GB坂崎腸桿菌檢驗(yàn)

1、GB坂崎腸桿菌檢驗(yàn)2022-3-32 Enterobacter sakazakii(ES)Enterobacter sakazakii(ES)2022-3-33內(nèi)內(nèi)容容第一部分：一般特征第一部分：一般特征第二部分：流行病學(xué)特征第二部分：流行病學(xué)特征第三部分：第三部分：ESES的檢驗(yàn)的檢驗(yàn)2022-3-34第一部分：一般特征第一部分：一般特征命名命名培養(yǎng)特征培養(yǎng)特征生化反應(yīng)生化反應(yīng)抵抗力抵抗力增殖能力增殖能力致病性致病性2022-3-35 1980 1980年之前一直被稱為年之前一直被稱為黃色陰溝腸桿菌黃色陰溝腸桿菌。 DNA-DNADNA-DNA雜交雜交 生化反應(yīng)生化反應(yīng) 黃色素黃色素 抗生素

2、敏感性抗生素敏感性 一、命名2022-3-36二、二、培養(yǎng)特征培養(yǎng)特征 G G無(wú)芽孢桿菌，兼性厭氧，在無(wú)芽孢桿菌，兼性厭氧，在6-476-47范范圍內(nèi)均可生長(zhǎng)，適溫圍內(nèi)均可生長(zhǎng)，適溫35-3735-37 營(yíng)養(yǎng)要求不高：營(yíng)養(yǎng)要求不高： VRBGAVRBGA、TSATSA、NANA、MACMAC、EMBEMB、其他、其他與其他常見腸桿菌相似與其他常見腸桿菌相似2022-3-37三、生化反應(yīng)三、生化反應(yīng) 生化反應(yīng)結(jié)果D-山梨醇-產(chǎn)生吐溫80脂酶+細(xì)胞外Dnase+氧化酶試驗(yàn)-黃色菌落 +-葡萄糖苷酶 +8ES及親緣關(guān)系較近的腸桿菌生化反應(yīng)比較試驗(yàn)生化反應(yīng)1阪崎腸桿菌陰溝腸桿菌產(chǎn)氣腸桿菌成團(tuán)腸桿菌日勾

3、維腸桿菌賴氨酸脫羧酶精氨酸雙水解酶鳥氨酸脫羧酶KCN生長(zhǎng)v發(fā)酵:蔗糖()衛(wèi)矛醇()()核糖醇()棉子糖vD-山梨醇v-甲基-葡萄糖甙()D-阿拉伯糖醇()黃色素()注： ：90-100；() ：75-89%； V ：25-74；()：10 -24； ：0-9第三部分第三部分食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)阪崎腸桿菌檢驗(yàn)阪崎腸桿菌檢驗(yàn)2022-3-310主要內(nèi)容主要內(nèi)容一、制訂的主要依據(jù)一、制訂的主要依據(jù)二、二、食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 阪崎腸桿菌檢阪崎腸桿菌檢驗(yàn)驗(yàn)制訂的主要依據(jù)制訂的主要依據(jù) ISO 2006年“乳和乳制品中阪崎腸桿菌的檢測(cè)”（Milk and milk

4、 productsDetection of Enterobacter sakazakii）方法； 美國(guó)FDA 2002年頒布的“嬰兒配方粉中阪崎腸桿菌的分離和計(jì)數(shù)”（Isolation and Enumeration of Enterobacter sakazakii from Dehydrated Powdered Infant Formula）方法； 2004年荷蘭乳及乳制品控制中心對(duì)各種阪崎腸桿菌檢測(cè)方法的比較研究； 雀巢研究中心2005年環(huán)境樣品中阪崎腸桿菌快速檢測(cè)方法； 阪崎腸桿菌快速檢測(cè)培養(yǎng)基DFI研究資料。 SN第一部分：分離與計(jì)數(shù)方法 第二部分：PCR方法 第三部分：熒光PCR

5、方法2022-3-313常見選擇性培養(yǎng)基常見選擇性培養(yǎng)基 DFI (Oxoid, UK)DFI (Oxoid, UK) ESIA (AES, France)ESIA (AES, France) R RF F（R&F LaboratoriesR&F Laboratories，SwitzerlandSwitzerland） OK mediumOK medium 其他：國(guó)內(nèi)阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基、其他：國(guó)內(nèi)阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基、CES (Merck, CES (Merck, Germany)Germany)，NA+ NA+ -MUG-MUG2022-3-314顯色培養(yǎng)基的特點(diǎn)顯色培養(yǎng)基

