原蛋白肽生物功能材料的研究與開發(fā)_圖文

1、西北工業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文膠原蛋白肽生物功能材料的研究與開發(fā)姓名:張小燕申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:博士專業(yè):材料學(xué)指導(dǎo)教師:范曉東20060501 西北工業(yè)走學(xué)博士學(xué)位e文個(gè)區(qū)段,其制作方法均相似,主要不同處在于分隔數(shù)目的差異,以下以10區(qū)段為例,介紹其制作過(guò)程。首先取厚度為0.5衄的壓克力板,將其裁切成10cm5cm大小,并等距離割劃出9個(gè)凹槽,接著,將壓克力板截切成10cml咖三段,將切口處磨光滑,再以二氯甲烷將切好的壓克力板粘成長(zhǎng)寬為10cm1cm大小的溝槽,此時(shí)取9片大小適當(dāng),材質(zhì)為P,rFE,孔徑為0.8岬的薄膜,分別疆入各劃的凹槽中,這樣可將凹槽區(qū)分成10等份,再以鐵氟龍(Tcflon,杜邦專利

2、涂料膠帶,仔細(xì)將剩余的空隙塞嚴(yán),放進(jìn)水溶液時(shí)沒有滲漏發(fā)生。接著取兩條鉑金電極,鋪到IEF裝置的左右兩端,電極上方再以熱熔膠固定,即完成了哐F電泳裝置的制作,見圖3.1所示。(2高壓電源供應(yīng)器電源供應(yīng)器輸出電壓:眥OKV,電流:o5mA。(3溫度控制整個(gè)mF系統(tǒng)的溫度是以冰浴的方式來(lái)進(jìn)行,其做法是用保溫箱,內(nèi)置O冰水,使系統(tǒng)保持在低溫狀態(tài),并以熱電偶溫度計(jì)檢測(cè)各個(gè)區(qū)段內(nèi)的溫度。 圖3.1lO個(gè)區(qū)段的等電點(diǎn)聚焦裝置F嘻3.1TIle equipotential缸鵬iIlg equipmem w妯iil10sectiom3.2分離儀器簡(jiǎn)介當(dāng)通電給電場(chǎng)時(shí),利用樣品中不同成分的蛋白多肽等電點(diǎn)的差異,不同

3、等電點(diǎn)的蛋白多肽會(huì)移動(dòng)至其等電點(diǎn)位置后靜止,而達(dá)到第一分離結(jié)果,此分離方式 西北工業(yè)太孝博士辛fi掄文這20種區(qū)段的溶液分別收集,進(jìn)行下個(gè)程序的分析。而聚焦分離的時(shí)間則會(huì)依旌加電壓的高低、樣品種類各異。一般施加的高壓電控制在2000V時(shí),較小的膠原蛋白肽或較簡(jiǎn)單的膠原蛋白肽混合物,聚焦的時(shí)間在3小時(shí)以上,若是對(duì)于較復(fù)雜的蛋白混合物,則要高達(dá)15小時(shí)。 w哪B.voItage w觚added to the two sid船of pole to IEF s印甜ation;C.fow pratcillsscparated;D.20辯ctions were coIlected rcspectiVely

4、 t0do next proce蟠毛細(xì)管液相層析是在傳統(tǒng)的電泳技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的。其利用小的毛細(xì)管代替?zhèn)鹘y(tǒng)的大電泳槽,使分離效率提高了幾十倍。此技術(shù)從80年代以來(lái)發(fā)展迅速,是生物化學(xué)分析工作者與生化學(xué)家分離、定性多肽與蛋白類物質(zhì)的有利工具。(1pHPLc系統(tǒng)本實(shí)驗(yàn)使用的液相層析儀是A畫!ent lloo的“.HPLC系統(tǒng),配備有脫氣裝置、毛細(xì)管泵、自動(dòng)進(jìn)樣及數(shù)據(jù)處理器。其流速有兩種操作模式,其一是標(biāo)準(zhǔn)流速,流速大約為lmLmirI一;其二是微量流速,透過(guò)分流方式,流速控制到5 25肛Lm計(jì)1。此外,配合微量的自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng),其吸取量可低于0.1此。本研究實(shí)驗(yàn)共分5個(gè)部分,在妒HPLC實(shí)驗(yàn)參數(shù)的

5、設(shè)定上也有所不同,第一部分與第二部分的操作條件是相同的,其樣品的注入量是0.5此,流速是加 ,。,。!:,:皇蘭三蘭i:壘!:絲i呈三,。:!,。一一。一該組裝的試驗(yàn)裝置現(xiàn)已破加拿大農(nóng)業(yè)部試驗(yàn)室采納應(yīng)用,并經(jīng)改進(jìn)后加工成達(dá)lOOO個(gè)區(qū)段的控溫保溫電泳裝置,見下圖3,4。圖3_3這款電泳的設(shè)計(jì)主要體現(xiàn)了蛋白質(zhì)組工作系統(tǒng)對(duì)電泳高容量、高分辨率,重現(xiàn)性好等要求。操作要求:a提取蛋白樣品,注意鹽濃度低于40r州,將蛋自樣品加在反應(yīng)盤中:b將預(yù)制膠條的塑料保護(hù)層撕去,并將其凝膠的一面向下,放在樣品上:c水化膠條,在恒溫下進(jìn)行主動(dòng)(低電壓及被動(dòng)的(無(wú)申壓水化反應(yīng),一般需1215小時(shí);d按設(shè)定的程序等電聚焦,一般需68小時(shí):e聚焦完成后,平衡膠條30min,再移到PA3E膠中。 圖3.3等電點(diǎn)聚焦電泳實(shí)驗(yàn)裝置:高壓電源供應(yīng)器、lEF電泳及控溫保描箱high volatage power supply、electrophoresis and ContrOl heat 圖3.4己商品化的等電點(diǎn)聚焦電冰實(shí)_;5盤袋置本實(shí)驗(yàn)五個(gè)部分包括研究各實(shí)驗(yàn)樣品量、緩沖液用量、分離