茶薪菇總氮含量的測(cè)定研究

1、茶薪菇總氮含量的測(cè)定研究                                        作者：嚴(yán)志強(qiáng) 熊耀康 吳巧鳳 【摘要】  目的測(cè)定茶薪菇中總氮的含量及比較凱氏定氮法與分光光度法

2、在茶薪菇總氮含量測(cè)定的優(yōu)越。方法采用凱氏定氮法與分光光度法。結(jié)果兩種方法測(cè)得茶薪菇總氮含量基本相同，為30.70mg/g。兩種方法無(wú)顯著性差異（P>0.1）。結(jié)論分光光度法法具有操作簡(jiǎn)便，快速，準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，可以用于測(cè)定總氮的含量。 【關(guān)鍵詞】  茶薪菇；總氮；凱氏定氮法；分光光度法；含量測(cè)定Abstract：ObjectiveTo measure the nitrogen content in Agrocybe cylindracea R.Maire，compare the advantages of Kai's Nitrogentesting method and S

3、pectrophotometric method.MethodTake Kai's Nitrogentesting method and Spectrophotometric method.ResultThe two methods were almost the same in the measurement of nitrogen，i.e.30.70mg/g，which had no marked difference by t test.ConclusionSpectrophotometric method is simple and convenient for operati

4、on，quickly and correctly，and can be used for measurement of total nitrogen.Key words：Agrocybe cylindracea R.Maire；total nitrogen；Kai's Nitrogentesting method；Spectrophotometric method；content measurement    茶薪菇（Agrocybe Cylindracea （Dc.ex Fr.） R.Maire）又名茶樹菇、楊樹菇、柳松茸。屬擔(dān)子菌綱，傘菌目，糞銹傘科，

5、田蘑屬。民間稱之為“神菇”，是一種新開發(fā)的野生真菌。該菇味道鮮美，脆嫩爽口，營(yíng)養(yǎng)豐富。據(jù)報(bào)道茶薪菇中含有豐富的氨基酸和礦物質(zhì)元素，特別含有人體需要的17中氨基酸，其中賴氨酸含量高達(dá)1.75%，經(jīng)常使用能增強(qiáng)記憶，具有健脾、利尿、祛濕、止瀉等功效。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)它能提高機(jī)體免疫能力，抗衰老，降低膽固醇、防癌、抗癌的特殊功能，是一種不可多得的食藥兼用珍稀菌類1。目前對(duì)茶薪菇的研究主要集中在多糖的研究，李寧寧等2以脈沖式電流直接刺激離體腓腸肌作為疲勞模型，探討了茶薪菇多糖對(duì)改善疲勞狀態(tài)下肌力減退的作用，傅明輝等3茶薪菇子實(shí)體多糖的抗氧化性進(jìn)行了研究，李肇獎(jiǎng)等4通過正交試驗(yàn)等方法研究了茶薪菇菌絲體多糖提取

6、方法，而對(duì)其總氮含量的測(cè)定尚無(wú)報(bào)道。為了探討其營(yíng)養(yǎng)成分，本文采用凱氏定氮法5和分光光度法6對(duì)其總氮的含量進(jìn)行了測(cè)定，并對(duì)兩種方法進(jìn)行了初步的探討。1  材料1.1  藥材  茶薪菇產(chǎn)自浙江慶元縣并由浙江中醫(yī)藥大學(xué)熊耀康教授鑒定為糞銹傘科茶薪菇（Agrocybe Cylindracea （Dc.ex Fr.）R.Maire）.1.2  試劑  消化液（30%H2O2:H2SO4=4:1）；萘氏試劑（堿性的碘化汞鉀：按照2005版中國(guó)藥典配制）；聚乙烯醇液（0.1g/L），混合指示液（1份的0.1甲基紅乙醇溶液與5份的0.1溴甲酚綠溶液臨用時(shí)混合）

7、。其它試劑均為分析純。1.3  儀器  全自動(dòng)回流消化儀（重慶南岸玻璃儀器廠）、772型可見分光光度計(jì)（普惠上海分析儀器有限公司）、凱氏定氮儀。2  實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果2.1  凱氏定氮法2.1.1  鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備  精確移取36.5%的濃鹽酸2.5ml于500ml的容量瓶中，加水稀釋，定溶后用基準(zhǔn)硼砂標(biāo)定即得濃度為0.06151mol·L-1標(biāo)準(zhǔn)溶液。2.1.2  供試品液的制備  精密稱取0.5g茶薪菇樣品加入到全自動(dòng)回流消化儀中，再加入0.2gCuSO4，3.0gK2SO4和10ml濃硫酸，放置電

8、爐上加熱，至液體變成透明澄清后繼續(xù)加熱30min，冷卻后將液體定溶至100ml容量瓶中，作為供試品溶液。2.1.3  總氮的測(cè)定  取10ml供試品液加入凱氏定氮儀的蒸餾瓶中，按藥典法5蒸餾，蒸出液用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至溶液由藍(lán)綠色變?yōu)榛易仙?，記錄鹽酸所用的體積，算出總氮的含量。并用空白試驗(yàn)校正。結(jié)果見表1。表1  總氮含量測(cè)定結(jié)果（略）2.2  分光光度法2.2.1  標(biāo)準(zhǔn)品液的制備：精密稱取0.7630gNH4Cl，加入至250ml容量瓶中，用蒸餾水溶解，定溶。即得含氮濃度為79.94mg·L1標(biāo)準(zhǔn)品溶液。2.2.2  供

