實(shí)驗(yàn)三動(dòng)作電位傳導(dǎo)速度和不應(yīng)期測定

1、浙江大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告課程名稱：生理學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目：實(shí)驗(yàn)三 蛙類坐骨神經(jīng)動(dòng)作電位傳導(dǎo)速度和不應(yīng)期的測定實(shí)驗(yàn)日期：2016年10月 日（周 ）姓名 學(xué)號(hào) 班級(jí)： 第 組，同組者：實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)：紫金港生物實(shí)驗(yàn)中心311目的1、測定蛙類坐骨神經(jīng)的絕對(duì)不應(yīng)期和相對(duì)不應(yīng)期，并了解其測定原理。2、測定蛙類坐骨神經(jīng)興奮的傳導(dǎo)速度并了解其原理。 原理1、神經(jīng)在一次興奮的過程中，其興奮性也發(fā)生一個(gè)周期性的變化，而后才恢復(fù)正常。興奮性的周期變化，依次包括絕對(duì)不應(yīng)期、相對(duì)不應(yīng)期、超常期和低常期4個(gè)時(shí)期。為了測定坐骨神經(jīng)在次興奮后興奮性的周期變化，首先要給神經(jīng)施加一個(gè)條件刺激(S1)引起神經(jīng)興奮，然后再用一個(gè)測試性刺激(S2)

2、，在前一興奮過程的不同時(shí)相給以刺激，用以檢查神經(jīng)的興奮閾值以及所引起的動(dòng)作電位的幅值，以判定神經(jīng)興奮性的變化。當(dāng)刺激間隔時(shí)間長于25 ms時(shí)，S1和S2分別所引起動(dòng)作電位的幅值大小基本相同。隨著S2距離S1逐漸接近，發(fā)現(xiàn)S2所引起的第二個(gè)動(dòng)作電位幅值開始減小時(shí)即為落入相對(duì)不應(yīng)期。再逐漸使S2向S1靠近，第二個(gè)動(dòng)作電位的幅值則繼續(xù)減小。最后可因S2落在第一個(gè)動(dòng)作電位的絕對(duì)不應(yīng)期內(nèi)而完全消失。2、神經(jīng)干受到有效刺激興奮以后，產(chǎn)生的動(dòng)作電位以脈沖的形式按一定的速度向遠(yuǎn)處擴(kuò)布傳導(dǎo)。不同類型的神經(jīng)纖維其傳導(dǎo)興奮的速度是各不相同的?？傮w說來，直徑粗的纖維傳導(dǎo)速度快，直徑相同的纖維有髓纖維比無髓纖維傳導(dǎo)快。

3、蛙類的坐骨神經(jīng)干屬于混合性神經(jīng)，其中包含有粗細(xì)不等的各種纖維，其直徑一般為3-29um，其中直徑最粗的有髓纖維為A類纖維，傳導(dǎo)速度在正常室溫下大約為35-40 m/s。 測定神經(jīng)纖維上興奮的傳導(dǎo)速度(v)時(shí)，在遠(yuǎn)離刺激點(diǎn)的不同距離處分別引導(dǎo)其動(dòng)作電位，兩引導(dǎo)點(diǎn)之間的距離為s，在兩引導(dǎo)點(diǎn)分別引導(dǎo)出的動(dòng)作電位的時(shí)相差為t。再按照下面的公式來計(jì)算其傳導(dǎo)速度：v=s/t。 實(shí)驗(yàn)材料蛙 常用手術(shù)器械 蛙板 任氏液 培養(yǎng)皿 燒杯 神經(jīng)屏蔽盒 Medlab生物信號(hào)采集系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)流程 剝制神經(jīng)干標(biāo)本 調(diào)試儀器設(shè)置實(shí)驗(yàn)參數(shù) 神經(jīng)干動(dòng)作電位傳導(dǎo)速度的測定 神經(jīng)干興奮不應(yīng)期的測定 實(shí)驗(yàn)步驟 一、蛙坐骨神經(jīng)干標(biāo)本制備1

4、毀蛙腦脊髓，去軀干上部及內(nèi)臟和皮膚。沿脊柱正中線至恥骨聯(lián)合中央將標(biāo)本分為兩半，并將其放入盛有任氏液的培養(yǎng)皿中。2游離坐骨神經(jīng)。坐骨神經(jīng)下行至幗窩處分為兩支：內(nèi)側(cè)為脛神經(jīng)，走行表淺；外側(cè)為腓神經(jīng)。沿脛、腓神經(jīng)走向分離至踝部，盡量將神經(jīng)干標(biāo)本剝離長一些，要求上自脊神經(jīng)發(fā)出部位，下沿腓神經(jīng)與脛神經(jīng)一直分離到踝關(guān)節(jié)附近，剪斷側(cè)支。盡量將神經(jīng)干周圍的組織剔除干凈(剝離時(shí)切勿損傷神經(jīng)干)，結(jié)扎坐骨神經(jīng)干的脊柱端及脛、腓神經(jīng)的足端，游離神經(jīng)干。然后將坐骨神經(jīng)干標(biāo)本置于盛有任氏液的培養(yǎng)皿中，穩(wěn)定興奮性5min 二、儀器聯(lián)接和調(diào)試 應(yīng)用Q9三通將刺激輸出分成兩路，一路用于刺激標(biāo)本，一路輸入 4通道。打開Medl

