常用(緩沖)溶液的配制(免費)

1、附錄、常用溶液的配制(一) 溶液配制注意事項1. 藥品要有較好的質(zhì)量試劑分為優(yōu)級純(保證試劑，Guara nteed reage nt, G.R.)、分析試劑(An talytical reage nt, A. R.)化學純(Chemical pure, C. P.)和 實驗試劑(Laboratory reage nt, L . R.)等等。工業(yè)用的化學試劑，雜質(zhì)較多，只 在個別情況下應用，如配洗液用的硫酸、配干燥劑的氯化鈣等。2 .藥品稱量要精確。3 .配制試劑用水應用新鮮的去離子水或雙蒸餾水，比電阻值在50萬歐姆以上，pH在5.57.0之間才可應用，在組織培養(yǎng)等特殊用途時應注意此項要求，配

2、制一般化驗用溶液只要求用雙蒸餾水或去離子水。4.配好后的溶液，應立即除菌處理(如高壓滅菌、抽濾或加抑菌物質(zhì)),以防雜菌生長。(二) 0.067 (1/15) Mol/L 磷酸緩沖液1 . 1/15M0I/L磷酸二氫鉀溶液的配制：稱取磷酸二氫鉀(KH2PO4, A. R.) 9.08g,用蒸餾水溶解后，傾入1 000ml容量瓶內(nèi)，再稀釋至刻度(1 000ml)。2. 1 /15Mol/L磷酸二氫鈉溶液的配制：稱取無水磷酸氫二鈉 (Na2HPO4, A.R.)9.47g (或者Na2HPO4 2H2O 11.87g)用蒸餾水溶解后，放入1 000ml容量瓶內(nèi)，再加蒸餾水稀釋至刻度(1 000ml)

3、。3 .按附表的比例，配制成不同pH值的緩沖溶液。附表1磷酸鹽緩沖液配制法(單位：毫升)pH1/15Mol/LNa2HPO41/15Mol/LKH2PO4pH1/15Mol/LNa2HPO41/15Mol/LKH 2PO45.88.092.07.166.623.45.99.990.17.272.028.06.012.287.87.376.823.26.115.384.77.480.819.26.218.681.47.584.115.96.322.477.67.687.013.06.426.773.37.789.410.66.531.868.27.891.58.56.637.562.57.993

4、.26.86.743.556.58.094.75.36.849.650.48.195.84.26.955.444.68.297.03.07.061.138.98.498.02.0(三0.15Mol/LPB液附表 2 0.15Mol/LPB液配制法pH0.15Mol/L Na2HPO4 ( ml)0.15Mol/L NaH2PO4 ( ml)6.426.573.56.637.562.56.849.051.07.061.039.07.272.028.07.481.019.07.687.013.0Na2HPO4 2H2O 分子量=175.050.15Mol/L溶液含26.7g/L。Na2HPO4 1

5、2H2O 分子量=358.220.15Mol/L溶液含53.7g/L 0NaH 2PO4 H2O 分子量=138.000.15Mol/L溶液含20.7g/L 0NaH 2PO4 2H2O 分子量=156.030.15Mol/L溶液含23.4g/L 0（四） 0.2MO/L PB 緩沖液附表3 0.2mol/L PB緩沖液配制法pH0.2 Mol/L Na2HPO4 ( ml)0.2Mol/L NaH2PO4 ( ml)5.88.092.06.012.387.76.218.581.56.426.573.56.637.562.56.849.051.07.061.039.07.272.028.07.

6、481.019.07.687.013.07.891.58.58.094.75.30.2Mol/L W2HPO4 2H2O 溶液 35.61g/LNa2HPO4 12 H2O 溶液含 71.64g/L0.2Mol/LNaH 2PO4-H2O 溶液含 27.60g/LNaH 2PO4 2 H2O溶液含31.21g/L欲配0.1Mol/L PB緩沖液則在0.2Mol/L PB緩沖液的基礎上加H2O稀釋1倍即可。欲配制PBS液時，則在溶液中加0.85 %的NaCl溶液即可。（五無鈣鎂離子磷酸緩沖鹽水（PIPBS(0.15Mol/L PH 7.2)NaCl8.0gKCl0.2gNa2HPO41.15g(

