兔瘟疫苗的研究應(yīng)用現(xiàn)狀.docx

1、兔瘟痿苗的研究應(yīng)用現(xiàn)狀劉付敏.彭遠(yuǎn)義(西南大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院.重慶北暗400715)兔病毒性出血癥(RHD)俗稱“兔瘟”，或稱兔出血癥，是由兔病扇性出血癥病毒(RHDV)引起的兔的一種急性、高度接觸性傳染病，特征為呼吸系統(tǒng)出血、肝壞死、實(shí)質(zhì)臟器水腫、瘀血及出血性變化。本病于1984年在我國江蘇省的江陰縣首次被發(fā)現(xiàn)，隨后迅速蔓延至全國25個(gè)省、市、自治區(qū)。迄今亞洲的朝鮮、印度和黎巴嫩、美洲的墨西If、非洲的喀麥隆和歐洲的奧地利、比利時(shí)、捷克、丹麥、法國、德國、希臘、盧森堡、荷蘭、波蘭、西班牙，瑞典、瑞士及南斯拉夫等國也都有發(fā)生。本病常呈暴發(fā)性流行，發(fā)病率及病死率極高，對(duì)易感兔致病率達(dá)90%,病死率

2、高達(dá)100%,是危害養(yǎng)兔業(yè)的最嚴(yán)重的疾病之一。對(duì)RHDV感染至今尚無4效治療藥物，所能應(yīng)用的治療措施僅限于對(duì)癥治療和支持治療。目前，各國都加大了RHDV疫苗的研究力度，以便能夠?qū)HDV感染進(jìn)行有效的預(yù)防和治療。一、病原特性RHDV屬杯狀病毒科(CaUcivi-ride)兔病毒屬(thegenuslagovius),RHDV為圓形邊緣不很整齊，正二十面體立體對(duì)稱，裸露無囊膜，外徑為2550nm,-般為3234nm,芯幅在徑約20nm。該病毒侵入細(xì)胞后先在細(xì)胞核內(nèi)復(fù)制裝配，然后再向胞質(zhì)及胞外擴(kuò)散。衣殼內(nèi)為約7.5kb單鏈正RNA,具有兩個(gè)基因組片段。含毒病料在-5C條件下可較長時(shí)間不失其毒力，將

3、“免瘟”肝病料保存于保存液中，置一5C冰箱內(nèi)，經(jīng)413d,人工感染家兔仍然發(fā)病死亡，說明“兔瘟”病毒保存413d尚存活。兔瘟病毒具有很強(qiáng)的血球凝集活性，并能被免疫血清的特異性所抑制，因此，這種特性可用于診斷的口的。RHDV是侵害多種組織細(xì)胞的泛嗜性病毒，它主要存在于病兔的肝、腎、血細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中，不見于細(xì)胞核內(nèi)。以病兔的含毒肝臟組織,經(jīng)肯霉素和鏈容素處理后，于厭氣肉湯、血瓊脂和沙氏培養(yǎng)基中培芥，皆無萌生長。培養(yǎng)物注射于健康的成年兔,13d內(nèi)死亡。剖檢所見病理變化與自然病例相同。病毒顆粒對(duì)乙酰、氯仿及低pH值有抗性，1%的機(jī)氧化鈉、2%的甲輕和2%的漂白粉對(duì)本病毒有很好的消毒作用。二、RHDV疫

4、苗由于RHDV較難在家兔以外的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、雞胚、鴨胚以及多種原代細(xì)胞和傳代細(xì)胞系上適應(yīng)培養(yǎng)。而旦目前還未研究清楚兔瘟病毒存在兒個(gè)血清型，毒株間抗原性的差異也直接影響免疫效果oRHDV病毒核酸經(jīng)滅活后失去傳染力，但其核衣光作為主要抗原成分具有良好的抗原性，能使家免在72h開始建立免疫力。因此，用該類苗對(duì)兔進(jìn)行預(yù)防注射和緊急接種，可有效地防治免瘟。(-)兔瘟組織滅活苗1984年5月?lián)P州大學(xué)農(nóng)學(xué)院王永坤等成功研制兔瘟組織天活苗，該疫苗效果可靠、安全，能有效地預(yù)防免瘟的發(fā)生。注射疫苗后，有極少數(shù)兔可出現(xiàn)哲時(shí)性停食或疼痛反應(yīng)，但經(jīng)l2d后即可恢復(fù)。自從王永坤等首先研制成功了兔瘟組織滅活疫苗以后，不少地方相

