苜?？傇碥仗崛∥锟勾笫髣?dòng)脈粥樣硬化和降血脂的作用

1、苜蓿總皂苷提取物抗大鼠動(dòng)脈粥樣硬化和降血脂的作用         11-04-26 13:39:00     編輯：studa20                 作者：邴飛虹 ，但漢雄，程靜，韓俊，李婧，廖一帆   【摘要】  目的研究苜?？傇碥仗崛∥锟勾笫髣?dòng)脈粥樣硬化和降血脂

2、的作用。方法苜?？傇碥仗崛∥锝M高、中、低劑量分別為0.7，0.35，0.18 g·kg-1，陽(yáng)性組：絞股藍(lán)總苷片56 mg·kg-1，模型組：等體積蒸餾水，灌胃同時(shí)給予高脂飼料；對(duì)已造模的大鼠，按體重1.0 ml/100g灌胃，空白組：等體積蒸餾水，灌胃同時(shí)給予普通飼料；1次/d，連續(xù)給藥90 d。檢查血脂相關(guān)指標(biāo)、主動(dòng)脈病變情況、主要臟器組織的情況。結(jié)果苜蓿總皂苷提取物使大鼠的血脂相關(guān)指標(biāo)、主動(dòng)脈病變情況、重要臟器組織病變情況有不同程度的改善。結(jié)論苜?？傇碥仗崛∥镉锌勾笫髣?dòng)脈粥樣硬化和降血脂的作用。 【關(guān)鍵詞】  苜?？傇碥仗崛∥铮?大鼠； 動(dòng)脈粥樣硬化； 降血

3、脂苜蓿為豆科植物紫苜蓿Medicago sativa L.或南苜蓿Medicago hispida Gaertn.的全草，是多年生草本植物。苜?？傇碥仗崛∥锊粌H對(duì)于高脂血癥有治療作用，因其毒性低微，還可作為中老年人長(zhǎng)期使用的保健品。苜蓿提取物在防治血脂代謝紊亂和抗動(dòng)脈粥樣硬化方面有其獨(dú)到之處。本實(shí)驗(yàn)主要進(jìn)行苜蓿總皂苷提取物抗大鼠動(dòng)脈粥樣硬化和降血脂的作用研究，為該新藥的臨床試驗(yàn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1  材料與儀器1.1  受試藥物苜?？傇碥仗崛∥铮?hào)：060828，061010，由廣東省中山市中健藥物研究所有限公司提供。用蒸餾水配制成36%，25%，14%的溶液，分別作為高、中

4、、低劑量組，4 保存?zhèn)溆谩?.2  試劑絞股藍(lán)總苷片，由廣州白云山和記黃浦中藥有限公司提供，批號(hào)：E6A003，規(guī)格：每片含絞股藍(lán)總苷20 mg，藥片粉碎后加蒸餾水配成所需濃度，4保存?zhèn)溆?；丙硫氧嘧啶片，由上海?fù)星朝暉藥業(yè)有限公司提供，批號(hào)：070901，規(guī)格：每片含丙硫氧嘧啶50 mg；維生素D3注射液，由上海通用藥業(yè)股份有限公司提供，批號(hào)：080401，規(guī)格：7.5 mg/ml?？偰懝檀?CHOL)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)測(cè)定試劑盒，高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)測(cè)定試劑盒，批號(hào)分別為011M042、010M050，012L028，012L028，均由上海

5、名典生物工程有限公司提供；TXB2、PG6-ket、ET放免分析藥盒，批號(hào)分別為070820，070820，070820，均由北京北方生物技術(shù)研究所提供；膽固醇，由上海科瑞生物有限公司提供；戊巴比妥鈉，由北京化學(xué)試劑公司提供，批號(hào)：20071019；吐溫80，由天津市標(biāo)準(zhǔn)科技有限公司提供，批號(hào)：070706；丙二醇，由湖北大學(xué)化工廠提供，批號(hào)：930801；蛋黃乳液，稱取鮮雞蛋黃15g加生理鹽水配成75%的乳液；食用豬油，由宜昌雙匯食品有限責(zé)任公司提供。1.3  儀器Spctrumlab 53 power紫外分光光度計(jì)，上海棱光技術(shù)有限公司產(chǎn)品。TB-718E組織自動(dòng)包埋機(jī)，湖北泰維

6、醫(yī)療科技有限公司提供。TC-120S組織自動(dòng)脫水機(jī)，湖北泰維醫(yī)療科技有限公司提供。RM2135石蠟切片機(jī)，德國(guó)Leica公司產(chǎn)品。HM525冰凍切片機(jī)，德國(guó)Microm公司產(chǎn)品。GC-1200放射免疫計(jì)數(shù)器，中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)科技實(shí)業(yè)總公司中佳光電儀器分公司生產(chǎn)。80-2B型臺(tái)式離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠。電子精密天平，奧豪斯公司。恒溫水浴鍋，北京市醫(yī)療設(shè)備廠提供。WH-1微型旋渦混合儀，上海瀘西分析儀器廠。1.4  動(dòng)物Wistar大鼠，SPF級(jí)，體質(zhì)量（200±10）g，性別：雄性，由湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供，許可證號(hào)：SCXK（鄂）2003-0005；動(dòng)物飼料：純系鼠

