膠體金原料工藝指導(dǎo)原則

1、金標(biāo)類檢測試劑主要原材料、生產(chǎn)工藝及質(zhì)量控制注冊技 術(shù)審查指導(dǎo)原則（報批稿）2010-11-09 01:30金標(biāo)類檢測試劑主要原材料、生產(chǎn)工藝及質(zhì)量 控制注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（報批稿）一、前言本指導(dǎo)原則的主要目的是規(guī)范申請人對金標(biāo)類類檢測試劑的主要原材料研究資料、生 產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系研究資料的準(zhǔn)備，并對產(chǎn)品質(zhì)量控制提出指導(dǎo)性技術(shù)要求。本指導(dǎo)原則系對金標(biāo)類檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品特性確定其中的具體 內(nèi)容是否適用，若不適用，需詳細闡述其理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)。本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事 項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的

2、其它方法，也可以采用， 但是需要提供詳細的研究資料和驗證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原 則。本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認知水平下制訂的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的 不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將進行適時的調(diào)整。二、適用范圍本指導(dǎo)原則適用于第三類體外診斷試劑中金標(biāo)類試劑的注冊技術(shù)審查，其他類金標(biāo)試 劑可作參考。三、基本要求（一）基本原則1. 診斷試劑的研制、生產(chǎn)用的各種原料、輔料應(yīng)當(dāng)制定相應(yīng)的質(zhì)量指標(biāo)，并應(yīng)符合有 關(guān)法規(guī)的要求。2. 診斷試劑的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具備相應(yīng)的專業(yè)技術(shù)人員、儀器設(shè)備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境， 獲得醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證；同時，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)按照體外

3、診斷試劑生產(chǎn)實施細則 （試行）的要求建立相應(yīng)的質(zhì)量管理體系，形成文件和記錄，加以實施并保持有效 運行；生產(chǎn)企業(yè)還應(yīng)該通過體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評定標(biāo)準(zhǔn)（試 行）的考核。3. 診斷試劑的研制應(yīng)當(dāng)按照科學(xué)、規(guī)范的原則組織研發(fā)，各反應(yīng)條件的選擇和確定應(yīng) 符合基本的科學(xué)原理。4. 研制生產(chǎn)過程中所用的材料及工藝，應(yīng)充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜。5. 生產(chǎn)和質(zhì)量控制的總體目標(biāo)：保證試劑使用安全、質(zhì)量穩(wěn)定、工藝可控、檢測有 效。（二）原材料質(zhì)量控制1. 主要生物原料與生產(chǎn)的產(chǎn)品質(zhì)量最密切相關(guān)的生物原料包括各種天然抗原、重組抗原、單克隆杭體、 多克隆抗體以及多肽類生物原科。這類原料可用于

4、膠體金標(biāo)記、包被硝酸纖維膜及用 于制備質(zhì)控線的抗原或抗體等。使用前應(yīng)按照工藝要求對這類生物原料進行質(zhì)量檢驗， 以保證其達到規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。主要生物原料若為企業(yè)自己生產(chǎn)，其工藝必須相對穩(wěn) 定；若購買，其供應(yīng)商要求相對固定，不能隨意變更供應(yīng)商，如果主要原料（包括工 藝）或其供應(yīng)商有變更，應(yīng)依據(jù)國家相關(guān)法規(guī)的要求進行變更申請。主要生物原料的常規(guī)檢驗項目一般包括：（1）外觀肉眼觀察，大部分生物原料為澄清均一的液體，不含異物、渾濁或搖不散的沉淀或顆 粒；或者為白色粉末，不含其他顏色的雜質(zhì)；特殊生物原料應(yīng)具備相應(yīng)外觀標(biāo)準(zhǔn)。（2）純度和分子量主要經(jīng) SDS-PAGE 電泳后，利用電泳掃描儀進行分析，也可用其