5、繼就地采集死兔肝臟病料制作疫苗，作為撲滅兔瘟的應(yīng)急措施。(-)兔瘟油乳劑滅活疫苗雖然兔瘟組織滅活疫苗對(duì)該病的預(yù)防發(fā)揮了一定作用，但組織滅活疫苗存在諸如在保存過程中易結(jié)塊、病料組織懸液顆粒較大，易堵塞注射針頭等問題。為此，1997年場州大學(xué)農(nóng)學(xué)院又研制成功r兔瘟油乳削天活疫苗，經(jīng)血凝抑制和攻毒試驗(yàn)結(jié)果表明，在含有相同抗原定制備的疫苗，兔瘟油乳劑滅活疫苗比兔瘟組織滅活苗免疫后血清HI抗體效價(jià)高，而且油乳劑滅活苗在體內(nèi)免疫時(shí)間K。(三)兔瘟蜂膠組織滅活苗根據(jù)芥兔人員的普遍反映，普通組織滅活疫苗免疫時(shí)間短，需要多次注射免疫。兔瘟油乳劑滅活疫苗效果雖然比較理想，在機(jī)體內(nèi)吸收慢，維持時(shí)間於，但可能會(huì)影響肉

6、質(zhì)。蜂膠站一種廣譜生物活性物質(zhì)，對(duì)活細(xì)胞和機(jī)體無毒副作用，具有增強(qiáng)免疫，提高抗體效價(jià)的功能。2003年，寧康健、王慈等用病毒致死兔的肝組織，制成10%的兔瘟組織滅活苗和10%的兔瘟蜂膠組織滅活苗，用常規(guī)血凝抑制試驗(yàn)檢測比較了注射兔瘟組織滅活苗和兔疽蜂膠組織滅活苗后兔體內(nèi)抗體水平的消長情況，結(jié)果表明兔瘋蜂膠組織滅活疫苗吸收快、產(chǎn)生效價(jià)高而持久，明顯優(yōu)于普通組織滅活苗。2002年，針對(duì)兔痕組織滅活苗的缺陷，張冰和孫德明等對(duì)兔痕組織滅活疫苗、白油佐劑滅活疫苗和蜂膠佐劑滅活疫苗進(jìn)行了免疫效果比較，結(jié)果表明組織天活苗中的抗原成分在短時(shí)間內(nèi)即能大髭地被組織吸收，刺激動(dòng)物機(jī)體，因而產(chǎn)生較高抗體水平所需的時(shí)間

7、短，而佐劑滅活疫苗由于佐劑的作用，抗原成分釋放緩慢，產(chǎn)生高水平抗體所需的時(shí)間要長，所以佐劑疫苗產(chǎn)生抗體持續(xù)的時(shí)間長。此外佐劑疫苗不需要特殊的保存條件，室溫卜,存放半年一般不失效、旦免疫注射過程中不會(huì)發(fā)生針頭堵塞而組織滅活疫苗須在4C8C條件下保存，R易疝結(jié)成塊，使注射困難。2002年，侯艷紅、錢碟6等采用超濾濃縮技術(shù)制備純化的雞法氏囊活性肽（分子量IkDa以F,主要成分為法氏囊活性肽），以不同的劑址肌肉注射45日於母兔，同時(shí)頸部皮F接種兔瘟滅活疫苗，觀察法氏囊活性肽對(duì)免瘟疫苗免疫效果的影響。結(jié)果表明：純化的法氏囊活性肽能夠加快兔瘟抗體產(chǎn)生的速度，縮短誘生抗體時(shí)間，提高抗體水平，延長抗體維持時(shí)間

