葡聚糖凝膠色譜法測定注射用頭孢曲松鈉他唑巴坦鈉中聚合物

1、對?中國藥典?注射用氨芐西林鈉舒巴坦鈉有關(guān)物質(zhì)氨芐西林二聚體定位方法的建議姚永青，劉英* (河南省食品藥品檢驗(yàn)所，鄭州450003)摘要 目的：對?中國藥典?注射用氨芐西林鈉舒巴坦鈉有關(guān)物質(zhì)氨芐西林二聚體定位方法進(jìn)行完善。方法：選擇3根不同色譜柱，分別采用藥典方法和氨芐西林系統(tǒng)適用性對照品標(biāo)準(zhǔn)圖譜方法定位氨芐西林二 聚體峰，考察兩者結(jié)果是否一致。結(jié)果：采用藥典方法與氨芐西林系統(tǒng)適用性對照品法定位結(jié)果不一致。結(jié)論：現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)欠妥，建議對二聚體的定位方法修改為：取氨芐西林系統(tǒng)適用性對照品適量，加初始流動相溶解并稀釋制成每1 ml中約含2 mg的溶液，取10 g l注入液相色譜儀，記錄的色譜圖應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)

2、圖譜一 致。關(guān)鍵詞：氨芐西林鈉舒巴坦鈉；氨芐西林二聚體中圖分類號：R921.2文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號：Suggestionabout the Locating Method of Ampicillin Dimer -Related Substance of Ampicillin Sodium and Sulbactam Sodium for Injection in Chinese PharmacopoeiaYao Yongqing， Liu Ying * ( Henan Institute for Food and Drug Control ，Zhengzhou 450003)Abstrac

3、t Objective: To improve the locating method of Ampicillin dimer - related substance of Ampicillin Sodium and Sulbactam Sodium for Injection in Chinese Pharmacopoeia. Methods: Three different chromatographic columns were examined by pharmacopoeia method and Ampicillin system suitability standard diag

4、ram method，their results were inspected for consistency ot . Results: The results of two methods were not consistent. Conclusion: The current standard is inappropriate, the dimer locating method should be amended as: take the right amount of Ampicillin system suitability CRS, plus the initial mobile

5、 phase dissolved and diluted to make per 1 ml containing about 2 mg of solution, take 10 g linjected to liquid chromatograph, the recorded chromatograms should be consistent with the standard diagram.Key words: Ampicillin Sodium and Sulbactam Sodium ； Ampicillin dimer注射用氨芐西林鈉舒巴坦鈉由氨芐西林鈉和3-內(nèi)酰胺酶抑制劑舒巴坦鈉

6、組成，收載于?中國藥典?2021年版其有關(guān)物質(zhì)應(yīng)來自兩原料藥， 主要有氨芐西林二聚體和舒巴坦青霉 胺等2。大量的研究已經(jīng)證明氨芐西林二聚體等3內(nèi)酰胺類抗生素中的高分子聚合物可引發(fā)嚴(yán)重的過敏反響3-5，其含量直接影響過敏反響發(fā)生率 ，故對高分子聚合物的準(zhǔn)確定位直 接關(guān)系到產(chǎn)品的平安性。筆者在試驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)用現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)定位氨芐西林二聚體存在問題，標(biāo)準(zhǔn)中有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)下規(guī)定：供試品溶液置60 C水浴1 h后，取10 g注入液相色譜儀，與氨芐西林峰相對保存時(shí)間 約1.7倍處的較大雜質(zhì)峰為氨芐西林二聚體峰；而某樣品在與氨芐西林峰相對保存時(shí)間約1.7倍處和2.9倍處均有雜質(zhì)峰，且2.9倍處的雜質(zhì)峰遠(yuǎn)大于1.7倍

7、處的雜質(zhì)峰，究竟哪個(gè)雜質(zhì)峰為 氨芐西林二聚體值得商酌。也有文獻(xiàn)報(bào)道某些抗生素通過相對保存時(shí)間對雜質(zhì)峰進(jìn)行定位由 于色譜柱的保存行為易受色譜條件的影響，可能導(dǎo)致相對保存時(shí)間定位雜質(zhì)峰有誤7-8。因此本試驗(yàn)嘗試用氨芐西林系統(tǒng)適用性對照品來定位氨芐西林二聚體峰，先用氨芐西林色譜 條件9確定二聚體峰的位置，然后用氨芐西林舒巴坦色譜條件分別進(jìn)樣氨芐西林系統(tǒng)適用性 對照品溶液和供試品高溫破壞溶液，考察該方法定位二聚體與現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)方法是否一致。1儀器與試藥Waters2695/2487高效液相色譜儀及 Empower色譜工作站(美國 waters公司)；Sartorius BP211D 電子天平；Orion