5、他適宜的方法，如高 效液相法等。根據(jù)所檢測生物原料的分子量選擇適宜的聚丙烯酰胺凝膠濃度進行電泳。 一般每個電泳道加樣量為 5旳；電泳后的凝膠可用考馬斯亮藍染色或銀染法染色。染 色后的凝膠用電泳掃描儀分析原料的純度和分子量，純度應(yīng)達到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，分 子量大小應(yīng)在正確的條帶位置。（3）蛋白濃度蛋白濃度可通過 Lowry 法、 280nm 光吸收法、雙縮脲方法等進行檢測。（4）效價 效價的測定一般根據(jù)蛋白含量測定結(jié)果，通過倍比稀釋法進行。效價應(yīng)達到規(guī)定的要 求。（5）功能性實驗 功能性實驗是指生物原料用于試劑盒實際生產(chǎn)中的情況，一般考查使用該原料的試劑 的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性等，并比較其與上批

6、次原料的相關(guān)性。用于制備質(zhì)控線的 抗原或抗體可采用其他適宜方法進行功能性實驗。2生物輔料生物輔料一般指在生產(chǎn)過程中作為蛋白保護劑用途的一類生物原料，主要包括牛血清 白蛋白等。這些生物原料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)（2000年版）規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求并檢驗合格，達到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后方可用于生 產(chǎn)。建議對牛血清白蛋白作以下檢驗：外觀：應(yīng)為淺黃色、黃色或乳白色凍干粉末，無吸潮，無結(jié)塊，無肉眼可見的其它雜 質(zhì)顆粒。溶解性：將牛血清白蛋白配成 10%溶液，溶解時間在18-26 C時應(yīng)不大于15分鐘， pH值應(yīng)為6.57.1?？偟鞍缀浚河秒p縮脲方法來測定，其標(biāo)準(zhǔn)為大于等于95%?？偟?/p>

7、白中的BSA含量：采用硝酸纖維素膜電泳法，其標(biāo)準(zhǔn)為95%。BSA的凈含量：總蛋白含量乘以總蛋白中的BSA含量，其標(biāo)準(zhǔn)為90%。生物輔料的供應(yīng)商同樣要求相對固定，不得隨意變更供應(yīng)商。3. 化學(xué)原材料化學(xué)原材料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)參照中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)（2000年版）分析純級別進行檢驗。主要的檢測指標(biāo)包括：外觀、一般鹽類檢測、溶液pH值、溶解情況、干燥失重、熾灼殘渣等。主要化學(xué)原材料的供應(yīng)商要求相對固定，不得隨意發(fā)生變更。化學(xué)原材料在購入時， 原材料的生產(chǎn)商必須提供該批次化學(xué)原材料的質(zhì)量保證材料和質(zhì)量檢驗報告，其質(zhì)量 標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)達到生產(chǎn)所需的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。4. 其他物料硝酸纖維素膜、玻璃纖維或聚酯纖維

8、膜及濾紙、玻璃纖維膜等在購入時，其生產(chǎn)商必 須提供該批次材料的質(zhì)量保證材料和質(zhì)量檢驗報告，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)達到生產(chǎn)所需的質(zhì) 量標(biāo)準(zhǔn)。（1）硝酸纖維素膜 硝酸纖維素膜應(yīng)具有厚度、孔徑大小等要求，毛細遷移速度，韌性（切割時膜破損引 起的廢品率）、均一性（厚度偏差范圍、毛細遷移速度偏差范圍）應(yīng)達到規(guī)定的要 求。（2 ）玻璃纖維或聚酯纖維膜及濾紙玻璃纖維或聚酯纖維膜及濾紙應(yīng)具有厚度、毛細遷移速度、重量等要求，均一性（厚 度偏差范圍，毛細遷移速度偏差范圍，重量偏差范圍）應(yīng)達到規(guī)定的要求。（3）玻璃纖維膜適用于全血檢測的金標(biāo)試劑，過濾紅細胞所用玻璃纖維膜或其他材料具有不吸附蛋白 質(zhì)的特點，應(yīng)具有厚度、孔徑大小