8、。（四）兔瘟H9組織滅活疫苗由于制苗用的易感兔，其來源日益困難，價(jià)格昂貴，使人工發(fā)病家兔制造兔瘟組織滅活疫苗困難重重。由于兔瘟病毒的不同毒株對(duì)家兔致病力的強(qiáng)弱，及凝集人“O”型紅細(xì)胞的作用，有明顯的差異。為提高疫苗的免疫效果和降低生產(chǎn)成本，周學(xué)利、朱傳民等重新篩選毒株研制兔瘟疫苗，發(fā)現(xiàn)兔瘟病毒H9毒株對(duì)家兔有強(qiáng)大的致病力及較高的血凝價(jià)，并獲得了免疫譜廣、致病性強(qiáng)、抗原性好的RHDV-H9毒株，使制苗用易感兔的死亡率由58%提高85%以上，加入佐劑制成了高效、價(jià)廉的兔瘟疫苗。（五）兔瘟聯(lián)苗1. 兔瘟、巴氏桿菌二聯(lián)苗。兔瘟、兔巴氏桿菌病是傳染快、流行廣、發(fā)病急、死亡高、危害性大的家兔毀滅性傳染病。

9、為了控制該病的發(fā)生和流行，降低家兔發(fā)病死亡，保護(hù)養(yǎng)兔業(yè)的健康發(fā)展。四川省井研縣自】991年以來，應(yīng)用自己研制的兔瘟、巴氏桿菌二聯(lián)苗對(duì)該縣家兔進(jìn)行了免疫試駛，在全縣開展田間試驗(yàn)，取得了顯著的經(jīng)濟(jì)、社會(huì)效益。實(shí)踐證明該疫苗不論是預(yù)防免疫，還是緊急免疫，都對(duì)兔瘟和巴氏桿菌病有較好的免疫效果。二聯(lián)苗緊急接種對(duì)健康兔或初發(fā)病的兔免疫效果較好，能獲得堅(jiān)強(qiáng)免疫力，而對(duì)發(fā)病已出現(xiàn)癥狀或典型癥狀的家兔免疫效果較差，而時(shí)還有加速家兔死亡的情況發(fā)生。二聯(lián)苗安全性好,預(yù)防免疫懷孕兔無流產(chǎn)征兆和流產(chǎn),奶兔也未發(fā)現(xiàn)不良反應(yīng)和死亡.商品幼兔在斷奶后重新加免一次，可獲得終身免疫。2. 免瘟、巴氏桿菌病、鮑氏校茵病三聯(lián)滅活苗。

10、免瘟、巴氏桿菌病、魏氏梭函病是由不同的病原微生物引起的兔的三種傳染病。由于這三種病發(fā)病率和致死率較高，對(duì)養(yǎng)兔業(yè)威脅極大。許蘭菊、張書松等用人工感染兔瘟病兔的肝、脾、腎及從患急性巴氏桿萌病和魏氏梭菌性腸炎病兔分離的細(xì)菌制成氮氧化鋁甲醛滅活苗（兔三聯(lián)苗）。在流行兔瘟、巴氏桿菌病、魏氏梭菌病的兔場試用該疫苗免疫家兔，在免疫后7d至8個(gè)月內(nèi)能有效地預(yù)防這幾種傳染病。在兔場每隔4-6個(gè)月用兔三聯(lián)苗進(jìn)行一次免疫接種，井結(jié)合嚴(yán)格消毒等綜合措施，即可有效地防止免瘟、兔巴氏桿菌病及兔魏氏梭菌病的發(fā)生。兔三聯(lián)苗價(jià)格低廉，便于貯存、運(yùn)輸及使用。吳強(qiáng)、劉洪斌等研制了兔瘟、巴氏桿菌病、魏氏梭菌病三聯(lián)濃縮疫苗，該疫苗濃縮

