沙門氏菌培訓(xùn)資料

1、沙門菌屬沙門菌屬Salmonella簡(jiǎn)介簡(jiǎn)介 沙門氏菌病是公共衛(wèi)生學(xué)上具有重要意義沙門氏菌病是公共衛(wèi)生學(xué)上具有重要意義的人畜共患病之一。的人畜共患病之一。 其病原沙門氏菌屬腸道細(xì)菌科，包括引起其病原沙門氏菌屬腸道細(xì)菌科，包括引起食物中毒，導(dǎo)致胃腸炎、傷寒和副傷寒的細(xì)菌。食物中毒，導(dǎo)致胃腸炎、傷寒和副傷寒的細(xì)菌。 除可感染人外，還可感染很多動(dòng)物包括哺除可感染人外，還可感染很多動(dòng)物包括哺乳類、鳥(niǎo)、爬行類、魚(yú)、兩棲類及昆蟲(chóng)。乳類、鳥(niǎo)、爬行類、魚(yú)、兩棲類及昆蟲(chóng)。特性 沙門氏菌革蘭氏陰性、兩端鈍圓的短桿菌比大腸桿菌細(xì)。25m散在。 無(wú)莢膜和芽孢，都具有周身鞭毛除雞白痢沙門氏菌、雞傷寒沙門氏菌外，能運(yùn)動(dòng)，

2、大多數(shù)具有菌毛，能吸附于宿主細(xì)胞外表或凝集豚鼠紅細(xì)胞。培養(yǎng)特性 A 需氧及兼性厭氧菌。 B 在普通瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，培養(yǎng)24h后，形成中等大小、圓形、外表光滑、無(wú)色半透明、邊緣整齊的菌落，其菌落特征亦與大腸桿菌相似無(wú)糞臭味。 C 鑒別培養(yǎng)基麥康凱、SS、伊紅美藍(lán)：一般無(wú)色菌落。 D 三糖鐵瓊脂斜面：斜面為紅色，底部變黑并產(chǎn)氣。 生化特性1發(fā)酵葡萄糖，麥芽糖，甘露醇和山梨醇產(chǎn)氣。2不發(fā)酵乳糖、蔗糖和側(cè)金盞花醇。3不產(chǎn)吲哚、V-P反響陰性。4不水解尿素和對(duì)苯丙氨酸不脫氨。 傷寒沙門氏菌、雞傷寒沙門氏菌及一局部雞白痢沙門氏菌發(fā)酵糖不產(chǎn)氣，大多數(shù)雞白痢沙門氏菌不發(fā)酵麥芽糖。血清學(xué)特性 沙門氏菌具有

3、復(fù)雜的抗原結(jié)構(gòu)。 一般沙門氏菌具有菌體(O)抗原、鞭毛(H)抗原和外表抗原(Vi莢膜或包膜抗原)三種抗原。傳播途徑傳播途徑 肉的污染肉的污染 肉及其制品的沙門氏菌檢出率美國(guó)為肉及其制品的沙門氏菌檢出率美國(guó)為20%25%、英國(guó)為、英國(guó)為9.9%、日本檢查進(jìn)口家禽、日本檢查進(jìn)口家禽的污染率為的污染率為10.3%，國(guó)內(nèi)肉類沙門氏菌檢出率，國(guó)內(nèi)肉類沙門氏菌檢出率在在1.1%39.5%。 蛋的污染蛋的污染 蛋及其制品沙門氏菌檢出率為蛋及其制品沙門氏菌檢出率為3.9%-43.7%，由于吃蛋引起鼠傷寒病的病例報(bào)告逐漸有增加由于吃蛋引起鼠傷寒病的病例報(bào)告逐漸有增加的趨勢(shì)。的趨勢(shì)。 環(huán)境污染環(huán)境污染 食品在加工

4、、運(yùn)輸、出售過(guò)程中往往被沙食品在加工、運(yùn)輸、出售過(guò)程中往往被沙門氏菌污染。沙門氏菌在糞便、土壤、食品、門氏菌污染。沙門氏菌在糞便、土壤、食品、水中可生存水中可生存5個(gè)月至個(gè)月至2年之久。年之久。 傳播問(wèn)題傳播問(wèn)題 恢復(fù)期患者和無(wú)病癥的帶菌者也是常見(jiàn)的恢復(fù)期患者和無(wú)病癥的帶菌者也是常見(jiàn)的傳染源。傳染源。沙門氏菌檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn) 增菌和選擇性培養(yǎng)增菌和選擇性培養(yǎng)25g樣品225ml BPW36 818h培養(yǎng)1ml BPW增菌液+10ml SCTTB增菌液在42、SC增菌液在36各培養(yǎng)1824小時(shí)1ml BPW增菌液+10ml TTB分別從TTBTTB和SCSC增菌液中取1環(huán)，接種到BS和HE瓊脂上培養(yǎng)BS

