硝化細菌的分離、培養(yǎng)和觀察活動課的方案設計

1、硝化細菌的分離、培養(yǎng)和觀察活動課的方案設計1 活動目的硝化細菌是生物界中一類特殊的生產者，能進行硝化作用參與氮素的轉化，在高中生物學教學中占有一定的地位。通過實驗，既可增加學生對硝化細菌的認識，又能培養(yǎng)學生的操作能力和科研能力，激發(fā)學生的學習興趣。2 活動器材恒溫箱、高壓滅菌鍋、天平、量杯、玻棒、大試管、三角瓶（250毫升）、顯微鏡（油鏡）、白瓷板、萘胺試劑、二苯胺試劑、醋酸、磺胺酸，革蘭氏試劑、(NH4)2SO4、NaHPO4、K2HPO4、CaCO3、MnSO4·4H2O、MgSO4·7H2O、NaNO2、NaOH(0.1N)、HCl(0.1N)、濃H2SO4、蒸餾水。

2、3 操作步驟31 配制培養(yǎng)液 注：表內各藥物均以克為單位培養(yǎng)液pH值用0.1NNaOH或0.1NHCl調至7.07.2。萘胺試劑的配制：用天平稱取萘胺5克于100毫升醋酸(5N)中，用玻棒攪拌溶解。二苯胺試劑的配制：用天平稱取0.5克二苯胺溶于100毫升濃H2SO4中，再加入20毫升蒸餾水中攪拌稀釋。32 滅菌 將配制好的培養(yǎng)液分裝在大試管中，每管約15毫升，堵上包有紗布的棉塞，放在高壓滅菌鍋中，15磅30分鐘滅菌備用。33 樣品采集 采用公園下層湖水約100毫升即可。34 接種 用吸管吸取樣品，每管接12毫升。35 培養(yǎng) 置2830恒溫箱中靜置710天。36 結果測定361 NO-2的檢驗：

3、可用-萘胺試劑在瓷盤小孔內各加入1滴試劑，然后加少許試驗液，變紅色的為(+)，未變色(黃色)的為(-)。362 NO-3的檢驗：可用二苯胺試劑(1)先除去培養(yǎng)物中的NO-2：方法是在培養(yǎng)物中加入醋酸58滴，使之酸化，再加入數(shù)?；前匪?，當停止放出氣體時，再加入一?；前匪?，此過程中NO-2轉化為N2而逸出。用-萘胺試劑檢查，如不出現(xiàn)紅色，證明培養(yǎng)物中不含NO-2。(2)檢驗NO3-3的產生：方法是吸取培養(yǎng)物少許于白瓷板凹窩中，滴入二苯胺試劑，如有藍色出現(xiàn)，即證明有NO-3的積累。37 富集培養(yǎng) 將測定為(+)的菌液接入裝有100毫升培養(yǎng)液的250毫升三角瓶中(培養(yǎng)液已滅過菌)，置2830恒溫箱中培養(yǎng)，待生長后測定結果為(+)再接另瓶培養(yǎng)液中進行培養(yǎng)。如此經多次移接，可使培養(yǎng)液的亞硝化細菌和硝化細菌逐步增多。38 觀察 將菌液制成涂片，經革蘭氏染色后，油鏡下可觀察菌體形態(tài)。更多下載請直接訪問【 E課件免費資源