色譜定性、定量分析

1、2022-3-6第第八八章章色譜分析基礎(chǔ)色譜分析基礎(chǔ)一、色譜定性分析一、色譜定性分析qualitative analysis in chromatograph二、色譜定量分析二、色譜定量分析quantitative analysis in chromatograph 第三節(jié)第三節(jié)色譜定性、定量分析色譜定性、定量分析fundamental of chromatograph analysis qualitative and quantitative analysis in chromatograph2022-3-6一、一、色譜定性鑒定方法色譜定性鑒定方法1.1.利用純物質(zhì)定性的方法利用純物質(zhì)定性的

2、方法 利用保留值定性利用保留值定性：通過(guò)對(duì)比試樣中具有與純物質(zhì)相同保通過(guò)對(duì)比試樣中具有與純物質(zhì)相同保留值的色譜峰，來(lái)確定試樣中是否含有該物質(zhì)及在色譜圖留值的色譜峰，來(lái)確定試樣中是否含有該物質(zhì)及在色譜圖中的位置。不適用于不同儀器上獲得的數(shù)據(jù)之間的對(duì)比。中的位置。不適用于不同儀器上獲得的數(shù)據(jù)之間的對(duì)比。 利用加入法定性利用加入法定性：將純物質(zhì)加入到試樣中，觀察各組分將純物質(zhì)加入到試樣中，觀察各組分色譜峰的相對(duì)變化。色譜峰的相對(duì)變化。2022-3-6 2.2.利用文獻(xiàn)保留值定性利用文獻(xiàn)保留值定性 利用相對(duì)保留值利用相對(duì)保留值r r2121定性定性 相對(duì)保留值相對(duì)保留值r r2121僅與柱溫和固定液性

3、質(zhì)有關(guān)。在色譜手僅與柱溫和固定液性質(zhì)有關(guān)。在色譜手冊(cè)中都列有各種物質(zhì)在不同固定液上的保留數(shù)據(jù)，可以用冊(cè)中都列有各種物質(zhì)在不同固定液上的保留數(shù)據(jù)，可以用來(lái)進(jìn)行定性鑒定。來(lái)進(jìn)行定性鑒定。2022-3-63.3.保留指數(shù)保留指數(shù) 又稱又稱KovatsKovats指數(shù)指數(shù)( () )，是一種重現(xiàn)性較好的定性參數(shù)。，是一種重現(xiàn)性較好的定性參數(shù)。測(cè)定方法：測(cè)定方法： 將正構(gòu)烷烴作為標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)定其保留指數(shù)為分子中碳原子將正構(gòu)烷烴作為標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)定其保留指數(shù)為分子中碳原子個(gè)數(shù)乘以個(gè)數(shù)乘以100100（如正己烷的保留指數(shù)為（如正己烷的保留指數(shù)為600600）。）。 其它物質(zhì)的保留指數(shù)（其它物質(zhì)的保留指數(shù)（I IX X

4、）是通過(guò)選定兩個(gè)相鄰的正構(gòu)是通過(guò)選定兩個(gè)相鄰的正構(gòu)烷烴，其分別具有烷烴，其分別具有Z Z和和Z Z1 1個(gè)碳原子。被測(cè)物質(zhì)個(gè)碳原子。被測(cè)物質(zhì)X X的調(diào)整保留的調(diào)整保留時(shí)間應(yīng)在相鄰兩個(gè)正構(gòu)烷烴的調(diào)整保留值之間如圖所示時(shí)間應(yīng)在相鄰兩個(gè)正構(gòu)烷烴的調(diào)整保留值之間如圖所示：2022-3-6保留指數(shù)計(jì)算方法保留指數(shù)計(jì)算方法)lglglglg()()()()()()()(ZttttItttZRZRZRXRXZRXRZR111002022-3-64.4.與其他分析儀器聯(lián)用的定性方法與其他分析儀器聯(lián)用的定性方法 小型化的臺(tái)式色質(zhì)譜聯(lián)用儀（小型化的臺(tái)式色質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MSGC-MS；LC-MSLC-MS） 色

5、譜色譜- -紅外光譜儀聯(lián)用儀；紅外光譜儀聯(lián)用儀； 組分的結(jié)構(gòu)鑒定組分的結(jié)構(gòu)鑒定SampleSample 58901.0 DEG/MINHEWLETTPACKARDHEWLETTPACKARD5972AMass Selective DetectorDCBA ABCDGas Chromatograph (GC)Mass Spectrometer (MS)SeparationIdentificationBACD2022-3-6二、二、 色譜定量分析方法色譜定量分析方法1. 1. 峰面積的測(cè)量峰面積的測(cè)量 （1）峰高）峰高（h）乘半峰寬乘半峰寬（Y 1/2）法：法：近似將色譜峰當(dāng)作等腰三角形。此法算出