7、料，由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部提供；動(dòng)物飼養(yǎng)條件：室溫2025，濕度40%60%，籠具及墊料定期清洗更換。2  方法2.1  造模取雄性大鼠50只，每只大鼠右下肢肌肉注射維生素D3 3×105 U/kg，并給予高脂飼料（2%膽固醇，0.5%膽酸鈉，3%豬油，0.2%丙基硫氧嘧啶，94.3%基礎(chǔ)粉末飼料，維生素D3粉劑1.25×106 U/kg）。7 d后行球囊損傷手術(shù)。另取10只作為空白對(duì)照，給予普通飼料。    球囊損傷手術(shù)：動(dòng)物用戊巴比妥鈉（35 mg/kg體重）腹腔麻醉，仰臥固定，皮膚消毒，正中切開頸部皮膚，

8、分離左側(cè)頸總動(dòng)脈，結(jié)扎遠(yuǎn)心端，插入球囊，進(jìn)入約8 cm，球囊內(nèi)注入0.2 ml生理鹽水，向回拉動(dòng)34 cm，放水再進(jìn)入約8 cm，注水、回拉，共3次。拔出球囊，層縫合皮下組織、皮膚。消毒切口皮膚，切口處灑適量注射用青霉素粉劑。術(shù)后連續(xù)7 d給予肌肉注射青霉素，切口處用碘酒消毒。2.2  分組及給藥術(shù)后按體重隨機(jī)分為5組。高劑量組：苜?？傇碥仗崛∥?.7 g/kg；中劑量組：苜?？傇碥仗崛∥?.35 g/kg；低劑量組：苜?？傇碥仗崛∥?.18 g/kg；陽(yáng)性組：絞股藍(lán)總苷片56 mg/kg；模型組：等體積蒸餾水，灌胃同時(shí)給予高脂飼料；另設(shè)空白組：等體積蒸餾水，灌胃同時(shí)給予普通飼料。按

9、體質(zhì)量1.0 ml/100 g灌胃，1次/d，連續(xù)給藥90 d。2.3  取樣及檢測(cè)指標(biāo)末次給藥后，禁食不禁水12 h，斷頭取血，3 000 r/min離心15 min，分離血清。用紫外分光光度計(jì)測(cè)定血清總膽固醇(TCH ，PAP法)，甘油三酯（TG，PAP法）和高密度脂蛋白（HDL-C，PTG-Mg2+ -PAP法）的含量；并計(jì)算低密度脂蛋白（LDL-C）的含量和動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)（AI）。    分離主動(dòng)脈，縱行切開，0.9%生理鹽水沖洗干凈，蘇丹染色，照相，以百分率法算出斑塊面積占動(dòng)脈壁總面積的百分率，按分級(jí)法統(tǒng)計(jì)主動(dòng)脈病變級(jí)別。計(jì)量資料以組間t檢驗(yàn)

10、進(jìn)行統(tǒng)計(jì)比較，等級(jí)資料以秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)比較，百分率以卡方檢驗(yàn)。主動(dòng)脈斑塊分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：0級(jí)-內(nèi)膜表面光華，無奶油色變化，即無斑塊；0.5級(jí)-內(nèi)膜有廣泛的奶油色或乳白色變化，但無凸出于表面的斑塊；1級(jí)-有明顯的奶油色凸起斑塊，面積小于3mm2；2級(jí)-斑塊面積大于3 mm2；3級(jí)-有許多大小不等的斑塊，有的融合成片，大塊的斑塊面積超過3 mm2；4級(jí)-動(dòng)脈內(nèi)膜表面幾乎為全為融合的斑塊所覆蓋。    主動(dòng)脈用10%福爾馬林溶液固定36 h后，梯度乙醇脫水，石蠟包埋，在切片機(jī)上橫斷面制成5 m厚連續(xù)切片。HE染色片隨機(jī)選取10個(gè)視野測(cè)定主動(dòng)脈內(nèi)膜厚度，內(nèi)膜/中膜厚度比值。&

11、#160;   分離心臟，用10%的福爾馬林固定，再將心臟橫切成3塊，每塊冰凍切片至少2片，用蘇丹及蘇木素染色，每個(gè)切片一般都觀察10個(gè)動(dòng)脈斷面并按下列標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)：0級(jí)-動(dòng)脈內(nèi)膜無脂質(zhì)浸潤(rùn)；0.5級(jí)-動(dòng)脈內(nèi)膜有輕度脂質(zhì)浸潤(rùn)；1級(jí)-內(nèi)膜斑塊占血管腔面積的1/4；2級(jí)-內(nèi)膜斑塊占血管腔面積的1/2；3級(jí)-內(nèi)膜斑塊占血管腔面積的1/2以上；4級(jí)-斑塊幾乎堵塞整個(gè)管腔。    分離肝臟、腎臟，10%福爾馬林溶液固定36 h后，梯度乙醇脫水，石蠟包埋，在切片機(jī)上橫斷面制成5 m厚連續(xù)切片，HE染色，鏡檢。3  結(jié)果3.1  苜?？傇碥仗崛∥飳?duì)血脂的影響高、中劑量組使高脂血癥大鼠的血清TCH、TG、LDL-C水平明顯下降，而HDL-C水平明顯上升，AI明顯下降，與模型組比較有顯著性差異（P0.0