8、Star pH 計(jì)(Thermo 公司)。氨芐西林系統(tǒng)適用性對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號130618-202102)；注射用氨芐西林鈉舒巴坦鈉 (廠家A，規(guī)格1.5 g,批號20210904)；乙腈為色譜純，磷酸二氫鉀、 磷酸二氫鈉、醋酸、磷酸均為分析純，水為純潔水。2方法與結(jié)果2.1色譜條件I 9色譜柱為 Agela Venusil XBP CL) (4.6 mm >250 mm, 5 詢；流動相 A 為 12%醋酸溶 液-0.2 mol L-1磷酸二氫鉀溶液-乙腈-水(0.5 : 50 : 50 : 900),流動相B為12%醋酸溶液-0.2 mol L-1磷酸二氫鉀溶液-乙

9、腈-水(0.5 : 50 : 400 : 550),先以流動相 A-流動相B (85 : 15)等度洗脫，待氨芐西林峰洗脫完畢后立即按表 溫35 C；檢測波長254 nm ;進(jìn)樣量10卩。1表1色譜條件I梯度洗脫程序1進(jìn)行線性梯度洗脫；流量1.0 ml min-1;柱時(shí)間/min流動相A/%流動相B/%085153001004501005085156085152.2色譜條件n色譜柱為 Agela Ven usil XBP Cj8(L) (4.6 mm > 250 mm , 5 卩 m)；流動相 A 為 0.02 mol-L-1磷酸二氫鈉溶液(用 按表2進(jìn)行線性梯度洗脫，1 mol L 1

10、磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值至4.0 ±.1),流動相B為乙腈， 流量1.0 ml min-1;柱溫35 C；檢測波長230 nm；進(jìn)樣量10卩。表2色譜條件n梯度洗脫程序時(shí)間/min流動相A/%流動相B/%09371093740604050604051937609372.3溶液的制備2.3.1 溶劑氨芐西林系統(tǒng)適用性對照品溶液取氨芐西林系統(tǒng)適用性對照品適量，加初始流動相0.02 mol - L-1磷酸二氫鈉溶液(用1 mol-L-1磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值至4.0 ±.1)-乙腈(93 : 7)溶解并稀釋制成每 1 ml中約含2 mg的溶 液，即得。2.3.2 供試品高溫破壞溶液取供試品

11、適量，加初始流動相溶解并稀釋制成每1 ml中約含氨芐西林3 mg的溶液，置60 °C水浴中加熱1 h，取出，放冷，即得。2.4 試驗(yàn)結(jié)果色譜條件I取氨芐西林系統(tǒng)適用性對照品溶液，采用“ 2的色譜條件依法測定，記錄色譜圖，結(jié)果見圖 1A。色譜條件H -1分別取氨芐西林系統(tǒng)適用性對照品溶液和供試品高溫破壞溶液，采用“ 2.2的色譜條件依法測定，色譜柱為Agela Venusuil XBP C 18(L) (4.6 mm >250 mm , 5 m ,記錄色譜圖，結(jié)果見圖 1B1C。比照圖1A和圖1B結(jié)果，供試品高溫破壞溶液的色譜峰依次為氨芐西林(10.631 min )、峰5 (1

12、8.766 min )、氨芐西林開環(huán)二聚體(27.072 min )、氨芐西林閉環(huán)二聚體(29.598 min ) 和氨芐西林三聚體( 34.628 min )；依據(jù)藥典，峰 5 應(yīng)判為氨芐西林二聚體峰；而通過氨芐 西林系統(tǒng)適用性對照品定位結(jié)果可知峰 2和峰 3分別是閉環(huán)二聚體與開環(huán)二聚體， 與藥典規(guī) 定不一致。3 'SKDDOCTI5on64 5U7.4937/90403 HY271.70.00 10.0020.0030.00u140.0050.0060'001分鐘Iv1|1 1 |1 f1 | 1 1 1 1 |1 1|1|1 1 1 |1 I 1r)|ifir-jivi

13、Ifiv|0.005.0010.0015.0020.0025.0030.0035.0040.0045.0050.0055.0060.00分鐘=BCI1 1 11 I1 1 11 I1 1 1 1 91 1 1 I"1 1 1 1 B1 I1 1 BI1 11 1 I1 11 1 I1 1 1 1 I1 11 1 1 1 1"1 I0.005.0010.0015.0020.0025.0030.0035.0040.0045.0050.0055.0060.00分鐘A.氨芐西林系統(tǒng)適用性對照品(色譜條件I) ； B.氨芐西林系統(tǒng)適用性對照品(色譜條件H) ; C.供試品 高溫破壞(

14、色譜條件H) ； 1.氨芐西林；2.氨芐西林開環(huán)二聚體；3.氨芐西林閉環(huán)二聚體；4.氨芐西林 三聚體；5.峰5圖 1 HPLC 色譜圖(Agela Venusuil XBP C 18 色譜柱)2.4.3 色譜條件 n -2 更換色譜柱為 Thermo BDS HYPERSIL C 18 (4.6 mmX250 mm , 5 m), 其余操作同“ 項(xiàng)下，記錄色譜圖，結(jié)果見圖2。供試品高溫破壞溶液的色譜峰依次為氨芐西林(9.616 min )、氨芐西林閉環(huán)二聚體(28.695min )和氨芐西林三聚體(33.246 min)，與藥典規(guī)定方法判斷二聚體的結(jié)果不一致。I"0.00i|i10.

