凍干皮內(nèi)注射用卡介苗制造及檢定規(guī)程

1、凍干皮內(nèi)注射用卡介苗制造及檢定規(guī)程本品系卡介菌經(jīng)培育后凍干制成。用于預(yù)防結(jié)核病。1菌種1.1制造卡介苗的菌種，應(yīng)由中國藥品生物制品檢定所分 發(fā)或經(jīng)同意。嚴(yán)禁使用通過動(dòng)物的菌種制造卡介苗。1.2 如果采用次代種子批，單批收獲培養(yǎng)物的總代數(shù)不得 超過12代（包括在馬鈴薯培養(yǎng)基上培育的代數(shù)與在液體蘇通培 養(yǎng)基上的代數(shù)）。1.3 菌種檢定新收到的菌種或新制備種子批應(yīng)進(jìn)行下列檢定。1.3.1 培養(yǎng)特性卡介菌在蘇通培養(yǎng)基上發(fā)育良好。培育溫度在3739 C之間?？顾崛旧珣?yīng)為抗酸桿菌。 在蘇通馬鈴薯培養(yǎng)基上發(fā)育的卡介 菌應(yīng)是干皺成團(tuán)略呈淺黃色。 在牛膽汁馬鈴薯培養(yǎng)基上為淺灰色 粘膏狀菌苔。在雞蛋培養(yǎng)基上有突起

2、的皺型和擴(kuò)散型兩類菌落， 且?guī)\黃色。在蘇通培養(yǎng)基上卡介菌應(yīng)浮于表面，為多皺微帶黃 色的菌膜。毒力試驗(yàn)用結(jié)素試驗(yàn)(PPD 100IU)陰性，體重300400g的同性健 康豚鼠4只，各腹腔注射1ml菌液(5mg/ml),每周稱體重，4 5周后解剖檢查，大網(wǎng)膜上可出現(xiàn)膿皰，腸系膜淋巴結(jié)及脾可能 腫大，肝及其他臟器應(yīng)無肉眼可見的病變。1.3.3 毒力試驗(yàn)用結(jié)素試驗(yàn)(PPD 100IU)陰性，體重300400g的同性健 康豚鼠6只，于肌內(nèi)側(cè)皮下各注射 1ml菌液(10mg/ml)，注射 前稱體重，注射后每周觀察 1次注射部位及局部淋巴結(jié)的變化。每2周稱體重1次。6周時(shí)解剖3只，滿3個(gè)月將另3只豚鼠解

3、劑，檢查各臟器應(yīng)無肉眼可見的結(jié)核病變。若有可疑病灶時(shí)，應(yīng) 作涂片和組織切片檢查，并采取部分病灶磨碎，加少量生理鹽水 混勻，皮下注射2只豚鼠。若證明系結(jié)核病變，該菌種即應(yīng)廢棄。 試驗(yàn)經(jīng)過詳細(xì)記錄備查。若未滿3個(gè)月試驗(yàn)豚鼠因其他病患死亡 應(yīng)解剖檢查，依上法處理。若死亡 2只以上應(yīng)重試。免疫力試驗(yàn)用原代種子批以1/100人份的劑量免疫豚鼠，以103104 強(qiáng)毒人型結(jié)核分枝桿菌感染，免疫組與對(duì)照組動(dòng)物的病變指數(shù)及 脾臟毒菌分離數(shù)的對(duì)數(shù)值經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，應(yīng)有顯著差異。如無條件，可送中國藥品生物制品檢定所進(jìn)行。1.4菌種保存凍干菌種保存于28 °C。2菌苗制造2.1 卡介苗制造室必須與其他生物制品