5、瓊脂在36培養(yǎng)4048小時(shí)HE瓊脂在36培養(yǎng)1824小時(shí)分別從BS和HE瓊脂上挑選可以菌落進(jìn)行TSI初步生化鑒定可疑菌落判定可疑菌落判定HE瓊脂瓊脂BS瓊脂瓊脂XLD瓊脂瓊脂科瑪嘉顯色瓊脂陰科瑪嘉顯色瓊脂陰性性科瑪嘉顯色瓊脂陽(yáng)科瑪嘉顯色瓊脂陽(yáng)性性生化試驗(yàn)生化試驗(yàn)1、先從BS、HE或XLD或顯色培養(yǎng)基上挑取可疑菌落。2、接種至TSI，先在斜面上劃線，然后再底層穿刺。4、將TSI和NA至于 36，1824h培養(yǎng)3、將接種TSI完畢的接種針不要滅菌，直接在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上劃線。根據(jù)上表中可理解為只有在斜面和底層產(chǎn)堿、不產(chǎn)H2S、不產(chǎn)氣的情況下可不進(jìn)行生化鑒定，直接判定為非沙門氏菌，其余任何情況均需進(jìn)行

6、生化鑒定。TSI鑒定三糖鐵生化試驗(yàn)三糖鐵生化試驗(yàn)底層產(chǎn)H2S底層產(chǎn)酸斜面產(chǎn)堿斜面底層產(chǎn)酸產(chǎn)堿底層產(chǎn)酸斜面產(chǎn)堿底層產(chǎn)H2S產(chǎn)酸產(chǎn)氣產(chǎn)酸產(chǎn)氣產(chǎn)H2S只在只在TSITSI產(chǎn)堿的產(chǎn)堿的情況下可判定情況下可判定無(wú)沙門氏菌，無(wú)沙門氏菌，其余任何情況其余任何情況均需進(jìn)行生化均需進(jìn)行生化鑒定鑒定生化試驗(yàn)生化試驗(yàn)1、準(zhǔn)備一只、準(zhǔn)備一只2ml無(wú)菌生理鹽水試管、酒精燈、接種環(huán)、生化鑒定套裝無(wú)菌生理鹽水試管、酒精燈、接種環(huán)、生化鑒定套裝 。2、從營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上挑取可疑菌落，接種至生理鹽水中，制成個(gè)麥、從營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上挑取可疑菌落，接種至生理鹽水中，制成個(gè)麥?zhǔn)蠞岫取Ｊ蠞岫取?、依次在各個(gè)安瓿、依次在各個(gè)安瓿bu瓶中滴加

7、菌懸液瓶中滴加菌懸液3滴。滴。4、在賴氨酸脫羧酶肉湯及對(duì)照和氰化鉀及對(duì)照中個(gè)滴加無(wú)菌石蠟覆、在賴氨酸脫羧酶肉湯及對(duì)照和氰化鉀及對(duì)照中個(gè)滴加無(wú)菌石蠟覆蓋。蓋。5、在、在36培養(yǎng)培養(yǎng)1824h。菌懸液制備菌懸液制備OROR個(gè)麥?zhǔn)蠞岫鹊膫€(gè)麥?zhǔn)蠞岫鹊木鷳乙壕鷳乙阂来卧诿總€(gè)安瓿依次在每個(gè)安瓿瓶中滴加菌懸液瓶中滴加菌懸液23滴。滴。第一步第一步第二步第二步第三步第三步生化試驗(yàn)準(zhǔn)備生化試驗(yàn)準(zhǔn)備色色氨氨酸酸肉肉湯湯賴賴氨氨酸酸脫脫羧羧酶酶肉肉湯湯氨氨基基酸酸脫脫羧羧酶酶肉肉湯湯尿尿素素酶酶氰氰化化鉀鉀培培養(yǎng)養(yǎng)基基氰氰化化鉀鉀培培養(yǎng)養(yǎng)基基對(duì)對(duì)照照甘甘露露醇醇山山梨梨醇醇半半乳乳糖糖苷苷色氨酸肉色氨酸肉湯經(jīng)湯經(jīng)3

