吞噬細(xì)胞吞噬功能的檢測

1、吞噬細(xì)胞吞噬功能的檢測 一、小吞噬細(xì)胞的吞噬作用 (一) 體內(nèi)法材料 (1) 動物: 豚鼠。 (2) 菌種: 金黃色葡萄球菌菌液。 (3) 無菌注射器及針頭、無菌肉湯、玻片、瑞氏染液。方法 (1) 第1天注射無菌肉湯10 ml 于豚鼠腹腔，隔24 h 同法注射肉湯5 ml。20 min 后，再注射金黃色葡萄球菌菌液Iml 于上述部位。 (2) 注射完畢，每隔20 min 用注射器抽取腹腔液，并做推片，待其自千后，用瑞氏染色法染色，鏡檢時見金黃色葡萄球菌被小吞噬細(xì)胞吞入胞漿時為宜。 (3) 瑞氏染色方法如下: 將瑞氏染液滴加數(shù)滴于涂片上。加入等量的蒸餾水，輕輕混勻，染5 -10 min。用蒸餾水

2、(或自來水) 沖洗。待干或輕輕用吸水紙將涂片吸干，油鏡檢查。 結(jié)果 染色后，可見小吞噬細(xì)胞的核及被吞噬的細(xì)菌呈深紫藍(lán)色，而小吞噬細(xì)胞的胞漿為紫色。(二) 體外法 目的 1.熟悉檢測白細(xì)胞吞噬作用的原理與實(shí)驗(yàn)方法。 2.通過吞噬細(xì)胞的吞噬功能檢測了解機(jī)體的非特異性免疫功能。3.掌握顯微鏡、油浸鏡的使用與保護(hù)方法。原理 中性粒細(xì)胞具有在噬殺菌功能，當(dāng)與顆粒物質(zhì)(如金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌等)混合后，孵育一定時間，顆粒物質(zhì)被中性粒細(xì)胞吞噬。根據(jù)吞噬率和吞噬指數(shù)可反映該細(xì)胞的吞噬功能，但不能反映其殺傷功能。 材料 (1) 3.8% 枸櫞酸鈉。 (2) 碘伏、無菌注射器及針頭、吸管、試管、載玻片、溫

3、箱等。(3)瑞氏染液(4) 葡萄球菌懸液: 取白色葡萄球菌在瓊脂斜面上生長24 h的培養(yǎng)物，用無菌生理鹽水刮洗下菌苔，用PBS洗滌2次，最后用比濁法將菌液調(diào)整至5 x10 7ml 懸液，100加熱15min，置4冰箱備用。 方法(1) 自靜脈采血0.2 m,放于含3.8% 枸櫞酸鈉0.2 ml的小試管中，混勻，防止凝血(或由一人抽血10 ml 抗凝，供全小班使用)。(2) 取葡萄球菌懸液0.2 ml,加于上述血液中混勻。(3) 37 C溫箱孵育30min,每10 min取出振搖1次，再繼續(xù)靜置孵育，于30 min 時取出。(4) 用毛細(xì)管從白細(xì)胞層(即沉淀紅細(xì)胞的表層) 吸取白細(xì)胞1滴，滴在載

4、玻片上，推成薄片，自然干燥。注意: 推制厚薄適宜的血膜片，血膜應(yīng)呈舌狀，頭、體、尾清晰可分; 推制好的血膜應(yīng)在空氣中晃動，以促進(jìn)快干; 天氣寒冷或潮濕時，應(yīng)于37 C溫箱中保溫促干，以免細(xì)胞變形縮小。(5) 瑞氏染液染色可用30 s快速單一染色法: 將染液鋪滿血膜，30 s以后用自來水沖洗。切勿先將染液傾去再沖洗，以免染液中的細(xì)小顆粒附著于玻片上使標(biāo)本觀察不清晰。(6) 干燥后油鏡檢查，尋找白細(xì)胞，計(jì)數(shù)。 注意應(yīng)選擇涂片的體尾交界處染色良好的區(qū)域進(jìn)行計(jì)數(shù)，由血膜邊緣向中央依次上、下呈曲線運(yùn)動，以免重復(fù)計(jì)數(shù)(圖2-2)。 結(jié)果染色正確時，可見細(xì)胞核及被吞噬的細(xì)菌染成紫色，而白細(xì)胞的細(xì)胞漿則染成紅

5、色。計(jì)數(shù)200 個中性粒細(xì)胞，記下吞噬細(xì)菌的細(xì)胞數(shù)，以及每個中性粒細(xì)胞吞入的細(xì)菌數(shù)，分別求出吞噬百分率以及吞噬指數(shù)。其計(jì)算公式為: 200個中性粒細(xì)胞中吞噬細(xì)菌的細(xì)胞數(shù)吞噬率(%)= ×100%200 200個中性粒細(xì)胞吞噬細(xì)菌的總數(shù)吞噬指數(shù)(%)= ×100%200二、大吞噬細(xì)胞的吞噬作用 材料(1)動物: 豚鼠。(2) 10%雞紅細(xì)胞懸液、2% 無菌可溶性淀粉溶液。(3)無菌注射器及針頭、玻片、瑞氏染液。 方法(1) 注射2% 可溶性淀粉液10 m于豚鼠腹腔內(nèi)。(2) 次日重復(fù)腹腔注入2%可溶性淀粉溶液5 ml，1h后再腹腔注人10% 雞紅細(xì)胞懸液3ml。(3) 雞紅細(xì)胞懸液注入后，每隔20mn用空注射器抽取豚鼠腹腔液至1h，并做推片，