11、后每只家兔每次只需接種1ml,不僅免疫效果未受影響，而且還具有使用方便、副作用小等優(yōu)點(diǎn)。3. 兔盤、巴氏桿菌、魄氏枚菌、波氏桿菌四聯(lián)苗。丁勇于1999年成功研制了兔疽、巴氏桿埔、魏氏梭菌、波氏桿菌四聯(lián)苗，該聯(lián)苗克服了聯(lián)苗混合時(shí)各基礎(chǔ)苗的含敢不足及生產(chǎn)髭低等缺點(diǎn)。同時(shí)安全叮察，免疫性能好，免疫持技期達(dá)半年以上。四聯(lián)苗具有簡化免疫程序，一次性完成商品肉免應(yīng)免疫苗，既省力、省財(cái)，又減少應(yīng)激次數(shù)等優(yōu)點(diǎn)，利于推廣應(yīng)用。三、兔瘟疫苗的使用本病尚無特效藥物治療，預(yù)防接種是防止兔瘟的最佳途徑，但是在家兔生產(chǎn)過程中，盡管家兔已接種了免瘟疫苗，但在規(guī)定的免疫期內(nèi)仍發(fā)生兔瘟或抗體監(jiān)測時(shí)達(dá)不到應(yīng)有的抗體水平，共至右發(fā)

12、生整個(gè)兔群暴:發(fā)兔瘟的情況。（-）導(dǎo)致兔瘟疫苗免疫失敗的主要原因1. 過早或過晚免疫導(dǎo)致兔瘦丸疫失畋。忽視家免個(gè)體的差異，采用同一個(gè)免疫程序來進(jìn)行免疫容易導(dǎo)致免疫失敗。如仔兔出生后體內(nèi)有較高水平的母源抗體，對(duì)有母源抗體保護(hù)的仔兔實(shí)施接種免疫，常被母源抗體所中和，免疫效果不佳。同樣，如果首免時(shí)間過晚，在母源抗體消失后再接種疫苗，則會(huì)出現(xiàn)免疫空白期，造成未免疫時(shí)已感染，錯(cuò)過r免疫的最佳時(shí)間。2. 兔瘟保護(hù)期短.按說明書劑量首免后25d才能產(chǎn)生保護(hù)力，保護(hù)時(shí)間僅為20d,仔兔75日齡后，抗體水平迅速下降，如不及時(shí)二免，抗體效價(jià)很快低于正常值。這就是免疫后仍然發(fā)生兔瘟的-個(gè)重要因素。3. 疫苗保存和使

13、用不當(dāng)。日前市售的多為兔瘟組織滅活苗，是一種均勻的混懸液，應(yīng)當(dāng)?shù)蜏乇４妫４鏈囟仍?5C以上或冷凍都易造成疫苗效價(jià)降低。必須進(jìn)行皮下接種，不可飲水或飼料免疫。多種疫苗同時(shí)接種時(shí)要根據(jù)當(dāng)?shù)匾卟“l(fā)生和流行情況，確定重要和次要，不能在7d內(nèi)將幾種疫苗一起免疫接種，否則會(huì)降低免疫效果，更不能將幾種疫苗混合使用.因?yàn)槊庖呓臃N后，會(huì)產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，機(jī)體發(fā)生一定的機(jī)能變化，有的甚至體溫稍微升高。由于不同的疫苗類型或免疫途徑不科學(xué)、免疫技術(shù)不規(guī)范等因素造成注射部位形成腫塊導(dǎo)致注射的疫苗吸收不良，導(dǎo)致產(chǎn)生的免疫強(qiáng)度不足，遇強(qiáng)毒攻擊則會(huì)發(fā)病.4. 養(yǎng)殖戶防疫衛(wèi)生意識(shí)不強(qiáng)。平時(shí)不注重消毒，免場內(nèi)外環(huán)境衛(wèi)生差，類、尿等

14、排泄物沒有及時(shí)清理，環(huán)境當(dāng)中已經(jīng)存在大缺的強(qiáng)毒株，導(dǎo)致病原菌滋生。如果兔群中感染其他病菌引起組織器官不同程度的病變，也會(huì)降低機(jī)體抵抗力，影響免疫效果。注射器具消毒不徹底，對(duì)疫苗町能造成直接污染，注射過程中沒有做到1兔1針頭，造成疾病傳播。5. 飼左蓉理不如兔瘟免疫接種產(chǎn)生抗體需要足夠的營芥，骨養(yǎng)缺乏和不足會(huì)影響抗體生成的速度和數(shù)量。因此，應(yīng)飼喂全價(jià)飼料，適當(dāng)增加生物學(xué)價(jià)值高的蛋白質(zhì)含景，進(jìn)行科學(xué)飼養(yǎng)管理。在鼠害嚴(yán)煎、應(yīng)激、兔舍內(nèi)氨氣濃度過高時(shí)也同樣會(huì)降低免疫效果。6. 藥物因素。注射疫苗前后-周內(nèi)大削E：使用各種抗生素等都會(huì)影響到疫苗免疫作用的發(fā)揮。某些抗生素、抗球蟲藥、腎上腺皮質(zhì)激素、消奏劑

