初始污染菌實驗方法驗證

1、初始污染菌試驗方法驗證方案產(chǎn)品名稱：一次性包皮環(huán)切縫合器編制： 日期： 審核： 日期： 批準： 日期： 江西狼和醫(yī)療器械股份限有限公司名目初始污染菌試驗方法驗證方案1概述2驗證目的3職責與驗證申請4驗證依據(jù)5驗證方案6驗證內(nèi)容初始污染菌試驗方法驗證方案1.概述：初始污染菌的數(shù)量可以反映出車間環(huán)境衛(wèi)生的清潔度，與產(chǎn)品滅菌工藝、成品熱原及內(nèi)毒素有直接關(guān)系，故而要對其檢測方法進行驗證，確認其有效性及檢測精確性，從而優(yōu)化產(chǎn)品滅菌工藝及把握產(chǎn)品熱原及內(nèi)毒素，確保產(chǎn)品的平安性。2.目的： 通過試驗驗證檢測方法的適用性及計數(shù)用培育基的適用性。3.職責與驗證申請：3.1質(zhì)量管理部供應檢測項目方案、接收標準、評

2、價等級及相關(guān)試驗。3.2生產(chǎn)技術(shù)部負責按驗證方案生產(chǎn)相關(guān)樣品初始污染菌試驗方法驗證申請表驗證組姓名職務單位黃燕組長質(zhì)量管理部經(jīng)理江西狼和醫(yī)療器械股份有限公司龍章宏組員化驗員蘇俊組員化驗員胡梓鵬組員化驗員批 準經(jīng)爭辯：同意以上成員組成驗證小組，依據(jù)此方案對本公司的產(chǎn)品的初始污染菌試驗方法進行驗證。批準人： 年 月 日4.依據(jù)：中國藥典2015版5.驗證方案：5.1試驗操作人員確認；5.2試驗室試驗設(shè)備及器材的確認；5.3產(chǎn)品取樣及方法確認。6.驗證內(nèi)容：6.1菌種和菌液制備6.1.1 菌種 試驗用菌株的傳代次數(shù)不得超過5 代（從菌種保藏中心獲得的干燥菌種為第0 代），并接受適宜的菌種保藏技術(shù)進行

3、保存，以保證試驗菌株的生物學特性。6.1.2菌液制備接種金色葡萄球菌、銅綠假胞菌、枯草芽孢桿菌的培育物至胰酪大豆胨液體培育基中或胰酪大豆胨瓊脂培育基上，3035培育1824小時；接種白色念珠菌的培育物至沙氏葡萄糖液體培育基中或沙氏葡萄糖瓊脂培育基上，2025培育2-3天，上述培育后的新穎培育物用PH7.0無菌化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌化鈉溶液制成每lml菌數(shù)小于100cfu(菌落形成）的菌懸液。接種黑曲霉的培育物至沙氏葡萄糖瓊脂面培育基上，2025培育57天，加人35 ml 0.05%(ml/ml) 聚山梨酯80的pH7.0無菌化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后

4、，接受適宜的方法吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)，用0.05% (ml/ml)聚山梨醋80的pH7.0無菌化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液制成每lml孢子數(shù)量小于100cfu的孢子懸液。菌懸液若在室溫下放置，應在2小時內(nèi)使用；若保存在28 在24h 內(nèi)使用。黑曲霉孢子懸液存在28，在驗證過的貯存期內(nèi)用。6.2計數(shù)培育基適用性檢查6.2.1需氧菌的計數(shù)分別取1ml的金色葡萄球菌、銅綠假胞菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各菌懸液，接種至胰酪大豆胨液體培育基管或胰酪大豆胨瓊脂培育基平板。金色葡萄球菌、銅綠假胞菌、枯草芽孢桿菌在30-35，培育不超過3天；白色念珠菌、黑曲霉在20-25，培育不超