9、試品液的制備：精密稱取0.3g茶薪菇樣品加入到全自動(dòng)回流消化儀中，再加5ml濃硫酸，加熱至全部變黑后，加消化液8.0ml，加熱回流消化至無(wú)色透明，再繼續(xù)加熱2min以除去氧化劑。冷卻后用蒸餾水定容到50ml容量瓶中，即得。平行做5份。2.2.3  標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作  取7個(gè)25ml的容量瓶，各加標(biāo)準(zhǔn)品液0.00，0.30，0.60，0.90，1.20，1.50，1.80ml，加聚乙烯醇液20ml，加奈氏試劑1.00ml，再用聚乙烯醇液定容。同行試劑空白，在460nm處測(cè)定吸光度，得吸光度A與濃度C（g）的回歸方程。A0.0047C-0.0115，r=0.9995，表明在0.0

10、0143.89g濃度范圍內(nèi)，吸光度與濃度呈線性關(guān)系。結(jié)果見表2。嚴(yán)志強(qiáng)，等:  茶薪菇總氮含量的測(cè)定研究                             表2  吸光度測(cè)定結(jié)果（略）2.2.4  樣品的含量測(cè)定：精密吸取5份供試品液0.75ml入25ml容量瓶中，加聚乙烯醇液20m

11、l，按“2.2”項(xiàng)下操作，測(cè)定吸光度，并計(jì)算樣品中總氮含量，結(jié)果見表3。表3  總氮含量的測(cè)定結(jié)果（略）2.2.5  穩(wěn)定性試驗(yàn)：用新鮮配制的標(biāo)準(zhǔn)NH4Cl溶液，取一定量加入25ml的容量瓶中，加聚乙烯醇液20ml，按“2.2”項(xiàng)下操作，在06h內(nèi)測(cè)定其吸光度，結(jié)果表明在4h內(nèi)吸光度穩(wěn)定。見表4。表4  穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果（略）2.2.6  加樣回收試驗(yàn)：精密吸取0.30ml已知濃度的供試品液（5份）入25ml容量瓶，各加入23.98g標(biāo)準(zhǔn)品溶液，其余操作按“2.2”項(xiàng)下方法進(jìn)行，測(cè)定吸光度，并按回收率（%）=測(cè)得值/（樣品量+加入量）×100%，

12、計(jì)算回收率。結(jié)果見表5。表5  加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（略）3  討論3.1  實(shí)驗(yàn)分別采用凱氏定氮法與分光光度法測(cè)定茶薪菇中總氮含量，由表1和表3可知兩種方法所測(cè)得總氮含量基本相同。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)t檢驗(yàn)法處理，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明兩種測(cè)定方法無(wú)顯著性差，P>0.1。3.2  目前國(guó)內(nèi)測(cè)定食品與中藥中的總氮多用凱氏定氮法，該方法以其測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定，準(zhǔn)確，被國(guó)內(nèi)外廣泛采用7，但從快速和方便的要求來(lái)衡量，此法操作繁瑣，消耗時(shí)間長(zhǎng)，一般為45h，另試劑消耗量大，并消化時(shí)排放的SO2對(duì)人體健康造成直接危害，而且費(fèi)時(shí)，費(fèi)電，費(fèi)水8。3.3  本實(shí)驗(yàn)采用了分光光度法測(cè)定總

13、氮含量，使用全自動(dòng)回流消化裝置，可以將消化時(shí)排放的SO2吸收掉，消除環(huán)境污染；以過氧化氫濃硫酸為消化液，使消化的速度大大的提升，節(jié)省時(shí)間。并取代了蒸餾滴定步驟，既節(jié)約了時(shí)間和水電，又克服了凱氏定氮法操作過程繁瑣，儀器安裝復(fù)雜、試劑消耗量大等缺點(diǎn)。且具有操作簡(jiǎn)便，快速，準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，用萘氏試劑顯色，并加入聚乙烯醇液試劑可以穩(wěn)定萘氏試劑與氨形成的膠狀結(jié)合物，使測(cè)定液透明，顯色穩(wěn)定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明其方法穩(wěn)定性可達(dá)4h，其平均回收率為98.44。3.4  由本實(shí)驗(yàn)可知，浙江慶元生產(chǎn)的茶薪菇總氮含量較高，折算成粗蛋白含量為19.31%，具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，值得進(jìn)一步開發(fā)和研究。【參考文獻(xiàn)】  1 顏麗君，劉國(guó)剛.北方茶薪菇栽培技術(shù)J.中國(guó)林副特產(chǎn)，2001，（2）:118.2 李寧寧.茶薪菇多糖延緩離體骨骼肌疲勞的研究J.濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，27（1）:79.3 傅明輝.薪菇子實(shí)體多糖的分離純化和抗氧化活性的測(cè)定J.生物技術(shù)，2004，11（5）:321323.4 李肇獎(jiǎng).茶薪菇茵絲體多鏞捉取方法的研究J.中國(guó)食品添加劑，2004（5）：14.5 國(guó)家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)藥典S