沉降菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、01.0 目的01.1 闡述潔凈室（區(qū)）空氣中沉降菌檢測(cè)操作規(guī)程，保證藥品的質(zhì)量，防止生產(chǎn)環(huán)境對(duì)產(chǎn)品的污染，保證實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境達(dá)到檢測(cè)產(chǎn)品的要求。02.0 適用范圍02.1 適用于本公司的潔凈室（區(qū)）的沉降菌監(jiān)測(cè)和潔凈度等級(jí)的驗(yàn)證。03.0 人員職責(zé)測(cè)試人員對(duì)潔凈室（區(qū)）沉降菌的測(cè)試。04.0 內(nèi)容04.1 術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本規(guī)程。04.1.1 菌落：細(xì)菌培養(yǎng)后，由一個(gè)或幾個(gè)細(xì)菌繁殖而形成的細(xì)菌集落，簡(jiǎn)稱CFU，通常用個(gè)數(shù)來(lái)表示。04.1.2 沉降菌：用GB/T16292-2010 提及的方法收集空氣中的活性微生物粒子，通過(guò)專門(mén)的培養(yǎng)基在適宜的生長(zhǎng)條件下系繁殖到可見(jiàn)到的菌落數(shù)。04

2、.1.3 沉降菌菌落數(shù)：規(guī)定時(shí)間內(nèi)每個(gè)平板培養(yǎng)皿收集到空氣中沉降菌的數(shù)目，以cfu/皿表示。04.2 測(cè)試原理：本測(cè)試方法利用沉降法，即通過(guò)自然沉降原理收集空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)若干時(shí)間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見(jiàn)的菌落數(shù)，以平板培養(yǎng)中的菌落數(shù)來(lái)評(píng)定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來(lái)評(píng)定潔凈區(qū)的潔凈度。04.3 監(jiān)測(cè)周期：A級(jí)潔每次室驗(yàn)做監(jiān)控，B級(jí)每周一次，C級(jí)每季度一次，D級(jí)每半年一次監(jiān)控。04.4 測(cè)試方法：04.4.1 使用設(shè)備與材料高壓滅菌鍋：使用時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行。恒溫恒濕培養(yǎng)箱：必須定期對(duì)培養(yǎng)箱進(jìn)行校驗(yàn)。培養(yǎng)皿：一般采用90mm×15mm培養(yǎng)皿。培養(yǎng)基：胰

3、酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（TSA）； 已滅菌配制好的培養(yǎng)基平皿放入30-35恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時(shí)，若培養(yǎng)基平皿上確無(wú)菌落生生即可供采樣用，制備好的培養(yǎng)基平皿應(yīng)放在2-8的環(huán)境中存放。清潔劑：75%酒精04.4.2 測(cè)試時(shí)間：（1）對(duì)單向流，如A級(jí)凈化房間內(nèi)及超凈工作臺(tái)，測(cè)試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于10分鐘后開(kāi)始。（2）對(duì)非單向流，如B級(jí)、C級(jí)、D級(jí)以上的凈化房間，測(cè)試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于30分鐘后開(kāi)始。（3）培養(yǎng)皿的采樣時(shí)間：靜態(tài)測(cè)試時(shí)，培養(yǎng)皿暴露時(shí)間為30min以上；動(dòng)態(tài)測(cè)試時(shí)，培養(yǎng)皿暴露時(shí)間為不大于4小時(shí)。04.4.3 采樣點(diǎn)數(shù)及其布置（1）最少采樣點(diǎn)數(shù)目：面積(M)（m2）

4、潔凈度級(jí)別A級(jí)B級(jí)C級(jí)D級(jí)M102322210M20422220M40822240M10016422注：表中的面積，對(duì)于單向流潔凈室（區(qū)）、潔凈工作臺(tái)，指的是送風(fēng)面積，對(duì)非單向流潔凈室（區(qū)），指的是房間面積。（2）最少培養(yǎng)皿數(shù)潔凈度等級(jí)所需90mm培養(yǎng)皿數(shù)（以沉降4h計(jì)）A級(jí)14B級(jí)2C級(jí)2D級(jí)2（3）采樣點(diǎn)布置潔凈室（區(qū)）采樣點(diǎn)布置宜力求均勻，避免采樣點(diǎn)在局部區(qū)域過(guò)于稀疏。下列多點(diǎn)采樣的采樣點(diǎn)布置圖示可作參考（見(jiàn)圖1）圖1平面采樣點(diǎn)布置圖A級(jí)單向流區(qū)域，潔凈工作臺(tái)或局部空氣凈化設(shè)施的采樣點(diǎn)宜布置在正對(duì)氣流的工作面上，氣流形式可參考圖2、圖3。圖2水平單向流的氣流形式圖3垂直單向流氣流形式工作