4、部門及實(shí)驗(yàn)室分 開。所需用具如高壓鍋、冰箱及玻璃器皿等，均須單獨(dú)設(shè)置并專 用。卡介苗制造、包裝及保存過程均須避光?？ń槊缰圃斓墓ぷ魅藛T及經(jīng)常進(jìn)入卡介苗制造室的人員，必須身體健康，經(jīng)X線檢查無結(jié)核病，且以后每年經(jīng) X線檢查1 2次，可疑者暫不在卡介苗制造室工作，其檢查記錄必須保存?zhèn)?查。2.2制造用培養(yǎng)基生產(chǎn)用培養(yǎng)基不得含有能使人產(chǎn)生毒性或變態(tài)反應(yīng)的物質(zhì)。 培養(yǎng)基所用的原料應(yīng)符合中國生物制品主要原材料試行標(biāo)準(zhǔn) 規(guī)定。2.3 菌種傳代與培養(yǎng)凍干菌種在蘇通馬鈴薯培養(yǎng)基、膽汁馬鈴薯培養(yǎng)基以及液體 蘇通培養(yǎng)基上每傳一次為一代。 馬鈴薯培養(yǎng)基上培育的菌種放冰 箱保存不超過2個(gè)月。用于生產(chǎn)菌苗的培養(yǎng)物的總代

5、數(shù)不超過 12代。2.4 原液制造241收集培養(yǎng)瓶應(yīng)逐瓶檢查，若有污染、濕膜、混濁等情況應(yīng)廢棄。收集菌膜壓干，移入盛有不銹鋼珠瓶內(nèi)，鋼珠與菌體的比例應(yīng)根 據(jù)研磨機(jī)轉(zhuǎn)速控制在一適宜的范圍，并盡可能在低溫下研磨。 加入適量無致敏原保護(hù)液稀釋成一定濃度的原液。2.4.2 稀釋用中國藥品生物制品檢定所發(fā)給的凍干卡介苗參考比濁標(biāo)準(zhǔn)，以分光光度法或其他適宜方法測定原液濃度，用保護(hù)液將原液稀釋成1.0mg/ml。243 純菌試驗(yàn)用于制造卡介苗的培養(yǎng)物、原液、以及稀釋后的菌苗均應(yīng)按生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程抽樣做純菌試驗(yàn)。2.5 菌苗分批用同一代菌種同時(shí)制造的菌苗為1批，稀釋為數(shù)瓶者，按瓶分亞批。2.6 分裝分裝過

6、程中勿使苗混合均勻。每 10人份卡介苗應(yīng)為0.5 士 O.lmg。3凍干菌苗原液分裝后應(yīng)立即進(jìn)行凍干。干燥完畢后立即進(jìn)行真空 封口。亦可充氮封口。4成品檢定4.1 物理化學(xué)檢查凍干卡介苗應(yīng)為白色疏松體或粉末狀。 加入稀釋液后，應(yīng)于 3分鐘內(nèi)完全溶解成均勻懸液。 殘余水分不應(yīng)超過3%包裝前應(yīng) 每支安瓿檢查真空，不合格的安瓿應(yīng)廢棄。4.2 鑒別試驗(yàn)每批菌苗須做涂片檢查，抗酸染色應(yīng)是抗酸桿菌。4.3 純菌試驗(yàn)每亞批菌苗抽樣按生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程進(jìn)行。4.4 活菌計(jì)數(shù)同一代菌種制造的各批凍干卡介苗應(yīng)抽1批做干前活菌計(jì)數(shù)。同一批菌種制造的各亞批菌苗均應(yīng)做干后活菌計(jì)數(shù)，抽安瓿5支稀釋混合。凍干菌苗活菌數(shù)應(yīng)在100萬/mg以上。可與熱穩(wěn)定性試驗(yàn)同時(shí)進(jìn)行。4.5 熱穩(wěn)定性試驗(yàn)取凍干后菌苗放置37 C 28天進(jìn)行加速失活試驗(yàn)，測定活菌 數(shù)，與4C保存的同一批菌苗同時(shí)進(jìn)行比較，計(jì)算降低的百分離。加溫放置制品的活菌數(shù)應(yīng)不少于冷藏菌苗的2%但不得低于20萬/mg。此試驗(yàn)可與參考菌苗同時(shí)進(jìn)行（參考菌苗加入試驗(yàn)的目 的為檢查培養(yǎng)基的質(zhì)量）。每一機(jī)柜凍干菌勒應(yīng)抽樣進(jìn)行此項(xiàng)試 驗(yàn)。4.6 安全試驗(yàn)同一代菌種生產(chǎn)的各批凍干卡介苗應(yīng)抽1個(gè)亞批做安全試驗(yàn)。用結(jié)素試驗(yàn)（PPd 10IU）陰性，體重300400g的同性健 康豚鼠6只。每只皮下注射相當(dāng)于 50人份的凍