非霍奇金淋巴瘤中MMP

1、非霍奇金淋巴瘤中MMP         【關(guān)鍵詞】  明膠酶B；白細胞介素6；淋巴瘤,非霍奇金；免疫組織化學(xué)Expressions  of  MMP 9 and IL6   in nonHodgkins lymphoma  and their Relationships with prognosis【Aastract】  AIM:  To study the expression of matrix metalloproteinase

2、9(MMP9) and interleukin6 (IL6) in nonHodgkins lymphoma and its subtypes, and evaluate the relationship between the staining grades of these markers and the prognosis. METHODS: Immunohistochemical SP method was used to detect the  expressions of MMP9 and IL6 in the tissues of nonHodgkins lymphom

3、a(n=51).  These  patients get a follwup of  7 years. RESULTS: The expressions of MMP9 and IL6 were  mainly found  in cytoplasm of the tumor cells by immunohistochemical SP method, and their expressions in tumor cells were  higher than those  in reactive hyperplasia

4、 of lymphnodes（P0.05）. There was statistical significance in the expression of MMP9 among different  histological subtypes. The  5year diseasefree survival rates were 66.7%, 50.0%, 35.3%, 0% in patients with grade 0, 1, 2, 3 of MMP9  staining  respectively. The 5year diseasefree

5、survival rates were 66.7%, 44.4%, 38.9%, 0% in patients with grade 0, 1, 2, 3 of IL6 staining  respectively. CONCLUSION: The  expressions of MMP9 and IL6 in tumor cells are  higher than those in reactive hyperplasia of lymphnodes.  Furthermore, have a correlation with  histo

6、logical subtypes. The staining grades of MMP9 and IL6  are important indexes to estimate the prognosis of nonHodgkins lymphoma.【Keywords】 gelatinase B; interleukin6; lymphoma, nonHodgkins; Immunohistochemistry【摘要】 目的： 研究MMP9及IL6在非霍奇金淋巴瘤不同組織分型中的表達，探討染色分級與預(yù)后的關(guān)系.  方法： 應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法檢測51例非霍奇金淋巴瘤組

7、織中MMP9及IL6的表達；并對患者進行隨訪7 a.  結(jié)果： 經(jīng)免疫組化SP法檢測MMP9及 IL6主要表達于腫瘤細胞的胞質(zhì)中，MMP9及 IL6在非霍奇金淋巴瘤中的表達均高于對照組（P0.05）,MMP9的表達在非霍奇金淋巴瘤組織分型間有意義； MMP9染色分級為0，1，2，3級者5 a生存率依次為66.7%，50.0%，35.3%，0%；IL6染色分級為0，1，2，3級者5a生存率依次為66.7%，44.4%，38.9%，0%.  結(jié)論：  MMP9及IL6在非霍奇金淋巴瘤中的表達均高于對照組,且與非霍奇金淋巴瘤的組織分型相關(guān)，是判斷非霍奇金淋巴瘤預(yù)后的重要

8、指標(biāo). 【關(guān)鍵詞】 明膠酶B；白細胞介素6；淋巴瘤，非霍奇金；免疫組織化學(xué)0引言細胞外基質(zhì)和基底膜是腫瘤生長和擴散的基礎(chǔ)屏障，而金屬蛋白酶及其抑制劑則是細胞外基質(zhì)代謝的主要調(diào)節(jié)者. 腫瘤的浸潤與轉(zhuǎn)移是衡量腫瘤生物學(xué)行為的重要指標(biāo)，也是腫瘤危害的根源所在. 大量研究顯示，金屬蛋白酶主要通過降解細胞外基質(zhì)、促進新生血管形成及調(diào)節(jié)細胞黏附3個方面在腫瘤的生物學(xué)行為中發(fā)揮作用1-2. IL6的生物學(xué)活性具有比較明顯的雙重性，即一方面具有重要的生理意義；另一方面則參與多種疾病的病理過程. 有報道，宮頸癌和其他的實體瘤中有較高水平的IL63.1材料和方法1.1材料甘肅省腫瘤醫(yī)院病理科1990/2