7、如為 Na2HPO4 12H2O,則為2.89g)KH2PO40.2g將上述試劑依次溶于1 000ml去離子水中，完全溶解后，115 C高壓滅菌（六硼酸鹽緩沖液（BBoaate salinebuffer )10min15min，存在4 C冰箱中備用。此液可用于配制和稀釋細胞分散劑以及洗滌 細胞培養(yǎng)物。41 .硼酸(H 3BO3)0.2Mol/L 硼酸：硼酸 12.37g 加水至 1 000ml。2 .硼砂（Na2B4O7）0.05Mol/L 硼砂：硼砂 19.07g 加水至 1 000ml。附表4 不同pH的0.2Mol/L硼酸緩沖液配制法pH0.05Mol/L 硼砂(ml)0.2Mol/L

8、硼酸(ml)pH0.05Mol/L 硼砂(ml)0.2Mol/L 硼酸(ml)7.41.09.08.23.56.57.61.58.58.44.55.57.82.08.08.76.04.08.03.07.09.08.02.0（七）巴比妥緩沖液47.6g1 . pH8.2離子強度0.05MOI/L巴比妥緩沖液巴比妥鈉蒸餾水3 000ml1.17N HCl55.0ml（1.17 N HCI=193ml 濃 HCl 加 1 807ml 蒸餾水） 將4.76g巴比妥鈉溶于3 000ml蒸餾水。 加 1.17 N HCl 55ml。 用HCI調(diào)節(jié)pH到8.2,并加蒸餾水至 4 265ml。2. pH8.4

9、0.06MOI/L巴比妥緩沖液巴比妥1.84g巴比妥鈉10.30g加蒸餾水至1 000.00ml3. pH8.60.06Mol/L巴比妥緩沖液巴比妥1.66g巴比妥鈉12.76g加蒸餾水1 000.00ml（八0.2MO/L 醋酸鹽緩沖液 見表附表5附表5 0.2Mol/L醋酸鹽緩沖液配制法pH0.2Mol/LTris (ml)0.1Mol/L HCl (ml)pH0.2Mol/LTris (ml)0.1Mol/L HCl (ml)23 C37 C23 C37 C9.108.952558.067.902527.58.928.76257.57.967.822530.08.758.602510.5

10、7.877.732532.58.628.482512.57.777.632535.08.508.372515.57.667.522537.58.408.272517.57.547.402540.08.328.182520.07.367.222542.5（九）三羥甲基甲烷一鹽酸緩沖液（(TTSs -HCl緩沖液）不同 pH, 0.05Mol/L25ml0.2Mol/L 三羥甲基氨基甲烷加x ml0.1NHCl，加水稀釋至100ml （見下表）附表6 Tris HCl緩沖液配制法pH23 C37 C0.2Mol/LTris(ml)0.1NHCl(ml)pH0.2Mol/LTris(ml)0.1NH

11、Cl(ml)23 C37 C9.108.962558.057.902527.58.928.78257.57.967.822530.08.748.602510.07.877.732532.58.628.482512.57.777.632535.08.508.372515.07.667.522537.58.408.272517.57.547.402540.08.328.182520.07.367.222542.58.238.102522.57.207.052545.08.148.002525.025三羥甲基氨基甲烷（Tris）分子量=121.140.2MOI/L三羥甲基氨基甲烷：Tris24.23

12、g，加水至1 000ml。0.1NHCI : 取 HCI8.6ml，加水至 1 000ml。 （十）0.5IMOI/L pH9.5碳酸鹽緩沖液NaHCO33.70gNa2CO30.60g溶于600.00ml蒸餾水中即得。不用時塞緊瓶塞，以免吸收空氣中二氧化碳使PH下降。最好小量配制。（一）甘油磷酸緩沖液1. 配制pH8.0磷酸緩沖液0.1Mol/L Na2HPO494.50ml0.1N NaH2PO45.50ml混合即可2. 9份甘油與1份pH8.0磷酸緩沖液混合，即為甘油磷酸緩沖液。 用途：用于免疫熒光試驗。（十二）Hank's 液1.貯存液NaCl80.00gKCl4.00gNa2

