復(fù)方樹莓酒對(duì)高脂飲食喂養(yǎng)的WISTER大鼠肝脂肪變性保護(hù)作用的初步研究

1、復(fù)方樹莓酒對(duì)高脂飲食喂養(yǎng)的WISTER大鼠肝脂肪變性保護(hù)作用的初步研究 張明，劉明，傅青松，夏玉軍（青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院，山東，青島，266017）【摘要】目的 觀察復(fù)方樹莓酒對(duì)高脂飲食喂養(yǎng)的Wister大鼠肝脂肪變性的保護(hù)作用。方法 取Wister大鼠30只，其中正常對(duì)照組10只，給與正常飼料喂養(yǎng)；高脂飲食組10只，給與高脂飼料喂養(yǎng)；高脂飲食并復(fù)方樹莓酒灌胃組10只，在給與高脂飼料喂養(yǎng)的同時(shí)，每天復(fù)方樹莓酒1ml灌胃。連續(xù)喂養(yǎng)5周后，將動(dòng)物用烏拉坦腹腔注射麻醉，腹主動(dòng)脈采血，測其血漿總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)等含量；取部分肝組織制作病理切片，HE染色觀察肝脂肪變性情況。結(jié)果 與正常對(duì)照組比

2、較，高脂飲食組、高脂飲食并復(fù)方樹莓酒灌胃組大鼠體重、血糖、血漿中的TC、TG等普遍增高，高脂飲食組升高最為明顯；光鏡下觀察，正常對(duì)照組肝細(xì)胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)、排列正常，高脂飲食組、高脂飲食并復(fù)方樹莓酒灌胃組組則可見多處脂質(zhì)沉積，但以單純高脂飲食組為重，與生化檢測結(jié)果一致。結(jié)論 高脂飲食飼料可導(dǎo)致大鼠脂肪肝；復(fù)方樹莓酒對(duì)高脂飲食喂養(yǎng)的Wister大鼠肝脂肪變性具有保護(hù)作用?！娟P(guān)鍵詞】高脂飲食；大鼠；肝；脂肪變性；復(fù)方樹莓酒；保護(hù)作用。隨著大眾生活水平的提高和生活習(xí)慣的改變，人們?cè)絹碓教幱诟咧靖邿崃渴澄锏陌鼑小８闻K是脂肪代謝的主要場所，長期高脂膳食會(huì)導(dǎo)致肝細(xì)胞發(fā)生脂肪變性，非酒精因素引起的脂肪肝的

3、發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，且發(fā)病年齡明顯趨于年輕化，這已成為全球性的公共健康問題。樹莓為薔薇科懸鉤子屬植物，樹莓漿果富含多種維生素、SOD、花青色、鞣化酸等極其珍貴的營養(yǎng)成份和藥物成份。本實(shí)驗(yàn)試圖通過高脂飲食建立肝脂肪變性的動(dòng)物模型，驗(yàn)證以樹莓漿果為主料的復(fù)方樹莓酒對(duì)高脂飲食環(huán)境下肝脂肪變性的保護(hù)作用。一、 材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 Wister大鼠30只，購自青島市藥檢所（圖1）。圖1. Wister大鼠1.2 飼料配制 普通喂養(yǎng)飼料購自青島市藥檢所；高脂飼料配制：10%豬油+10%蛋黃粉+4%膽固醇+1%膽酸+75%普通飼料1（圖2）；復(fù)方樹莓酒：由煙臺(tái)沁園春生物技術(shù)發(fā)展股份有限公司提供。圖2

4、.自行配制的高脂飼料1.3 動(dòng)物分組 正常對(duì)照組10只，給與普通飼料喂養(yǎng)；高脂飲食組10只，給與高脂飼料喂養(yǎng)（圖3）；高脂飲食并復(fù)方樹莓酒灌胃組10只，在給與高脂飼料喂養(yǎng)的同時(shí)，每天固定時(shí)間復(fù)方樹莓酒1ml灌胃（圖4）。 圖3. 大鼠喂養(yǎng) 圖4.復(fù)方樹莓酒1ml灌胃1.4 動(dòng)物處置 連續(xù)喂養(yǎng)5周后，將動(dòng)物用烏拉坦腹腔注射麻醉，腹主動(dòng)脈采血，測其血漿總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)等含量；取部分肝組織制作病理切片，HE染色觀察肝脂肪變性情況。二、結(jié)果2.1 大鼠體重比較大鼠喂養(yǎng)過程中不同時(shí)間點(diǎn)稱重(圖5)，結(jié)果見表1.正常高脂樹莓圖5.不同組大鼠 表1. 不同時(shí)間點(diǎn)大鼠體重（mg, X