5、區(qū)采樣點(diǎn)的位置離地左右（略高于工作臺(tái)面）。取樣時(shí)，應(yīng)盡量避免在回風(fēng)口附近取樣（距離1m以上），且測(cè)試人員應(yīng)在取樣的下風(fēng)測(cè)，并盡量少走動(dòng)?？稍陉P(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加采樣點(diǎn)。取樣時(shí)，取樣設(shè)備會(huì)對(duì)流產(chǎn)生干擾，取樣時(shí)應(yīng)避免可能對(duì)氣流組織的干擾。04.4.4 測(cè)試步驟：04.4.4.1 采樣方法 用無(wú)菌容器將預(yù)先培養(yǎng)的培養(yǎng)基（無(wú)菌平皿）放至傳遞窗，紫外燈照0.5小時(shí)，待檢測(cè)用，將培養(yǎng)皿取出，用75%酒精擦平皿表面，放置在預(yù)先確定的取樣點(diǎn)，打開(kāi)培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露時(shí)間不少于30min，現(xiàn)將培養(yǎng)皿蓋，蓋后倒置培養(yǎng)。檢測(cè)時(shí)記下培養(yǎng)皿打開(kāi)的起始時(shí)間和結(jié)束時(shí)間。04.4.4.2 培養(yǎng)： 全部采樣結(jié)

6、束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。30-35培養(yǎng)，時(shí)間為72小時(shí)。每批培養(yǎng)基應(yīng)有對(duì)照試驗(yàn)，檢查培養(yǎng)基本身是否污染，可每批選定3個(gè)培養(yǎng)皿做對(duì)照培養(yǎng)。04.4.4.3 菌落計(jì)數(shù) 用肉眼直接計(jì)數(shù)，然后用5-10倍放大鏡檢查，是否有遺漏。若培養(yǎng)皿上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上計(jì)數(shù)。04.4.5 注意事項(xiàng)04.4.5.1 測(cè)試用具要做滅菌處理，以確保測(cè)試的可靠性、正確性。04.4.5.2 采取一切措施防止人為對(duì)樣本的污染。對(duì)培養(yǎng)基條件及參數(shù)的詳細(xì)記錄。04.4.5.3 由于細(xì)菌種類繁多，差別甚大，計(jì)數(shù)時(shí)一般有透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細(xì)觀察，不要漏計(jì)培養(yǎng)皿邊緣生長(zhǎng)的菌落，必

7、要時(shí)用顯微鏡別。04.4.5.4 采樣前應(yīng)仔細(xì)檢查每個(gè)培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)剔除。04.4.5.5 測(cè)試狀態(tài)沉降菌測(cè)試前，溫度在18-26，相對(duì)濕度在45%-65%，潔凈區(qū)與非潔凈區(qū)和潔凈區(qū)與潔凈區(qū)之間的靜壓差10Pa。01.002.003.004.004.104.204.304.3.104.3.204.3.304.3.404.3.504.3.5.104.3.5.204.3.5.304.3.5.404.3.5.504.3.5.6 測(cè)試人員測(cè)試狀態(tài)有靜態(tài)和動(dòng)態(tài)兩種，并在報(bào)告中注明測(cè)試狀態(tài)。靜態(tài)測(cè)試時(shí)，室內(nèi)測(cè)試人員不多于2人。被測(cè)試潔凈區(qū)已消毒，測(cè)試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級(jí)別

8、的工作服。04.4 結(jié)果計(jì)算用計(jì)數(shù)方法得出各個(gè)培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。平均菌落數(shù)的計(jì)算見(jiàn)下式：計(jì)算公式：M=Min 式中M為平均菌落數(shù)（CFU）Mi表示1，2，3，n號(hào)皿菌落數(shù)；n表示平皿總數(shù)。04.5 標(biāo)準(zhǔn)潔凈度級(jí)別沉降菌平均菌落數(shù)（CFU/皿）以4小時(shí)計(jì)A級(jí)1B級(jí)5C級(jí)50D級(jí)10004.6 結(jié)果評(píng)定04.6.1 每個(gè)測(cè)點(diǎn)的沉降菌平均菌落數(shù)必須低于所選定評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)中的界限。04.6.2 在靜態(tài)測(cè)試時(shí)，若某測(cè)點(diǎn)的沉降菌落數(shù)超過(guò)評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，則重新測(cè)試兩次，兩次測(cè)試結(jié)果均合格才能判為合格。05.0 附件05.1 REC：JY-001-01沉降菌檢驗(yàn)原始記錄06.0 參考文獻(xiàn)藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范