13、HPO4 12 H2O1.52gKH 2PO40.60g葡萄糖4.00g0.4 %酚紅液50.00ml雙餾水加至100.00ml115C高壓滅菌15min，冰凍保存。2工作液1份9份貯存液雙餾水（十三）萘（鈉）氏試劑（ NNeseslselrer 's reagent ）配方 1 ：氯化汞6.0g碘化鉀12.4g20% Na0H30ml加蒸餾水至100ml配方 2：碘化汞11.5g碘化鉀8g蒸餾水50ml（完全溶解后）過濾，加20% Na0H50ml 。用途：檢測溶液中氨離子。（十四）阿氏（AAever '）液葡萄糖2.05g檸檬酸鈉0.80g氯化鈉0.42g蒸餾水100ml溶

14、解后，以 10%檸檬酸調(diào)節(jié)pH 至 6.1，過濾，分裝C保存。（十五）青、鏈霉素混合液（簡稱SP液或雙抗液）青霉素（ 40 萬 U）5支鏈霉素（200萬卩g）1支115C高壓滅菌15min。臨用時用滅菌的 5.6% NaHC03液調(diào)pH值至7.2左右 溶液呈橙紅色） 。10 磅 10min 滅菌， 4分別溶于 100ml 滅菌無離子水中或共同溶于 200ml 滅菌無離子水中，混合后分裝小瓶，置-10 °C -20C冰箱保存?zhèn)溆茫?萬單位卩g/ml ）。臨用時， 按 1%的量加入營養(yǎng)液或其他溶液中， 最后濃度是青霉素 100U/ml ， 鏈霉素 100ug/ml 。150g300ml3

15、 000ml 使之自然溶解或水浴溶解，亦可在大坩堝中加熱溶（十六）洗液（清潔液） 配方 1 ：重鉻酸鉀 蒸餾水 濃硫酸 將重鉻酸鉀加入蒸餾水中，解，然后慢慢加入濃硫酸，邊加邊攪拌，見發(fā)熱過劇則稍停，冷卻后再繼續(xù)加。此為強洗液。盛清潔液的容器要堅固，上加厚玻璃蓋，操作時要穿橡皮圍裙、長統(tǒng)膠靴、戴上眼鏡和厚膠皮手套，以保安全。洗液一旦變綠，表示鉻酸已經(jīng)還原，失去了氧化能力，不宜再用。如將這樣洗 液加熱，再加適量重鉻酸鉀，又可重新使用。配方 2：濃硫酸50%蒸餾水50%重鉻酸鉀5%此為中等強度洗液。配方 3：重鉻酸鉀100g蒸餾水1 000ml加熱溶解，冷卻后緩慢加入工業(yè)硫酸100ml此液為弱洗液，

16、 為棕紅色。 使用此液時， 必須預先用熱肥皂水將玻璃器皿洗凈， 經(jīng)自來水沖洗，瀝干然后才能浸入，否則該洗液很快失效。二、犢牛血清的制備選擇健康犢牛，一般為初生至六個月齡，最好是剛出生尚未吸乳的公犢牛， 采 血前 12h 不予喂飼，僅予水喝。采血時采用頸動脈，動脈插管，乳膠管、盛血容器 均應洗凈滅菌。將采血筒中放入少量Hank's液，將膠管連接至玻璃管（彎）放入瓶口，然后瓶口包以硫酸紙、白布和普通紙，系緊。插管也用硫酸紙包扎系好。采血前將犢牛固定， 最好放在手術(shù)臺或固定架上固定好頭部和四肢， 局部剪毛 消毒，切開，剝離頸動脈，止血鉗夾好，消毒，切開動脈管壁，插入插管，另一助 手輕搖采血筒