5、7;SD）初始 一周末 二周末 三周末 四周末 正常組 221.45±1.87 233.49±2.68 241.53±2.84 250.53±3.17 280.75±2.76高脂組 220.36±1.56 271.63±4.82 302.96±4.43 351.45±3.57 375.53±3.64樹莓組 222.12±1.48 241.43±3.25 280.45±3.37 305.45±3.79 320.67±2.83以高脂飼料組體重增加最為

6、明顯，樹莓酒組次之，三組間差異有顯著性（P<0.01）2.2 血生化指標(biāo)連續(xù)喂養(yǎng)5周后，將動(dòng)物用烏拉坦腹腔注射麻醉，腹主動(dòng)脈采血，生化檢測，結(jié)果見表2，3.表2.大鼠血糖變化(mmol/L, X±SD）正常組 高脂組 樹莓組6.39±3.24 10.10±3.85 8.61±3.51以高脂飼料組為最高，樹莓酒組次之，三組間差異有顯著性（P<0.01） 表3.大鼠血甘油三脂（TG）等指標(biāo)變化(mmol/L, X±SD）甘油三脂(TG) 低密度膽固醇(LDL) 高密度膽固醇(HDL) 正常組 0.35±0.14 0.635&#

7、177;0.21 0.855±0.26 高脂組 0.43±0.17 0.687±0.22 0.697±0.31 樹莓組 0.33±0.15 0.647±0.27 0.787±0.28 TG以高脂飼料組為最高，樹莓酒組最低，三組間差異有顯著性（P<0.05）； LDL以高脂飼料組為最高，樹莓酒組次之，三組間差異有顯著性（P<0.05）；HDL以正常組最高，樹莓酒組次之，三組間差異有顯著性（P<0.05）.2.3 組織學(xué)檢查取部分肝組織，常規(guī)石蠟包埋，制作病理切片，普通HE染色，光鏡下觀察肝脂肪變性情況，正常對(duì)

8、照組肝細(xì)胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)、排列正常；高脂飲食組、高脂飲食并復(fù)方樹莓酒灌胃組則可見多處脂質(zhì)沉積，但以單純高脂飲食組為重（見圖6，7，8）。圖6. 對(duì)照組HE染色，200倍顯微鏡下圖像，空白為脂肪圖7. 高脂飲食組HE染色，200倍顯微鏡下圖像，空白為脂肪圖8. 樹莓組HE染色，200倍顯微鏡下圖像，空白為脂肪三、討論3.1 高脂飲食與肝脂肪變性一般而言，在病理學(xué)的意義當(dāng)中，當(dāng)肝細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)超過肝濕重的5%，或組織學(xué)上每單位面積有1/3 以上的肝細(xì)胞脂肪變性時(shí)，稱為脂肪肝。通常情況下，脂肪肝分為酒精性脂肪肝和非酒精性脂肪肝。前者有酗酒引起，本文不再加以討論；后者最早由Ludwig在1980年命名，指與

9、過量飲酒無關(guān)的臨床綜合征，主要病理改變是肝細(xì)胞彌漫性脂肪變性和脂肪堆積，隨病情的發(fā)展可表現(xiàn)為單純性脂肪肝、脂肪性肝炎、肝纖維化和脂肪性肝硬化等。毋庸置疑的是，較長時(shí)期的高脂飲食幾乎可以肯定引發(fā)肝脂肪變性。要鵬等1證實(shí)，適當(dāng)?shù)母咧吣懝檀寂浔蕊嬍晨稍谒闹軆?nèi)快速造成實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的肝脂肪變性。本實(shí)驗(yàn)中單純高脂飲食組大鼠在第五周時(shí)，組織學(xué)既顯示肝臟明顯的脂肪變性征象。脂肪肝的成因非常復(fù)雜，牽涉到多個(gè)代謝途徑。與高脂飲食引起胰島素抵抗、介導(dǎo)脂肪酸進(jìn)入肝臟細(xì)胞的結(jié)合蛋白和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白異常、脂肪酸代謝關(guān)鍵調(diào)控因子及其控制的關(guān)鍵酶功能發(fā)生異常、脂質(zhì)過氧化等多信號(hào)多因素，均可造成脂肪酸代謝紊亂，脂質(zhì)在肝臟異常累積。 3

