抵當(dāng)湯化裁方對(duì)荷瘤小鼠抑瘤作用及對(duì)T淋巴細(xì)胞亞群的影響

1、抵當(dāng)湯化裁方對(duì)荷瘤小鼠抑瘤作用及對(duì)T淋巴細(xì)胞亞群的影響         【摘要】  目的：探討抵當(dāng)湯化裁方對(duì)S180荷瘤小鼠的抗腫瘤作用及對(duì)T淋巴細(xì)胞亞群的影響。材料與方法：建立小鼠克洛氏(S180)肉瘤動(dòng)物模型,將荷瘤小鼠分為抵當(dāng)湯化裁方高、中、低劑量組，連續(xù)灌胃10d，同時(shí)設(shè)陰性對(duì)照組和正常組,觀察抑瘤率。結(jié)果：抵當(dāng)湯高、中、低劑量組對(duì)荷瘤小鼠瘤重的抑瘤率分別為56.25%、36.51%和18.42%，與陰性對(duì)照組比較有顯著差異，尤以高劑量組為明顯;CD+4T淋巴細(xì)胞數(shù)量、CD+8T淋巴細(xì)胞數(shù)量及CD

2、+4/CD+8比值與陰性對(duì)照組比較均明顯升高，尤以高劑量組最為明顯。結(jié)論：抵當(dāng)湯化裁方能抑制S180荷瘤小鼠腫瘤的生長，并能緩解和改善S180荷瘤小鼠免疫力低下和免疫紊亂狀態(tài)，抵當(dāng)湯化裁方高劑量組療效最佳。 【關(guān)鍵詞】  抵當(dāng)湯 荷瘤小鼠 抑瘤 T淋巴細(xì)胞亞群   近年來中藥的防癌作用備受關(guān)注，利用中藥提高機(jī)體免疫功能，抑制腫瘤生長，達(dá)到治療腫瘤的目的，是目前中醫(yī)藥研究的熱點(diǎn)話題。抵當(dāng)湯化裁方是在金匱要略原方的基礎(chǔ)上減大黃加黨參、白術(shù)、白芍經(jīng)處理制成的純中藥制劑，具有活血化瘀、緩中補(bǔ)虛、攻補(bǔ)兼施之功效。本實(shí)驗(yàn)以荷瘤小鼠為對(duì)象，觀察不同濃度的藥物對(duì)S180肉瘤的作用

3、，從抑瘤和免疫功能方面進(jìn)行隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。   1  實(shí)驗(yàn)材料   1.1  動(dòng)物  昆明種小鼠40只，4-6周齡，體重18-22g，雌雄各半，由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。   1.2  藥品與制劑  抵當(dāng)湯化裁方組成:水蛭9 g，虻蟲9 g，桃仁12 g，黨參15 g，白術(shù)15 g，白芍15 g。以上藥物由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院中藥房一次性購齊，經(jīng)生藥鑒定為真品，上方水煎煮3次，合并濾液濃縮制成高、中、低劑量組，生藥含量分別為1.97 g/mL，0.9 g/mL

4、，0.45 g/mL，滅菌，冰箱冷藏備用。小鼠淋巴細(xì)胞分離液由中國科學(xué)院生物工程研究所提供，批號(hào)為LTS1092。小鼠T淋巴細(xì)胞單克隆抗體CD4、CD8由北京天象-邦定公司提供。   1.3  瘤株  腹水型克洛氏肉瘤(S180)瘤株由沈陽藥科大學(xué)提供。   2  實(shí)驗(yàn)方法   2.1  對(duì)小鼠S180肉瘤的抑瘤作用  取腹腔接種S180瘤株8d的荷瘤小鼠，無菌操作下抽取腹腔瘤液，以滅菌生理鹽水1:1稀釋，經(jīng)0.2%胎盼藍(lán)染色細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)后,計(jì)算活細(xì)胞數(shù)95%，調(diào)整瘤細(xì)胞懸液數(shù)約為1