5、過5天。每一試驗菌株平行制備2 管或2 個平皿。同時，用相應的對比培育基替代被檢培育基進行上述試驗。6.2.2霉菌和酵母菌的計數(shù)分別取1ml的白色念珠菌、黑曲霉各菌懸液，接種至沙氏葡萄糖瓊脂培育基。在20-25，培育不超過5天。每一試驗菌株平行制備2 管或2 個平皿。同時，用相應的對比培育基替代被檢培育基進行上述試驗。6.2.2結(jié)果判定被檢固體培育基上的菌落平均數(shù)與對比培育基上的菌落平均數(shù)的比值應在0.5-2 范圍內(nèi)，且菌落形態(tài)大小應與對比培育基上的菌落全都；被檢液體培育基管與對比培育基管比較，試驗菌應生長良好。6.3計數(shù)方法適用性試驗6.3.1供試液的制備：洗脫液用0.9%的滅菌生理鹽水，檢

6、品液制備在10000級環(huán)境中進行。6.3.2 接種和稀釋按下列要求進行供試液的接種和稀釋,制備微生物回收試驗用供試液。所加菌液的體積應不超過供試液體積的1%。為確認供試品中的微生物能被充分檢出，首先應選擇最低稀釋級的供試液進行計數(shù)方法適用性試驗。（1）試驗組 取上述制備好的供試液，加入試驗菌液，混勻，使每1ml供試液或每張濾膜所濾過的供試液中含菌量不大于100cfu。（2）供試品對比組 取制備好的供試液, 以稀釋液代替菌液同試驗組操作。（3）菌液對比組 取不含中和劑及滅活劑的相應稀釋液替代供試液,按試驗組操作加入試驗菌液并進行微生物回收試驗。若因供試品抗菌活性或溶解性較差的緣由導致無法選擇最低

7、稀釋級的供試液進行方法適用性試驗時，應接受適宜的方法對供試液進行進一步的處理。假如供試品對微生物生長的抑制作用無法以其他方法消退，供試液可經(jīng)過中和、稀釋或薄膜過濾處理后再加入試驗菌懸液進行方法適應性試驗。 6.3.3 抗菌活性的去除或滅活供試液接種后，按下列“微生物回收”規(guī)定的方法進行微生物計數(shù)。若試驗組菌落數(shù)減去供試品對比組菌落數(shù)的值小于菌液對比組菌數(shù)值的50%，可接受下述方法消退供試品的抑菌活性。 增加稀釋液或培育基體積。 加入適宜的中和劑或滅活劑。6.3.4 微生物的回收依據(jù)6.2的計數(shù)培育基所用的試驗菌逐一進行微生物回收試驗，回收試驗接受平皿法和薄膜過濾法。6.3.4.1 平皿法-傾注

8、法取6個直徑90mm 的無菌平皿。2個分別注入照上述“試驗組”制備的供試液1ml；2個分別注入照上述“供試品對比組”制備的供試液1ml；2個分別注入照上述“菌液對比組”制備的供試液1ml。每個平皿注入1520ml 溫度不超過45熔化的胰酪大豆胨瓊脂或沙氏葡萄糖瓊脂培育基，混勻，凝固，倒置培育。6.3.4.2 薄膜過濾法薄膜過濾法所接受的濾膜孔徑應不大于 0.45m,直徑一般為50mm,若接受其他直徑的濾膜,沖洗量應進行相應的調(diào)整。選擇濾膜材質(zhì)時應保證供試品及其溶劑不影響微生物的充分被截留。濾器及濾膜使用前應接受適宜的方法滅菌。使用時,應保證濾膜在過濾前后的完整性。供試液經(jīng)薄膜過濾后,若需要用沖洗液沖洗濾膜,每張濾膜每次沖洗量一般為100ml?？倹_洗量不得超過1000ml,以避開濾膜上的微生物受損傷。取照上述 “試驗組”、“供試品對比組”和“菌液對比組”制備的供試液適量（一般取相當于1g、1ml 或10cm2 的供試品, 若供試品中所含的菌數(shù)較