9、000年確診的非霍奇金淋巴瘤患者51（男32，女19）例，年齡972（平均56.3）歲；術(shù)前未做放化療；組織標(biāo)本經(jīng)甲醛固定，石蠟包埋，HE染色后，按修訂的Kiel分類和工作分類標(biāo)準(zhǔn)，借助免疫組化標(biāo)記確定以下類型：外周T細胞淋巴瘤7例，濾泡型淋巴瘤8例，淋巴母細胞性淋巴瘤4例，彌漫型大B細胞淋巴瘤32例；所有患者均接受了CHOP方案治療. 另選取淋巴結(jié)反應(yīng)性增生12例為對照組，年齡868（平均51.7）歲,兩組年齡差別無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）. MMP9 mAb，SP試劑盒，APES, DAB顯色劑購自福州邁新生物技術(shù)有限公司，IL6多克隆抗體為武漢博士德生物工程公司產(chǎn)品. 1.2方法免疫組織

10、化學(xué)染色按免疫組化SP法常規(guī)進行，切片經(jīng)二甲苯脫蠟，乙醇水化后，微波爐中抗原修復(fù)，常規(guī)石蠟切片，厚4 m，經(jīng)HE染色評估后室溫自然干燥，用1100，IL6及MMP9一抗作用過夜，生物素化二抗孵育，鏈親和素生物素過氧化物霉復(fù)合物作用后經(jīng)DAB顯色封片觀察. 每批實驗均以福州邁新生物技術(shù)有限公司和武漢博士德生物工程公司提供的陽性對照片作陽性對照，以PBS代替一抗作陰性對照. 顯微鏡下觀察MMP9和IL6，以胞質(zhì)內(nèi)或胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性染色. 參照Talvensaari等描述的分級方法，顯微鏡下選取染色理想部位，高倍鏡用半定量法評估其染色，每視野選取200個細胞數(shù)，根據(jù)染色強度及染色細胞百分率分

11、為： 陰性： 陽性細胞百分率10%（）, 細胞內(nèi)顆粒著色淺幾乎無色；弱陽性： 陽性細胞百分率10%20%（+）, 細胞內(nèi)著色為淺黃色；陽性： 陽性細胞百分率20%49%（），細胞內(nèi)顆粒著色為桔黃色；強陽性： 陽性細胞百分率50%（），細胞內(nèi)顆粒著色為棕黃色. 為描述方便，將染色陰性（-），弱陽性（+），陽性（），強陽性（）分別用0，1，2，3級表示. 統(tǒng)計學(xué)處理：所有數(shù)據(jù)均采用SPSS10.0軟件包處理，根據(jù)資料的性質(zhì)，相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)，等級資料組間比較采用秩和檢驗.預(yù)后分析用生存分析的KaplanMeier法和Logrank檢驗. 2結(jié)果2.1MMP9及IL6

12、在非霍奇金淋巴瘤中的表達MMP9 和IL6在非霍奇金淋巴瘤組織中均有陽性表達，主要表達于腫瘤細胞胞質(zhì)或胞膜，在基質(zhì)細胞和血管內(nèi)皮細胞亦有陽性染色. MMP9在非霍奇金淋巴瘤中表達的強陽性率（2級和3級）為76.5%，陽性率（1，2，3級）則高達92.2%，且在非霍奇金淋巴瘤中不同分型的表達均明顯高于淋巴結(jié)反應(yīng)性增生組（P0.05，表1），同時不同組織學(xué)分型中的表達存在統(tǒng)計學(xué)差異. IL6在非霍奇金淋巴瘤中的強陽性率（2和3級）為70.6%，陽性率（1，2，3級）則高達92.2%，且在非霍奇金淋巴瘤中不同分型的表達均明顯高于淋巴結(jié)反應(yīng)性增生組（P0.05，表1）. 本實驗中IL6在非霍奇金淋巴瘤

13、不同組織學(xué)分型中的表達不存在統(tǒng)計學(xué)差異，而IL6在非霍奇金淋巴瘤的表達與MMP9的表達呈正相關(guān)（r=0.956）. 表1MMP9 和IL6在非霍奇金淋巴瘤中的表達略2.2MMP9及IL6在非霍奇金淋巴瘤中的表達與預(yù)后的關(guān)系MMP9染色分級為0，1，2，3級者5 a生存率依次66.7%，50.0%，35.3%和0%. IL6染色分級為0，1，2，3級者5 a生存率依次為66.7%，44.4%，38.9%，0%. 用Logrank法和Breslow法的檢測結(jié)果一致；MMP9和IL6的染色分級與患者生存率之間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義；同時我們也可直觀的看到染色分級低的生存率曲線高于染色分級較高的