10、.2復(fù)方樹莓酒對(duì)高脂飲食喂養(yǎng)的Wister大鼠肝脂肪變性的保護(hù)作用樹莓又名紅莓、托盤，學(xué)名“覆盆子”。果實(shí)為空心聚合果，多為紅色，也有黑色、紫色、黃色果實(shí)。在北溫帶、亞熱帶分布廣泛。薔薇科懸鉤子屬亞灌木，上個(gè)世紀(jì)盛產(chǎn)于北美、歐洲。進(jìn)入21世紀(jì)，智利、中國成為新興產(chǎn)業(yè)國。樹莓是天然鞣花酸含量最豐富的抗癌性食物；是天然超級(jí)抗氧化劑花青素、SOD含量最高的抗氧化食物之一。國際營養(yǎng)大師，美國營養(yǎng)與減肥專家、全球銷量第一的權(quán)威營養(yǎng)專著地球上最健康的150種食材的作者喬尼.鮑登教授認(rèn)為：樹莓（覆盆子）是世界上最好的花青素和鞣花酸來源之一。除了有顯著的抗氧化功能，還可導(dǎo)致癌細(xì)胞自體消亡，卻不影響正常細(xì)胞。覆

11、盆子花青素具有抑制壞氧化酶cox的能力，可治療關(guān)節(jié)炎，并且沒有副作用。哈爾濱醫(yī)科大學(xué)劉明教授的研究證實(shí)：覆盆子鞣花酸可有效治療原發(fā)性肝癌。日本名古屋市立大學(xué)崗島研二教授發(fā)現(xiàn)覆盆子所含羥基苯基丁酮可促進(jìn)毛發(fā)生長。日本熊本縣立大學(xué)鈴松教授的研究證實(shí)，覆盆子酮能促進(jìn)人體基礎(chǔ)代謝，降低皮下脂肪含量，有助于防止肥胖和降低高血脂。美國威斯康辛大學(xué)、加州大學(xué)戴明思分校的研究報(bào)告指出，覆盆子的鞣花單寧酸、生育三烯酮可避免低密度脂蛋白固醇氧化，有利于防治高血脂和心臟病，降低動(dòng)脈硬化的傷害。美國哈佛大學(xué)的研究報(bào)告指出覆盆子鞣花單寧酸，具有類疫苗的功能，可抑止幽門桿菌、葡萄球菌、沙門氏菌和大腸桿菌，防治腸胃疾病。芬

12、蘭科學(xué)院的研究證實(shí)：經(jīng)常食用覆盆子是防治婦女泌尿道感染的最好方法。還有強(qiáng)健子宮壁，松弛子宮與治療小腸痙攣及減少經(jīng)血的功能，也能治療壞疽及促進(jìn)指甲、頭骨、末梢及皮膚的健康。韓國中央醫(yī)科大學(xué)的研究表明：覆盆子所含是美容膚的最佳成分，對(duì)氧化類脂的形成，消除一氧化二氮以及防治紫外線誘發(fā)的皮膚紅斑、抑制、排斥黑色素形成的作用，比常用的熊果苷更強(qiáng)更快。2011年墨西哥健康科學(xué)研究所宣布，該所的實(shí)驗(yàn)證明，食用覆盆子果粉可大大減少尼古丁危害。對(duì)二手煙受害者，是最有效的食品性防護(hù)。樹莓酮是樹莓中的主要芳香類化合物，結(jié)構(gòu)與具有減肥和改變脂質(zhì)代謝功能的辣椒素和辛弗林相似。Morimoto C等學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，樹莓酮可預(yù)防高脂飲食誘導(dǎo)的小鼠體重以及肝臟和內(nèi)臟脂肪組織（附睪，腹膜后，腸系膜）重量的增加，也可減少肝臟甘油三酯含量，其作 用機(jī)制可能在于樹莓酮提高去甲腎上腺素誘導(dǎo)的脂肪細(xì)胞分解。孟憲軍等研究也發(fā)現(xiàn)，樹莓酮對(duì)高脂飲食喂養(yǎng)的單純性肥胖大鼠具有減肥作用，即樹莓酮通過調(diào)解糖脂代謝紊亂、改善瘦素抵抗和胰島素抵抗等綜合作用來降低肥胖大鼠體重。日本學(xué)者發(fā)現(xiàn)，24名健康女性每天服用200mg樹莓酮，連續(xù)服用6 周，然后檢測其體內(nèi)的脂肪含量。結(jié)果表明，每個(gè)實(shí)驗(yàn)對(duì)象的基礎(chǔ)代謝量平均提高了8.9%，體重人均減少了1.