6、的特點(diǎn) -葡萄糖苷酶活性葡萄糖苷酶活性指示劑：指示劑：5-溴溴-4-氯氯-3-吲哚吲哚- - ，D-D-吡喃葡糖甙（吡喃葡糖甙（X X GlcGlc）4-4-甲基傘形酮甲基傘形酮- - -D-D-葡糖苷（葡糖苷（ -MUG-MUG）1.1.4-4-鄰硝基苯鄰硝基苯- - -D-D-吡喃葡糖甙吡喃葡糖甙 2022-3-3152022-3-316選擇性培養(yǎng)基的選擇選擇性培養(yǎng)基的選擇1 1. . FDAFDA方法使用方法使用VRBGAVRBGA，ISO ISO 方法中使用方法中使用ESIAESIA，本方，本方法中我們選用法中我們選用DFIDFI。和和DFIDFI的基本原理相似，二者都是根據(jù)的基本原理

7、相似，二者都是根據(jù)ESES能產(chǎn)生能產(chǎn)生-葡萄糖苷酶，分解底物葡萄糖苷酶，分解底物XaGlcXaGlc產(chǎn)生有色菌落。產(chǎn)生有色菌落。對(duì)對(duì)ESES的選擇性差，的選擇性差，ESES、陰溝腸桿菌和成團(tuán)腸桿菌等、陰溝腸桿菌和成團(tuán)腸桿菌等多種腸道菌都可以在該平板上生長(zhǎng)并產(chǎn)生粉紫色多種腸道菌都可以在該平板上生長(zhǎng)并產(chǎn)生粉紫色菌落，膽汁酸沉淀形成紫色暈圈。菌落，膽汁酸沉淀形成紫色暈圈。即：不能觀察到即：不能觀察到ESES的特征性菌落。的特征性菌落。2022-3-3顯色培養(yǎng)基的選擇性較好顯色培養(yǎng)基的選擇性較好 DFIDFI對(duì)對(duì)ESES的選擇性較好，的選擇性較好，ESES形成的藍(lán)綠色特征性菌落易形成的藍(lán)綠色特征性菌落

8、易于辨認(rèn)，而且：于辨認(rèn)，而且： 硫化氫指示劑可以區(qū)分硫化氫指示劑可以區(qū)分ESES和產(chǎn)生少量和產(chǎn)生少量-葡萄糖苷酶但葡萄糖苷酶但H H2 2S S陽(yáng)陽(yáng)性菌株（如普通變形桿菌）。性菌株（如普通變形桿菌）。 ESES都可以在都可以在DFIDFI平板上生長(zhǎng)并產(chǎn)生藍(lán)綠色菌落平板上生長(zhǎng)并產(chǎn)生藍(lán)綠色菌落 其他常見菌在其他常見菌在DFIDFI平板的菌落顏色平板的菌落顏色白色菌落：肺炎克雷伯氏菌、陰溝腸桿菌、大腸埃希氏白色菌落：肺炎克雷伯氏菌、陰溝腸桿菌、大腸埃希氏菌、泛菌屬的多種菌等菌、泛菌屬的多種菌等黃色菌落：赫氏埃希氏菌黃色菌落：赫氏埃希氏菌黑褐色、粉色或中心藍(lán)綠菌落：少量菌種黑褐色、粉色或中心藍(lán)綠菌落：

9、少量菌種 ESIA:ESIA:藍(lán)藍(lán)色，色，1-3mm1-3mm172022-3-3選擇性增菌肉湯的選擇選擇性增菌肉湯的選擇 FDAFDA方法選擇方法選擇EEEE肉湯，肉湯，ISOISO方法選擇方法選擇mLST-VmmLST-Vm，即在，即在LSTLST中加入中加入NaclNacl和和VmVm。本標(biāo)準(zhǔn)使用。本標(biāo)準(zhǔn)使用mLST-VmmLST-Vm。 EEEE肉湯適合所有腸道菌群的生長(zhǎng)繁殖，這就可能肉湯適合所有腸道菌群的生長(zhǎng)繁殖，這就可能對(duì)對(duì)ESES的生長(zhǎng)產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用，降低檢出率。的生長(zhǎng)產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用，降低檢出率。 研究證明與其他腸桿菌科細(xì)菌（如沙門氏菌，大研究證明與其他腸桿菌科細(xì)菌（如沙