17、中的 Han k's液以濕潤瓶壁，這樣有利于凝血，也有利于血凝塊與瓶 壁的分離。這時術(shù)者即可放血。每個采血筒內(nèi)采適量不宜超過總?cè)萘康?3，裝的過多則出血清少。采血時還須注意動脈插管口不宜太細，放血速度也不宜過快， 過快過慢均可引起溶血。盛血的采血筒應置室溫（天熱時）或溫箱中，溫室（天冷時）中，靜置4h以上，待血液凝固后放入 4C冰箱或冷庫中過夜。然后在無菌間，小心（不要搖晃）倒出或用虹吸法吸出上清液，如混有紅血球，則將這部分血清以2 000r/min離心10min15min注意無菌操作，收集上清（略有溶血的血清也可應用）。一頭犢?？刹裳? 500ml3500ml，約能分離出一半血清。血

18、清分離后，置 56C水浴中滅活30min以破壞補體和某些傳染的病毒（也可 以不滅活）。滅活后可進行分裝，分裝后需作菌檢。菌檢結(jié)果如有污染，可用賽世 濾器過濾。有的材料報道，有的血清不滅活要比滅活的血清效果好。除近期要用的血清可置 4C保存外，其余放低溫冰箱中保存。最好采用35頭犢牛血清先分別滅活，菌檢后再混合、分裝、保存?；旌涎?清可以避免個別犢牛具有抑制細胞生長的物質(zhì)或缺少某些生長因子的缺陷。三、常用化合物的分子量及當量附表7常用化合物的分子量及當量化合物分子式分子量、【/日當量鹽酸HCl36.4636.46氫氧化鈉NaOH40.0040.00氫氧化鉀KOH56.1156.11草酸H2C2O

19、490.0445.02氯化鈉NaCl58.4458.44氯化鉀KCl74.5674.56硫酸H2SO498.0849.04醋酸CH3COOH60.0560.05磷酸H3PO498.0032.67磷酸二氫鈉NaH2PO4119.98磷酸氫二鈉Na2HPO4141.96磷酸二氫鉀KH2PO4136.09磷酸氫二鉀K2HPO4174.18二乙胺四乙酸二鈉C10H14N2O8Na2372.24186.12(EDTA Na2)硝酸HNO363.0163.01碘I2253.81126.90碘化鉀KI166.01166.01硼酸H 3BO361.8320.61碳酸氫鈉NaHCO384.0184.01碳酸鈉N

20、a2CO3105.9953.00硼砂Na2B4O7381.43四、克分子濃度用1L (1 000ml)溶液中所含溶質(zhì)的克分子數(shù)表示溶液的濃度叫做克分子濃度。 通常用字母M表示。物質(zhì)的量用做單位來表示，在數(shù)值上與物質(zhì)的分子量相同， 這個量叫做克分子。例如氯化鈉的分子量為58.44，則1個克分子氯化鈉的重量是58.44g。將58.44g氯化鈉溶解于水，配制成 1L溶液，就是1Mol/L氯化鈉溶液。 NaH2PO4 H2O的分子量為138.0,則其1個克分子的重量是138.0克。將 69.0gNaH2PO4 H2O溶解于水，配制成 1L溶液，就是0.5Mol/L磷酸二氫鈉溶液。五、離心機與離心力習慣

21、上把每分鐘4, 000轉(zhuǎn)的離心機稱為低速離心機，每分鐘20, 000轉(zhuǎn)的離心機稱為高速離心機，這類離心機有冷凍裝置。每分鐘20, 000以上的離心機稱為超速離心機，為了減少空氣的摩擦阻力，它的轉(zhuǎn)頭是在真空中運轉(zhuǎn)的。由于許多樣品(如病毒等)都是極小的顆粒或溶質(zhì)，它們在重力場中沉降速度極慢，同時還存 在擴散作用，只有超速離心所產(chǎn)生的強大的離心力場，才有可能它們彼此分離開。過去的資料中，所用離心條件多用轉(zhuǎn)數(shù)表達，現(xiàn)在國際資料中已經(jīng)改用相對離心力(Relative Centrifugal Force, RCF)表示，因為離心力不僅為轉(zhuǎn)速的函數(shù)，也 是離心半徑的函數(shù)。轉(zhuǎn)速相同時，離心半徑越長，離心力越大，故僅以轉(zhuǎn)速表達離10心力是不科學的。相對離心力