9、等要求。（4 ）塑料襯片塑料襯片應(yīng)具有厚度、硬度（切割時一次未能整條切下的百分率）、尺寸（與標(biāo)識吻 合）、粘性（切割時造成玻璃纖維與塑料襯片分離的百分率）等要求。（5）其他粘膠紙、鋁箔袋、說明書、包裝外盒、瓶子和干燥劑等，應(yīng)參照國家食品藥品監(jiān)督管 理局頒布的體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則和醫(yī)療器械說明書、標(biāo)簽和包裝 標(biāo)識管理規(guī)定建立相應(yīng)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。（三）試劑盒的制備本類試劑的生產(chǎn)包括膠體金及膠體金標(biāo)記抗原或抗體的制備，膠體金標(biāo)記的包被，檢 測線及質(zhì)控線的制備，膠體金標(biāo)記物、包被抗原或抗體等濃度確定，各種工作溶液的 配置等步驟，并通過產(chǎn)品的半成品檢驗和成品檢驗兩個質(zhì)控過程來保證其質(zhì)量符合規(guī) 定

10、。1.膠體金標(biāo)記物的制備采用枸櫞酸三鈉還原法或其他方法制備膠體金，膠體金顆粒大小應(yīng)符合規(guī)定，膠體金標(biāo)記物在510 560nm波長處應(yīng)有最大吸收值，置 2 8C保存，應(yīng)在規(guī)定的保存期內(nèi) 使用。采用合適的方法確定膠體金標(biāo)記物、包被抗原或抗體工作濃度，將工作濃度的 膠體金標(biāo)記物吸附于玻璃纖維或聚酯纖維膜上。2. 檢測線及質(zhì)控線的制備 取已確定使用濃度的相關(guān)抗原或抗體，在硝酸纖維素膜上制備檢測線，應(yīng)用同樣方法制備質(zhì)控線，根據(jù)生產(chǎn)工藝在規(guī)定的溫度、濕度條件下干燥，置規(guī)定的濕度（通過驗證方法確定相對濕度要求）條件下存放。檢測線與質(zhì)控線應(yīng)具有間隔距離要求，應(yīng)對所用的金標(biāo)用玻璃纖維及硝酸纖維素膜等進行質(zhì)量檢測

11、，如尺寸、外觀、包裝及吸附 性能等，并記錄批號、數(shù)目、標(biāo)識，不同批號的玻璃纖維及硝酸纖維素膜不能混用。3. 貼膜、切割、裝袋貼膜、切割及裝袋應(yīng)在具有相應(yīng)濕度（通過驗證方法確定相對濕度要求）條件下操作， 切割的膜條應(yīng)有寬度要求。（四）質(zhì)量控制用于半成品及成品質(zhì)量控制的質(zhì)控品包括靈敏度、特異性、精密度等指標(biāo)，如具有國 家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）的產(chǎn)品應(yīng)使用國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）或經(jīng)國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品） 標(biāo)化的企業(yè)參考品進行檢驗。若某類試劑沒有國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則使用企業(yè)參 考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及 質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的

12、同類產(chǎn)品的質(zhì)量。1.半成品質(zhì)量控制（1）半成品抽樣檢驗人員按批號抽取規(guī)定數(shù)量的半成品，作號標(biāo)記，待檢。（2）半成品檢驗對所抽樣的半成品做陰 / 陽性參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度等試劑盒性能方 面的檢測，應(yīng)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。企業(yè)應(yīng)該對每一批試劑的半成品進行穩(wěn)定性研究，并制定相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。穩(wěn)定性試 驗可在在特定溫度或特定條件下完成。2.成品質(zhì)量控制 每一批金標(biāo)試劑報批批量應(yīng)至少為 3000 人份。 一般使用國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）對成 品進行檢驗，并達到相應(yīng)質(zhì)量要求。若該診斷試劑沒有國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則使 用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、 有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的 質(zhì)量。（1）物理檢查應(yīng)進行外觀是否平整，材料附著是否牢固，液體移行速度，膜條寬度等物理檢查，應(yīng) 符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。（2）性能方面的檢測 陰/