14、一組. 通過生存率曲線分析，MMP9(圖1)和IL6（圖2）的染色分級與患者的生存時間有密切關(guān)系.          3討論本實驗結(jié)果顯示，MMP9在非霍奇金淋巴瘤中表達的強陽性率較高（2，3級）為76.5%，與文獻4報道一致，陽性率（1，2，3級）則高達92.2%，且在非霍奇金淋巴瘤中不同分型的表達均明顯高于淋巴結(jié)反應(yīng)性增生組（P0.05）. 有研究證明在多種惡性腫瘤中呈現(xiàn)MMP9過表達5，通過統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)分析顯示MMP9在非霍奇金淋巴瘤不同組織學(xué)分型中的表達存在顯著差異. 這可能與不同分型的非霍奇金淋巴瘤的生物學(xué)

15、特點的不同及惡性程度的不同有關(guān). 而國內(nèi)學(xué)者在其他腫瘤的研究中也報道過MMP9是一種與腫瘤的分級和侵襲力有關(guān)的指標(biāo)，MMP9在在外周血中的表達水平有一定預(yù)后價值6.圖1圖2略人的IL6基因位于第6號染色體上，其受體屬于紅細胞受體超家族，含有2個內(nèi)在的N糖基化位點和4個半胱氨酸殘基. T細胞、B細胞、單核細胞、成纖維細胞等均能產(chǎn)生IL6，IL6在抗感染，自身免疫疾病及腫瘤免疫治療方面均有重要作用. 本實驗結(jié)果顯示，IL6在非霍奇金淋巴瘤中的強陽性率（2，3級）為70.6%，陽性率（1，2，3級）則高達92.2%，且在非霍奇金淋巴瘤中不同分型的表達均明顯高于淋巴結(jié)反應(yīng)性增生組（P0.05）. 本實

16、驗中IL6在非霍奇金淋巴瘤不同組織學(xué)分型中的表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義，而IL6在非霍奇金淋巴瘤的表達與MMP9呈正相關(guān)（r=0.956），提示IL6可通過刺激MMP9的表達在非霍奇金淋巴瘤的生物學(xué)行為中發(fā)揮作用，此與國外細胞株培養(yǎng)實驗結(jié)果顯示的IL6可刺激B細胞株和T細胞株，使其MMP9的表達產(chǎn)物增高的結(jié)論相一致7.MMP9染色分級為0，1，2，3級者5 a生存率依次為66.7%，50.0%，35.3%和0%. IL6染色分級為0，1，2，3級者5 a生存率依次為66.7%，44.4%，38.9%，0%，用Logrank法和Breslow法的檢測結(jié)果一致，MMP9的染色分級與患者生存率之間的差異有

17、統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.000），表達的量越多，染色越深，生存時間越短，預(yù)后越差7. IL6的染色分級與患者的生存時間也有密切關(guān)系， IL6表達的量越多，染色越深，生存時間越短，預(yù)后越差綜上所述，MMP9及IL6在非霍奇金淋巴瘤中的表達程度與腫瘤的組織學(xué)分型及臨床預(yù)后有關(guān)，聯(lián)合檢測非霍奇金淋巴瘤中的MMP9及IL6表達，不僅有助于進一步認識該腫瘤的生物學(xué)行為及發(fā)生機制，同時也可為非霍奇金淋巴瘤的臨床治療和預(yù)后判斷提供新的思路.  【參考文獻】1 Roebuck MM, Helliwell TR, Chaudhry  IH, et al. Matrix metalloprotei

18、nases expression is related to angiogenesis and Histologic grade in spindle cell soft tissue neoplasms of the extremitiesJ.  Am J Clin Pathol, 2005,123(3):405-414. 2 Polette M,NawrockiRoby B,Gilles C, et al. Tumor invasion and matrix metalloproteinasesJ. Crit Rev Oncol Hematol,2004,49(3):179-18

19、6.3 劉艷波,蔡蓮蓮,王宗敏,等. 白細胞介素6在子宮頸癌組織中的表達及其與血管生成的關(guān)系J. 中華婦產(chǎn)科雜志, 2005,(3): 56-58.4 Hazar B, Polat G, Seyrek E, et al. Prognostic value of matrix metalloproteinases (MMP2 and  MMP9) in Hodgkins  and non Hodgkins   lymphomaJ. Int J Clin Pract, 2004,58(2):139-143.5 Moran A, Iniesta P, GarciaAranda C, et al.