葉與腹腔其它臟器有黏連，且有腹水出現(xiàn)，腹水顏色尚清。余各治療組動物肝臟體積稍大，

9、顏色稍顯灰黃，包膜略緊張，質(zhì)地略粗糙，但無小結(jié)節(jié)形成，無1例出現(xiàn)腹水。   2.2   肝功能的檢測   見表1。各治療組間肝功能測定數(shù)值差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。   2.3   肝臟臟器指數(shù)及肝組織中HYP、MDA的檢測   見表2。小劑量治療組與模型組比較，肝臟指數(shù)雖有所減少，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）；各治療組間HYP和MDA含量差異亦無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。    3   討 論 

10、0; 血清ALT、AST和TBA主要與肝細胞損傷、壞死程度呈正相關(guān)。我們實驗結(jié)果顯示，造模第10周末模型組動物的肝臟臟器指數(shù)、血清ALT、AST和TBA明顯高于正常對照組（P0.01），苦參素各治療組動物的這些指標(biāo)均明顯低于模型組（P0.01）。說明苦參素能很好的保護肝細胞，減少肝細胞損傷。提示苦參素在抑制肝纖維化的發(fā)生方面可能具有一定效果。   血清中GGT升高則提示向慢性活動性肝炎轉(zhuǎn)化，測定GGT對慢性肝炎及肝硬化的診斷及預(yù)后監(jiān)測有參考價值。HYP主要存在于膠原中，HYP含量的測定是衡量機體膠原組織代謝的重要指標(biāo)，故肝組織HYP含量能客觀反映肝纖維化程度。結(jié)果顯示模型組

11、HYP和GGT的值均高于正常對照組（P0.01），苦參素各治療組的值均明顯低于模型組，這說明苦參素在減少膠原合成，減輕纖維化方面有較好作用。   近年研究發(fā)現(xiàn)自由基所致的細胞膜脂質(zhì)過氧化反應(yīng)不僅參與了肝組織損傷，且對肝纖維化膠原代謝有一定的影響。大量研究表明，在CCl4、乙醇等所引起的肝纖維化過程中，自由基引起的脂質(zhì)過氧化不僅參與了起始階段的肝損傷過程；而且脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA可直接刺激星狀細胞活化及膠原基因表達。我們的研究數(shù)據(jù)也顯示MDA參與了肝纖維化的過程，而苦參素各治療組肝內(nèi)的MDA較模型組均有明顯下降（P0.01），提示苦參素能減少脂質(zhì)過氧化的自動分解產(chǎn)物MDA的生

12、成。說明該藥物的抗氧化作用不但在肝纖維化形成的早期階段能減輕肝損傷，而且在纖維化的發(fā)展階段也能起到抑制肝星狀細胞活化和膠原表達的作用。   本實驗應(yīng)用苦參素治療大鼠肝纖維化，結(jié)果顯示；苦參素能通過減少MDA的生成，減輕肝損傷，能抑制大鼠肝內(nèi)HYP生成，產(chǎn)生抗肝纖維化作用。鑒于苦參素?zé)o明顯毒副作用，有望成為很有前途的抗肝纖維化藥物，其作用與機理還有待進一步深入研究?！緟⒖嘉墨I】  1 張一寧， ?？∑? 肝纖維化.見:李才主編.器官纖維化基礎(chǔ)與臨床M. 北京：人民衛(wèi)生出版社.2003:74-76.周建明. 苦參素治療慢性乙型病毒性肝炎78 例效果觀察J. 南通醫(yī)學(xué)院

13、學(xué)報，2004，24（2）：201-203.閆 波， 陳飛虎， 吳繁榮， 等.鬼針草總黃酮對肝纖維化大鼠治療作用及機制探討J. 中國藥理學(xué)通報，2008，24（12）:1640-1645.Zim MC， Silveira TR， Schwartsmann G， et al.Potentiation of carbon tetrachloride hepatotoxicity by pentosen polysulfate in ratsJ. Braz J Med Biol Res，2002，35（11）:1339-1346.唐海燕， 董江龍， 王建彬， 等. 肝組織堿性成纖維細胞生長因子與乙肝患者肝纖維化關(guān)系的研究J. 臨床肝膽病雜志，2008，24（6）:454-555.Liu J， Sendelbach LE， Parkinson A， et al. Endotoxin pretreatment protects against the hepatotoxicity of acetaminophen and carbon tetrachloride: role of cytochrome P450 suppressionJ. Toxicology，2000，147（3）:167-176.Poli G.Pathogenesis of liver fibrosis