5、ab生物信號(hào)采集系統(tǒng)軟件，選擇通道1和通道2作為記錄信號(hào)的通道，通道3用于刺激信號(hào)的監(jiān)視通道。用高阻抗導(dǎo)線將通道輸入口與神經(jīng)屏蔽盒的引導(dǎo)電極相連，用刺激導(dǎo)線將Medlab的刺激信號(hào)輸出口與神經(jīng)屏蔽盒的刺激電極相連。將神經(jīng)屏蔽盒內(nèi)所有電極用浸有任氏液的棉球擦凈。用鑷子夾住已制備好的神經(jīng)標(biāo)本的一端,將其放置于電極上（脊椎端位于刺激電極方向），用濾紙片吸去標(biāo)本上過多的任氏液。三、不應(yīng)期測定 1測定參數(shù)采樣參數(shù)刺激器參數(shù)顯示方式示波器刺激模式自動(dòng)間隔調(diào)節(jié)采樣間隔20s主周期1s通道通道1通道2波寬0.1msDC/ACACDC幅度頂強(qiáng)度放大器放大器1放大器4首間隔20ms處理名稱神經(jīng)干AP刺激標(biāo)記間隔增

6、量-0.1ms放大倍數(shù)200-10005-50截止間隔0.2ms時(shí)間常數(shù)0.2s直流延時(shí)5-10ms2坐骨神經(jīng)絕對(duì)不應(yīng)期的測定：用“自動(dòng)間隔調(diào)節(jié)”方式刺激標(biāo)本。用鼠標(biāo)點(diǎn)擊“開始”“刺激”，最初可見到相距20 ms（首間隔）的兩個(gè)動(dòng)作電位圖形，而且兩個(gè)圖形的幅值是同樣大小的。此后每刺激一次，第二個(gè)刺激即按照“間隔”所設(shè)定的時(shí)間向第一個(gè)刺激靠近一次，從而使第二個(gè)動(dòng)作電位圖形向第一個(gè)動(dòng)作電位相應(yīng)靠近。當(dāng)發(fā)現(xiàn)第二個(gè)動(dòng)作電位的圖形幅值剛開始比第一個(gè)減小時(shí)，說明第二個(gè)刺激落入到第一次興奮后的相對(duì)不應(yīng)期。第二個(gè)刺激越是靠近第一個(gè)刺激，其動(dòng)作電位的幅值就越小。當(dāng)?shù)诙€(gè)動(dòng)作電位完全消失時(shí)，表明第二個(gè)刺激落入到第

7、一次興奮后的絕對(duì)不應(yīng)期。3重復(fù)以上實(shí)驗(yàn)，在相對(duì)不應(yīng)期內(nèi)增大測試刺激的強(qiáng)度時(shí)，縮小的第二個(gè)動(dòng)作電位幅度可接近第一個(gè)的水平。但如果是在絕對(duì)不應(yīng)期內(nèi)，雖然增大刺激強(qiáng)度，卻不能引起神經(jīng)的第二次興奮。四、動(dòng)作電位的傳導(dǎo)速度測定 1測定參數(shù)采樣參數(shù)刺激器參數(shù)顯示方式記憶示波刺激模式主周期刺激采樣間隔20s主周期1s通道通道1通道2通道3波寬0.1ms放大器放大器1放大器2放大器4幅度大于閾強(qiáng)度DC/ACACACDC間隔10ms處理名稱神經(jīng)干APAP傳導(dǎo)速度刺激標(biāo)記脈沖數(shù)1放大倍數(shù)200-1000200-10005-100延時(shí)5-10ms時(shí)間常數(shù)0.2s0.2s直流周期數(shù)連續(xù)2用主周期刺激刺激神經(jīng)干。實(shí)時(shí)調(diào)

8、節(jié)刺激器的延遲，使動(dòng)作電位波形正好出現(xiàn)在顯示屏的適中位置。3傳導(dǎo)速度測定 測出通道1、通道2采樣窗之間的時(shí)間差：以刺激偽跡到第一個(gè)AP的時(shí)間為t1以刺激偽跡到第二個(gè)AP的時(shí)間為t2，t=t2-t1；兩對(duì)引導(dǎo)電極之間的距離為2cm。V = s/t注意事項(xiàng) 1、 免污染、壓擠、損傷和用力牽拉神經(jīng)，不可用金屬器械觸碰神經(jīng)干。2、 在手術(shù)操作過程中，應(yīng)給神經(jīng)干滴上任氏液，防止表面干燥，以免影響標(biāo)本的興奮性。3、 將神經(jīng)干搭在引導(dǎo)電極上時(shí)，應(yīng)拉直神經(jīng)干。4、 盡量減小動(dòng)作電位的刺激偽跡，以便確定動(dòng)作電位離開基線的起始點(diǎn)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果1. 不應(yīng)期的測定（附圖及結(jié)果）（只要附上剛好出現(xiàn)相對(duì)不應(yīng)期和剛好出現(xiàn)絕對(duì)不應(yīng)期