15、和抗病茬藥物能夠破壞滅活疫苗的抗原性，干擾免疫應(yīng)答,因此,在免疫的前后3d不能使用消毒藥、抗生素、抗球蟲藥和抗病毒藥。免疫接種時(shí)，在飼料中添加雙倍呈的多種維生素，同時(shí)喂給左旋咪唆可有效提高兔群的免疫應(yīng)答。（二）防止免疫失敗的措施I. 制訂合理的允痕程序。要根據(jù)各兔場實(shí)際，制訂合理的免疫程序以及按程序準(zhǔn)時(shí)免疫接種是取得良好免疫效果的基礎(chǔ)。當(dāng)有疾病發(fā)生或體質(zhì)下降時(shí)不能免疫接種。，資料表明.用兔瘟疫苗免疫過的母兔，其所產(chǎn)仔兔的伴源抗體在50日齡內(nèi)的保護(hù)率為100%,5560日齡有75%不能抵御強(qiáng)毒攻擊,70日齡有100%不能抵御病毒攻擊，沒有作兔瘟疫苗免疫的母兔，其仔兔45日齡時(shí)則完全不能抵御強(qiáng)毒攻

16、擊；無論母兔免疫與否其仔免在30日齡內(nèi)均對(duì)兔瘟病誰不敏感。因此，確定兔瘟的免疫程序?yàn)椋何唇?jīng)免疫過的兔群仔免在30日齡應(yīng)用兔瘟疫苗旺行首免，免疫兔群的仔兔在4245齡應(yīng)用兔瘟疫苗進(jìn)行改免。符只兔皮F注射疫苗1ml,180日齡復(fù)免一次，成年兔每4個(gè)月免疫一次，每次注射疫苗2ml。2. 加強(qiáng)科學(xué)何養(yǎng)管理和防疫消毒工作。做到封閉式飼養(yǎng)、定期消毒,注意防K害，杜絕飲水接種免疫，禁止使用過期、夾效或劣質(zhì)疫苗。另外兔瘟疫苗在運(yùn)輸過程中必須保溫（2C8C）,使用過程中應(yīng)注意現(xiàn)配現(xiàn)用，沒有用完的應(yīng)放在冰箱冷藏室或保溫杯內(nèi)。注射器具應(yīng)該嚴(yán)格消毒，盡段做到1兔1針頭.四、展望迄今為止，RHDV滅活疫苗的研究雖然已有

17、一定的進(jìn)展，但該病毒的體外培養(yǎng)仍是難題還沒有找到合適的體外培養(yǎng)細(xì)胞?，F(xiàn)仍用該病死兔的肝臟制滅活苗，因滅活不徹底有導(dǎo)致放毒可能，故有必要在病卷結(jié)構(gòu)和體外易感細(xì)胞上突破，研制基因疫苗。相信，隨若對(duì)該病毒疫苗研究、認(rèn)識(shí)的不斷深入，將給我們預(yù)防RHDV感染帶來福昔。參考文獻(xiàn)（略）農(nóng)業(yè)部新批準(zhǔn)11家獸藥GMP企業(yè)近H,農(nóng)業(yè)部發(fā)布第H71號(hào)公告，批準(zhǔn)北京天牧清源生物技術(shù)有限公司等）1家獸藥生產(chǎn)企業(yè)為獸藥GMP企業(yè)（見表1）,核發(fā)獸藥GMP證書。贛州百靈動(dòng)物藥業(yè)有限公司等5家魯藥生產(chǎn)企業(yè)通過魯藥GMP夏驗(yàn)（見表1）,核發(fā)洋藥GMP證1弓。表1獸藥GMP合格企業(yè)目錄企業(yè)名稱北京天牧清源生物技術(shù)有限公司北京帕爾

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