綠豆芽淀粉酶的活性及應(yīng)用

1、綠豆芽淀粉酶的活性及應(yīng)用綠豆芽淀粉酶的活性及應(yīng)用生物工程生物工程1302-171302-17號號盧丹盧丹摘要摘要目的：測定綠豆芽生長不同時期酶的活性。方法：采用正交試驗設(shè)計方法, 對影響綠豆芽淀粉酶活性測試的“最適條件”進(jìn)行研究。結(jié)果：綠豆芽在生發(fā) 84h 左右, 溫度 60, p H5. 0, 底物體積質(zhì)量 20g /L , 酶體積質(zhì)量0. 5g /L , 底物與酶作用時間 60m i n 時, 淀粉酶活性最高。結(jié)論：通過對綠豆芽生長的不同時期酶活性的研究, 為進(jìn)一步實現(xiàn)綠豆芽淀粉酶應(yīng)用提供理論依據(jù)。關(guān)鍵詞：綠豆芽; 淀粉酶; 酶活性1 1、材料與方法材料與方法1. 1 實驗材料綠豆、 甜玉

2、米為市購。1. 2 主要試劑C u S O 4 5H 2 O 、 酒石酸鉀鈉 、 氫氧化鈉、亞鐵氰化鉀、可溶性淀粉均為分析純試劑; 次甲基藍(lán)、麥芽糖為生化試劑。1. 3 實驗方法1. 3. 1 綠豆芽的制備方法選擇發(fā)芽率高、發(fā)芽好的綠豆, 最好選擇新綠豆. 洗凈,挑去混在豆子里的雜質(zhì)、蟲蛀豆、 半粒豆等,以免影響豆芽質(zhì)量 . 將選好的綠豆加清水浸泡4 h 后,放入器皿中. 并上下翻動,使之均勻. 種殼破裂后 ,將余水淋盡, 后裝器皿發(fā)芽 ,保持室溫 25 30 . 當(dāng)芽長 1 c m時, 溫度要保持在 28 40 之間,相對濕度 90% 為宜. 3 4 h 淋 1次水, 水溫要低于氣溫. 氣溫

3、較低時 ,要淋溫水, 每隔 5 6 h 淋水1次。2 2、結(jié)果與討論、結(jié)果與討論 2. 1 結(jié)果 2. 1. 1綠豆芽萌發(fā)不同時期酶活性的情況 在試驗中采用對比的方法 ,對萌發(fā)不同時期的豆芽進(jìn)行測定, 比較不同時期酶提取液在 40 時水解 1%淀粉溶液 1 h 后產(chǎn)生的還原糖量 , 從而計算出淀粉酶的活性 . 通過對比實驗, 得出綠豆芽在生發(fā) 84 h 時淀粉酶活性最強(qiáng) ,其活力值為 43U/g .見表 1 2. 1. 2 不同因素對綠豆芽酶活性的影響 正交試驗設(shè)計可通過較少的試驗次數(shù) ,較快地找到達(dá)到最佳試驗結(jié)果的試驗組合, 采用 L8 ( 27）正交表 ,安排酶濃度 ( E ) 、底物濃度

4、 ( S ) 、p H 、溫度( T ) 和酶反應(yīng)時間 ( t ) 5個實驗因素,每個因素 2個水平 ,共進(jìn)行 8次試驗組合 . 為確定影響酶活性的最適條件, 第 1次試驗取 T= 30, 60 ; p H= 3. 0,7. 0; t = 60, 90m i n ; S = 30, 5 g /L , E= 0. 5, 5 g /L ,完成各組酶活性測試. 結(jié)果見表 2. 由表 2可知 ,第 6組酶活性最高 ,即 T = 60 ,p H= 3. 0, S =30 g /L , E= 0. 5 g /L , t = 60 m i n , 并發(fā)現(xiàn)各組之間酶活性差異很大.為縮小指標(biāo)水平間差異 ,在第

5、6組試驗條件附近安排第二次試驗 ,仍采用 L8 ( 27) 正交表進(jìn)行篩選,確定試驗條件: T=50, 60 ; p H=4. 0, 5. 0;t = 60, 70 m i n ; S= 10, 20 g /L , E=2. 5, 0. 5 g /L , 完成各組酶活性測試. 結(jié)果見表 3. 由表 3可知,第 3, 6組酶活性較高,其余組較低. 在第 3, 6組試驗條件附近再安排第三次正交試驗設(shè)計, 注意縮小實驗因素水平間差距 ,將 E 固定為 1 g /L ,采用 L 9 ( 34) 正交表, 即取 T= 50, 55, 60; p H=4. 0, 5. 0, 6. 0; t =60, 70

6、, 80 m i n ; S= 10,15, 20g /L , E= 2. 5, 0. 5g /L ,測得酶活性 ,并進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,完成各組酶活性測試 . 結(jié)果見表 4 由表 4可知, 酶活性最高的試驗組合是第 7 組,即 T=60 ; p H=5. 0; t =60 m i n ; S=20 g /L ,E= 0. 5 g /L .2. 22. 2 討討 論論2. 2. 1 發(fā)芽時間對綠豆芽中淀粉酶活性的影響本試驗從綠豆開始萌發(fā)出芽時測定還原糖含量的變化,從而推算淀粉酶活性的變化，在綠豆芽生長周期中，淀粉酶的活性先是由低變高 ,再由高變低. 經(jīng)過實驗得到: 綠豆芽在生發(fā)84h時淀粉酶活性最高

7、.2. 2. 2 達(dá)到最高酶活性的最適條件利用正交試驗設(shè)計,可以通過較少的試驗次數(shù)較快地找到綠豆芽淀粉酶活性測試的最適條件 ,由表 6可知 , 當(dāng) T=60 , p H=5. 0, S=10 g /L ,E= 0. 5 g /L , t = 60m i n 時酶活性最高, 可以認(rèn)為這是測試綠豆芽淀粉酶活性的最適條件 ,在綠豆芽淀粉酶活性測試中 , 應(yīng)圍繞此條件安排試驗 , 以期得到較好的試驗效果3 3 結(jié)結(jié) 論論1) 淀粉酶活性 . 通過在綠豆芽萌發(fā)周期的不同階段對豆芽中淀粉酶活性的測定, 得出豆芽在生發(fā) 84 h 時 ,淀粉酶活性最強(qiáng) , 活力值為 43 U/g . 由對比試驗得出, 綠豆芽在生發(fā) 84 h 時淀粉酶活性最強(qiáng).2) 淀粉酶活性的最適條件 . 由正交試驗得出,淀粉酶在溫度為 60, p H為 5. 0,底物濃度為 20 g /L ,酶濃度為 0. 5g /L ,酶與底物作用時間為 60 m i n 時 ,酶活性最大.3) 綠豆芽汁淀粉酶在處理玉米原料中的應(yīng)用 . 利用