8、6，1824h培培養(yǎng)后滴加養(yǎng)后滴加靛基質(zhì)試靛基質(zhì)試劑，片刻劑，片刻觀察結(jié)果觀察結(jié)果陽(yáng)性為玫陽(yáng)性為玫瑰紅色。瑰紅色。色氨酸脫色氨酸脫羧酶及對(duì)羧酶及對(duì)照和氰化照和氰化鉀及對(duì)照鉀及對(duì)照轉(zhuǎn)種結(jié)束轉(zhuǎn)種結(jié)束后需滴加后需滴加液體石蠟液體石蠟覆蓋試驗(yàn)覆蓋試驗(yàn)管方可進(jìn)管方可進(jìn)行培養(yǎng)。行培養(yǎng)。靛基質(zhì)靛基質(zhì)試驗(yàn)試驗(yàn)+時(shí)補(bǔ)做時(shí)補(bǔ)做甘露醇甘露醇山梨醇山梨醇試驗(yàn)，試驗(yàn)，試驗(yàn)陽(yáng)試驗(yàn)陽(yáng)性后進(jìn)性后進(jìn)行血清行血清學(xué)鑒定學(xué)鑒定TSI-時(shí)，時(shí)，進(jìn)行進(jìn)行ONPG試驗(yàn)，試驗(yàn)，ONPG陰性陰性時(shí)進(jìn)時(shí)進(jìn)行血行血清學(xué)清學(xué)鑒定。鑒定。H2S+、靛基質(zhì)、靛基質(zhì)- 、尿素、尿素-、KCN-、賴氨酸、賴氨酸+后進(jìn)行血清學(xué)鑒定。后進(jìn)行血清學(xué)鑒定。生化試

9、驗(yàn)色氨色氨酸酸吲哚吲哚試驗(yàn)試驗(yàn)陰性陰性符合符合賴氨賴氨酸酸陽(yáng)性陽(yáng)性對(duì)照對(duì)照陰性陰性0NPG陰性陰性尿素尿素酶酶陰性陰性KCN及及對(duì)照對(duì)照陰性陰性甘露甘露醇醇山梨山梨醇醇陽(yáng)性陽(yáng)性符合符合符合符合符合符合符合符合符合符合血清學(xué)鑒定血清學(xué)鑒定沙門氏菌的分類沙門氏菌屬分為兩個(gè)種： 腸道沙門氏菌(種) 腸道亞種、薩拉姆亞種、亞利桑那亞種、雙相亞利桑那沙門氏菌、 豪頓沙門氏菌及因迪卡沙門氏菌 (6個(gè)亞種) 邦戈?duì)柹抽T氏菌(種)沙門氏菌的分類及命名沙門氏菌的分類及命名 -沙門氏菌的分類、命名沙門氏菌的分類、命名沙門氏菌 抗原O抗原抗原 也稱菌體抗原，是細(xì)胞壁的組成成分Vi抗原抗原 是一種特殊的菌體抗原，屬于

10、K抗原群（如傷寒沙門氏菌、丙型副傷寒沙門氏菌和都柏林沙門氏菌都含有Vi抗原）H抗原（即鞭毛抗原）抗原（即鞭毛抗原） H抗原與抗血清的反應(yīng)成絮狀或絨狀。 大部分沙門氏菌H抗原都具有兩相。 第一相被稱為特異性相，第二相為非特異性相。O、H、Vi抗原抗原vi抗原抗原 因與毒力有關(guān)而命名為因與毒力有關(guān)而命名為vi抗原?？乖?。 由聚由聚-n-乙酰乙酰-d-半乳糖胺糖醛酸半乳糖胺糖醛酸組成。組成。 不穩(wěn)定，經(jīng)不穩(wěn)定，經(jīng)60加熱、石碳酸加熱、石碳酸處理或人工傳代培養(yǎng)易破壞或喪失。處理或人工傳代培養(yǎng)易破壞或喪失。 Vi抗原存在于細(xì)菌外表，可阻抗原存在于細(xì)菌外表，可阻止止o抗原與其相應(yīng)抗體的反響?？乖c其相應(yīng)抗