6、的面積是實(shí)際峰面積的0.94倍： A = 1.064 hY1/2 （2）峰高乘平均峰寬法：）峰高乘平均峰寬法：當(dāng)峰形不對(duì)稱時(shí)，可在峰高0.15和0.85處分別測(cè)定峰寬，由下式計(jì)算峰面積： A = h（Y 0.15 + Y 0.85 ）/ 2 （3）峰高乘保留時(shí)間法：）峰高乘保留時(shí)間法：在一定操作條件下，同系物的半峰寬與保留時(shí)間成正比，對(duì)于難于測(cè)量半峰寬的窄峰、重疊峰（未完全重疊），可用此法測(cè)定峰面積： A = hbtR （4）自動(dòng)積分和微機(jī)處理法）自動(dòng)積分和微機(jī)處理法2022-3-62. 定量校正因子定量校正因子 試樣中各組分質(zhì)量與其色譜峰面積成正比，即：試樣中各組分質(zhì)量與其色譜峰面積成正比，

7、即： m i = fi Ai 絕對(duì)校正因子絕對(duì)校正因子：比例系數(shù)f i ，單位面積對(duì)應(yīng)的物質(zhì)量： f i =m i / Ai 定量校正因子與檢測(cè)器響應(yīng)值成倒數(shù)關(guān)系： f i = 1 / Si 相對(duì)校正因子相對(duì)校正因子f i ：即組分的絕對(duì)校正因子與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的絕對(duì)校正因子之比。 當(dāng)mi、mS以摩爾為單位時(shí)，所得相對(duì)校正因子稱為相對(duì)摩爾校正因子（f M）,用表示；當(dāng)mi、mS用質(zhì)量單位時(shí), 以（f W）,表示。ississiisiiAAmmAmAmfff /2022-3-63.3.常用的幾種定量方法常用的幾種定量方法 （1）歸一化法：歸一化法： 特點(diǎn)及要求：特點(diǎn)及要求： 歸一化法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確；歸一化

8、法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確；進(jìn)樣量的準(zhǔn)確性和操作條件的變動(dòng)對(duì)測(cè)定結(jié)果影響不大；進(jìn)樣量的準(zhǔn)確性和操作條件的變動(dòng)對(duì)測(cè)定結(jié)果影響不大；僅適用于試樣中所有組分全出峰的情況僅適用于試樣中所有組分全出峰的情況。100)(100%121 niiiiiniiAfAfmmmmc2022-3-6 （2）外標(biāo)法外標(biāo)法外標(biāo)法也稱為標(biāo)準(zhǔn)曲線法。外標(biāo)法也稱為標(biāo)準(zhǔn)曲線法。特點(diǎn)及要求：特點(diǎn)及要求： 外標(biāo)法不使用校正因子，外標(biāo)法不使用校正因子，準(zhǔn)確性較高準(zhǔn)確性較高， 操作條件變化對(duì)結(jié)果準(zhǔn)確操作條件變化對(duì)結(jié)果準(zhǔn)確性影響較大。性影響較大。 對(duì)進(jìn)樣量的準(zhǔn)確性控制要對(duì)進(jìn)樣量的準(zhǔn)確性控制要求較高，適用于大批量試樣的求較高，適用于大批量試樣的快速分析。

9、快速分析。2022-3-6（3）內(nèi)標(biāo)法）內(nèi)標(biāo)法 內(nèi)標(biāo)物要滿足以下要求：內(nèi)標(biāo)物要滿足以下要求：（a）試樣中不含有該物質(zhì)；試樣中不含有該物質(zhì)；（b）與被測(cè)組分性質(zhì)比較接近；與被測(cè)組分性質(zhì)比較接近；（c）不與試樣發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；不與試樣發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；（d）出峰位置應(yīng)位于被測(cè)組分附近，且無(wú)組分峰影響。出峰位置應(yīng)位于被測(cè)組分附近，且無(wú)組分峰影響。試樣配制：試樣配制：準(zhǔn)確稱取一定量的試樣準(zhǔn)確稱取一定量的試樣W，加入一定量?jī)?nèi)標(biāo)物加入一定量?jī)?nèi)標(biāo)物mS計(jì)算式：計(jì)算式：SsiisiSsiisiAfAfmmAfAfmm; 100100100% SsiiiSsiiiiiAfAfWmWAfAfmWmc2022-3-6內(nèi)標(biāo)法特點(diǎn)內(nèi)標(biāo)法特點(diǎn)(a) 內(nèi)標(biāo)法的準(zhǔn)確性較高，操作條件和進(jìn)樣量的稍許變動(dòng)對(duì)內(nèi)標(biāo)法的準(zhǔn)確性較高，操作條件和進(jìn)樣量的稍許變動(dòng)對(duì)定量結(jié)果的影響不大。定量結(jié)果的影響不大。(b) 每個(gè)試樣的分析，都要進(jìn)行兩次稱量，不適合大批量試每個(gè)試樣的分析，都要進(jìn)行兩次稱量，不適合大批量試樣的快速分析。樣的快速分析。(c) 若將內(nèi)標(biāo)法中的試樣取樣量和內(nèi)標(biāo)物加入量固定，則：若將內(nèi)標(biāo)法中的試樣取樣量和內(nèi)標(biāo)物加入量固定，則：常數(shù)SiiAAc %2022-3-6請(qǐng)選擇內(nèi)容請(qǐng)選擇內(nèi)容第一節(jié)第一節(jié) 色譜法概述色譜法概述generalization of chr