15、00r p 1 '20.001F|1HH1|H4130.0040.00r 1'50.00" i60.00分鐘0.00 10.00620 9ri t | r i i20.0030.0040.0050.0060.00分鐘64MZ 03A.氨芐西林系統(tǒng)適用性對照品； B.供試品高溫破壞；1.氨芐西林；2.氨芐西林開環(huán)二聚體；3.氨芐西林閉環(huán)二聚體；4.氨芐西林三聚體圖 2 HPLC 色譜圖(Thermo BDS HYPERSIL C 18色譜柱)2.4.4 色譜條件n -3 更換色譜柱為 Agile nt HC-C 18(2) ( 4.6 mmK 250 mm , 5 m)

16、,其余操 作同“ 項(xiàng)下，記錄色譜圖，結(jié)果見圖3。供試品高溫破壞溶液的色譜峰依次為氨芐西林(12.219 min )、雜質(zhì)1 (21.416 min )、氨芐西林開環(huán)二聚體(30.286 min)、氨芐西林閉環(huán)二聚體(32.678 min)和氨芐西林三聚體(37.886 min ),與藥典規(guī)定方法判斷二聚體的結(jié)果不一致。0.007008000O1 nsHz/ .210.00 20.00IIIIIIIII1II30.0040.0050.0060.00分鐘I 1' F I0.00 10.0020.0030.0040.0050.0060.00分鐘A.氨芐西林系統(tǒng)適用性對照品；B.供試品高溫破壞

17、；1.氨芐西林；2.氨芐西林開環(huán)二聚體；3.氨芐西林閉環(huán)二聚體；4.氨芐西林三聚體；5.峰5圖3 HPLC 色譜圖(Agilent HC-C 18色譜柱)3討論與小結(jié)3.1藥典中對藥品特定雜質(zhì)的控制，目前常采用相對保存時(shí)間進(jìn)行峰定位8。藥典中的色譜方法通常不給出色譜柱的具體品牌而僅對其通用信息進(jìn)行描述，由于不同品牌型號色譜柱選擇性的差異，應(yīng)用中溶質(zhì)的保存值、色譜峰的別離度甚至色譜峰順序都可能出現(xiàn)較大差異10-11。氨芐西林丙磺舒顆粒1121、氨芐西林鈉、除注射用氨芐西林鈉舒巴坦鈉外， 其他記錄的色譜圖與標(biāo)準(zhǔn)圖譜相比擬， 以此3根不同廠家不同型號的色譜柱，取氨芐3.2藥典收載的與氨芐西林相關(guān)的品

18、種有氨芐西林、 注射用氨芐西林鈉冋及注射用氨芐西林鈉舒巴坦鈉。 各品種均為取氨芐西林系統(tǒng)適用性對照品溶液進(jìn)樣， 定位二聚體等雜質(zhì)。分別按藥典方法和氨芐西林系統(tǒng)適 致。因此建議對本品二聚體峰的定位3.3參考上述品種項(xiàng)下定位二聚體方法，本文選用 西林系統(tǒng)適用性對照品溶液和供試品高溫破壞溶液進(jìn)樣， 用性對照品標(biāo)準(zhǔn)圖譜方法定位二聚體峰，兩者結(jié)果不方法進(jìn)行修改，建議修訂為：取氨芐西林系統(tǒng)適用性對照品適量，加初始流動相溶解并稀釋 制成每1 ml中約含2 mg的溶液，取10 注入液相色譜儀，記錄的色譜圖應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)圖譜 致。參考文獻(xiàn)1 中國藥典S. 2021 年版.二部.1426-14272 姚蕾，施亞琴，胡昌

19、勤.注射用氨芐西林鈉舒巴坦鈉中有關(guān)物質(zhì)HPLC檢測方法的改良J.中國抗生素雜志，2021, 34 (12): 734-7383 胡昌勤.抗菌藥中高分子雜質(zhì)的特性及抗菌藥過敏反響(上)J.中國藥師，2006, 9 ( 3): 238-2404 胡昌勤.抗菌藥中高分子雜質(zhì)的特性及抗菌藥過敏反響(下)J.中國藥師，2006，9 ( 4): 321-3235 金少鴻，胡昌勤.3內(nèi)酰胺類抗生素過敏反響研究進(jìn)展J.中國新藥雜志，1994, 3 (4): 38-41 霍秀敏.3內(nèi)酰胺類抗生素高分子雜質(zhì)的研究J.藥品評價(jià)，2005，2( 5)： 324-3267 張靜霞，徐明琴，張春然 ，等.抗生素雜質(zhì)的檢測方法研究進(jìn)展J.中國新藥雜