11、體的反響。vi抗原的抗原性弱。當(dāng)體內(nèi)菌存在時(shí)抗原的抗原性弱。當(dāng)體內(nèi)菌存在時(shí)可產(chǎn)生一定量抗體；細(xì)菌被去除后，可產(chǎn)生一定量抗體；細(xì)菌被去除后，抗體也隨之消失?？贵w也隨之消失。 故測(cè)定故測(cè)定vi抗體有助于對(duì)傷寒帶菌抗體有助于對(duì)傷寒帶菌者的檢出。者的檢出。 新從患者標(biāo)本中別離出的傷寒新從患者標(biāo)本中別離出的傷寒桿菌、丙型副傷寒桿菌等有此抗原。桿菌、丙型副傷寒桿菌等有此抗原。O抗原抗原 為脂多糖，性質(zhì)穩(wěn)定。為脂多糖，性質(zhì)穩(wěn)定。 比較耐熱，比較耐熱，100不被破壞，不被破壞，也不易被酒精破壞；也不易被酒精破壞； O抗原以阿拉伯?dāng)?shù)字表示，從抗原以阿拉伯?dāng)?shù)字表示，從1排到排到67，但刪去了，但刪去了9個(gè)抗原，現(xiàn)

12、個(gè)抗原，現(xiàn)在有在有58個(gè)抗原；個(gè)抗原； 凡含有群特異性共同抗原的菌凡含有群特異性共同抗原的菌型歸類為一個(gè)型歸類為一個(gè)O群，以主要抗原群，以主要抗原來(lái)表示，某些次要抗原可以出現(xiàn)來(lái)表示，某些次要抗原可以出現(xiàn)在多個(gè)群中。在多個(gè)群中。- -H H抗原抗原 H H抗原存在于鞭毛之中，為蛋白質(zhì)?？乖嬖谟诒廾?，為蛋白質(zhì)。 由肽鏈中氨基酸的排列順序及空間構(gòu)型決定其特異性。由肽鏈中氨基酸的排列順序及空間構(gòu)型決定其特異性。 不耐熱，經(jīng)加熱和用乙醇及堿處理易變性。不耐熱，經(jīng)加熱和用乙醇及堿處理易變性。 H H抗原常有兩相的變異?？乖Ｓ袃上嗟淖儺?。 第一相為特異相，用小寫英文字母表示，如：第一相為特異相，用小

13、寫英文字母表示，如：a a、b b、I I、e e、h h等。等。 第二相為非特異相，用阿拉伯?dāng)?shù)字表示，如：第二相為非特異相，用阿拉伯?dāng)?shù)字表示，如：1 1、2 2、5 5等。等。 但也有少數(shù)菌含有第一相中的抗原但也有少數(shù)菌含有第一相中的抗原e e、n n、x x等成分。等成分。AF群群對(duì)應(yīng)的對(duì)應(yīng)的O價(jià)抗原價(jià)抗原 沙門氏菌抗原表中符號(hào)意義：沙門氏菌抗原表中符號(hào)意義： _ 指溶原狀態(tài)下指溶原狀態(tài)下O O因子可以并存，和平共處。因子可以并存，和平共處。 指指O O因子不相容，只能有一種。因子不相容，只能有一種。 指指O O或或H H因子有存在或不存在的可能性因子有存在或不存在的可能性。O10、O15

14、、O15，O34價(jià)抗原不相容只存在一種。價(jià)抗原不相容只存在一種。都柏林沙門氏菌存在都柏林沙門氏菌存在或不存在外表或不存在外表Vi抗原?？乖?。西翰普頓沙門氏菌、都柏林沙門氏菌屬于單相菌，單相菌，H抗原只存在第一項(xiàng)?？乖淮嬖诘谝豁?xiàng)。H抗原第二項(xiàng)抗原第二項(xiàng)H1和和H2價(jià)抗原價(jià)抗原存在或不存在存在或不存在O1價(jià)抗原與其他抗原價(jià)抗原與其他抗原和平共處，和平共處，O5、O27價(jià)抗原存在或不存在。價(jià)抗原存在或不存在。沙門氏菌菌型的表示方法 血清型以數(shù)字和字母表示. 例如:查考夫曼-懷特沙門氏菌屬抗原表. 鼠傷寒沙門氏菌: O抗1，4，5，12， 第相H抗原i 第相H抗原( 1,2)。 它的血清型應(yīng)表示為:

15、鼠傷寒沙門氏菌 1，4，5，12：i：1，2沙門氏菌的判定原那么采用血清學(xué)的方法,按照考夫曼-懷特沙門氏菌屬抗原表解判定菌型.考夫曼-懷特沙門氏菌屬抗原表 內(nèi)的O抗原可能存在或不存在。 內(nèi)的H抗原可能是罕見(jiàn)的，正常情況下一般不存在。菌名菌名原名原名O抗原抗原H抗原抗原第第1相相第第2相相基桑加尼沙門氏菌基桑加尼沙門氏菌S. kisangani1,4,5,12a1,2維也納沙門氏菌維也納沙門氏菌S. wien1,4.12,27b1,w埃森沙門氏菌埃森沙門氏菌S. essen4,12g, m-金斯敦沙門氏菌金斯敦沙門氏菌S. kingston1,4,5,12,27g, s, t1,2鼠傷寒沙門氏菌

16、鼠傷寒沙門氏菌S. typhimurium1,4,5,12i1,2印地安納沙門氏菌印地安納沙門氏菌S. indiana1,4,12z1,7沙門氏菌的血清鑒定的方法 用O、H 和Vi因子血清與待檢的菌株作玻片凝聚試驗(yàn)。1. 1.先用先用O O因子血清確定菌株所屬的因子血清確定菌株所屬的 O O群及群及O O抗原的抗原的各種成分。各種成分。2. 2.再用再用H H因子血清檢查其第因子血清檢查其第1 1相和第相和第2 2相的相的H H抗原以抗原以確定血清型。確定血清型。3. 3.必要時(shí)還要用必要時(shí)還要用ViVi血清檢查血清檢查( (目前有目前有3 3種種) )。1. 先用先用AF多價(jià)多價(jià)O血清檢查，

17、確定菌株是否在血清檢查，確定菌株是否在AF六個(gè)六個(gè)O群的范圍內(nèi)。群的范圍內(nèi)。2. 再用代表六個(gè)再用代表六個(gè)O群的群的O因子血清檢查，即因子血清檢查，即O2A、O4B、O7C1、O8C2、O9D、O3，10E、O11F。3. 確定確定O群之后，分別用群之后，分別用HA(a、b、c、d、i、z10、z29HB、HC、HD四種多價(jià)四種多價(jià)H血清檢查。血清檢查。4. 用用3.所確定的多價(jià)所確定的多價(jià)H血清所包括的所有血清所包括的所有H因子血清逐一檢查定為第因子血清逐一檢查定為第1相或第相或第2相相H抗原?？乖?。5. 檢出第檢出第1相相H抗原而未檢出第抗原而未檢出第2相相H抗原，或檢出第抗原，或檢出第2

18、相相H抗原而未檢出第抗原而未檢出第1相相H抗原的，要抗原的，要用位相變異的方法再檢查其另一個(gè)相。單相菌不必作位相變異檢查。用位相變異的方法再檢查其另一個(gè)相。單相菌不必作位相變異檢查。6. 綜合綜合O和和H因子血清以及因子血清以及Vi因子血清的檢查結(jié)果，按照考夫曼因子血清的檢查結(jié)果，按照考夫曼-懷特沙門氏菌屬抗原表解懷特沙門氏菌屬抗原表解判定沙門氏菌的菌型。判定沙門氏菌的菌型。沙門氏菌的血清型鑒定步驟位相變異的解釋 將一個(gè)雙相沙門氏菌的菌株在瓊脂平板上劃線別離，所將一個(gè)雙相沙門氏菌的菌株在瓊脂平板上劃線別離，所得的菌落中，有的有第得的菌落中，有的有第1 1相相H H抗原，有的那么有第抗原，有的那么有第2 2相相H H抗抗原。假設(shè)任意挑取一個(gè)菌落在培養(yǎng)基上屢次傳代，其后原。假設(shè)任意挑取一個(gè)菌落在培養(yǎng)基上屢次傳代，其后代又可出現(xiàn)局部是第代又可出現(xiàn)局部是第1 1相而另一局部是第相而另一局部是第2 2相的菌落。這相的菌落。這種兩個(gè)相的種兩個(gè)相的H H抗原可以交