5、×106/mL，再按0.2 mL/鼠的劑量在32只小鼠右前肢腋窩皮下接種。接種后24 h稱重,隨機(jī)分為陰性對(duì)照組及給藥組(分為高、中、低劑量組)，并開始給藥，1次/d，給藥容積均為0.2 mL/10 g·d2，連續(xù)10 d，末次給藥后24 h，眼眶取血，頸椎脫臼處死動(dòng)物，稱體重，剝瘤稱重計(jì)算抑瘤率，并將各組結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。療效評(píng)價(jià)公式   抑瘤率(%)=(對(duì)照組平均瘤重-治療組平均瘤重)/對(duì)照組平均瘤重×100%   2.2  對(duì)外周血T淋巴細(xì)胞亞群的影響  實(shí)驗(yàn)小鼠處死以前,進(jìn)行眼眶取血,用事先標(biāo)記

6、好加有抗凝劑的試管收集標(biāo)本,然后采用間接熒光染色法檢測各實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物T淋巴細(xì)胞亞群,計(jì)算出CD+4T淋巴細(xì)胞數(shù)量、CD+8T淋巴細(xì)胞數(shù)量及CD+4/CD+8比值。            3  實(shí)驗(yàn)結(jié)果   3.1  對(duì)小鼠S180肉瘤的抑瘤作用  見表1表1  抵當(dāng)湯化裁方對(duì)荷瘤小鼠的抑瘤作用注：與陰性對(duì)照組比較，#P0.05，#P0.01。   3.2  對(duì)T淋巴細(xì)胞亞群的影響  見表2表2

7、60; 抵當(dāng)湯化裁方對(duì)荷瘤小鼠T淋巴細(xì)胞亞群的影響注：與正常組比較，P0.01；與陰性對(duì)照組比較，#P0.05；與陰性對(duì)照比較，#P0.01。   4  討論   腫瘤的發(fā)生受多種因素的調(diào)節(jié)，同時(shí)與機(jī)體的免疫狀況密切相關(guān)，腫瘤病人的機(jī)體免疫不同程度的發(fā)生紊亂3-4，腫瘤免疫與研究表明，保護(hù)免疫器官、提高免疫功能是抗腫瘤、抑制腫瘤生長、防止擴(kuò)散的重要措施5。S180是一種具有免疫原性的腫瘤，其在生長過程中能明顯抑制機(jī)體的免疫功能，而T淋巴細(xì)胞是構(gòu)成機(jī)體抗腫瘤免疫功能的重要因素，有明顯異質(zhì)性。   本實(shí)驗(yàn)通過給S180荷瘤小鼠灌

8、服抵當(dāng)湯化裁方發(fā)現(xiàn)，抵當(dāng)湯化裁方可以明顯抑制腫瘤生長，且隨劑量的增加而呈依賴性。能夠增加荷瘤小鼠外周血CD+4T淋巴細(xì)胞、CD+8T淋巴細(xì)胞數(shù)量，調(diào)節(jié)CD+4/CD+8比例，提高荷瘤小鼠T淋巴細(xì)胞的增殖能力。抵當(dāng)湯原方中水蛭、虻蟲、桃仁攻下祛瘀，軟堅(jiān)散結(jié)，即“堅(jiān)者消之”，“結(jié)者散之”之義6。而所加的黨參、白術(shù)、白芍能扶正祛邪，健脾益氣，即“衰者補(bǔ)之”之義。抵當(dāng)湯化裁方通過提高荷瘤小鼠T淋巴細(xì)胞的增殖能力，從而調(diào)節(jié)了S180荷瘤小鼠的免疫功能，抑制了荷瘤小鼠腫瘤的生長。   此外本方中水蛭、虻蟲、桃仁等活血消腫祛瘀通絡(luò)去，改善局部細(xì)胞缺氧的情況從而抑制腫瘤新生血管的形成，而且

9、水蛭、虻蟲等蟲類藥釋放大量的纖維蛋白酶原，能夠抑制血管內(nèi)皮生長作用，從而抑制腫瘤血管生成?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1杜維霞.復(fù)方洋參多糖免疫增強(qiáng)劑對(duì)荷瘤和輻射小鼠T淋巴細(xì)胞亞群的影響J.中國實(shí)驗(yàn)臨床免疫學(xué)雜志，2005，9(4)：58-61.2苗明三.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)M.北京：中國中醫(yī)藥出版社，1997，1：127.3賈宗良，白建華，王清麗，等.甲狀腺癌患者血清中SIL2R測定的臨床意義J.西安醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2000，21(2)：164-165.4Tinlakos D，Spandidos DA，Yiagnisis M et a1.Expression 0f ras and C myc onco-protein and hepatitis B s