10、門氏菌，大腸埃希氏菌等）相比，腸埃希氏菌等）相比，ESES具有較高的耐滲透壓能具有較高的耐滲透壓能力。加入的力。加入的NaclNacl在保證在保證ESES良好生長(zhǎng)的同時(shí)，可以良好生長(zhǎng)的同時(shí)，可以有效地抑制上述其他細(xì)菌的生長(zhǎng)。有效地抑制上述其他細(xì)菌的生長(zhǎng)。 VmVm可有效地抑制可有效地抑制G+G+菌的生長(zhǎng)。而較高的生長(zhǎng)溫度菌的生長(zhǎng)。而較高的生長(zhǎng)溫度可以進(jìn)一步抑制其他細(xì)菌的生長(zhǎng)?？梢赃M(jìn)一步抑制其他細(xì)菌的生長(zhǎng)。2022-3-319二、食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)二、食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)阪崎腸桿菌檢驗(yàn)阪崎腸桿菌檢驗(yàn)2022-3-320本標(biāo)準(zhǔn)修改采用本標(biāo)準(zhǔn)修改采用 ISO/TS 22964 （ 1st edit

11、ion 2006-02-01 ）Milk and milk products Detection of Enterobacter sakazakii FDA July 2002; Revised August 2002 Isolation and Enumeration of Enterobacter sakazakii from Dehydrated Powdered Infant Formula 2022-3-321第一法：阪崎腸桿菌的檢驗(yàn)第一法：阪崎腸桿菌的檢驗(yàn)第二法：阪崎腸桿菌的計(jì)數(shù)第二法：阪崎腸桿菌的計(jì)數(shù)2022-3-322第一法第一法 阪崎腸桿菌的檢驗(yàn)阪崎腸桿菌的檢驗(yàn)阪崎腸桿菌檢驗(yàn)

12、程序阪崎腸桿菌檢驗(yàn)程序 報(bào) 告TSA251，48h4h生化鑒定挑取黃色菌落DFI瓊脂361，24 h2h挑取藍(lán)綠色菌落1mL + mLST-Vm 10mL440.5，24 h2h檢樣100 g（mL）+BPW稀釋液 900 mL361，18 h2h前增菌選擇性增菌選擇性分離生 化 鑒 定100 g（ mL ）2022-3-3245.1 5.1 前增菌和增菌前增菌和增菌 左圖：未混合；左圖：未混合； 右圖：混合后。右圖：混合后。加樣入已預(yù)熱到44的BP中2022-3-3255.2 分離分離DFIDFI36361124 h24 h2h2h2022-3-326TSATSA： 25 25 培養(yǎng)后培養(yǎng)后

13、典型典型ESES：黃色：黃色陰性對(duì)照陰性對(duì)照E. coli E. coli ATCC 25922ATCC 25922：白色菌落：白色菌落黃色素黃色素2022-3-3275.3 鑒定（生化反應(yīng)）鑒定（生化反應(yīng)）生化試驗(yàn)特征黃色素產(chǎn)生氧化酶L-賴氨酸脫羧酶L-鳥氨酸脫羧酶（）L-精氨酸雙水解酶檸檬酸水解()發(fā)酵：D-山梨醇（）L-鼠李糖D-蔗糖D-蜜二糖苦杏仁甙注：99%陽(yáng)性；99%陰性；（）90%99%陽(yáng)性；（）90%-99%陰性。2022-3-328商業(yè)生化鑒定系統(tǒng)的應(yīng)用商業(yè)生化鑒定系統(tǒng)的應(yīng)用 推薦使用的推薦使用的ESES生化鑒定方法有很多，主要有生化鑒定方法有很多，主要有API API 20

14、E20E，ID 32EID 32E，Biolog GN2 MicroPlateBiolog GN2 MicroPlate，VITEK VITEK GNI+GNI+等。等。上述方法都比較成熟，穩(wěn)定性較好，已被許多國(guó)家和組上述方法都比較成熟，穩(wěn)定性較好，已被許多國(guó)家和組織的標(biāo)準(zhǔn)采用。織的標(biāo)準(zhǔn)采用。 在腸桿菌的生化鑒定中使用最廣泛的是在腸桿菌的生化鑒定中使用最廣泛的是API 20EAPI 20E和和Vitek GNI+Vitek GNI+。2022-3-329API 20EAPI 20E生化鑒定板典型生化反應(yīng)圖示生化鑒定板典型生化反應(yīng)圖示 API 20E反應(yīng)編碼API 20E結(jié)果評(píng)價(jià)3345 373Excellent identification3305 173Excellent identification3305 363Very good identification3305 373Good iden