甾體激素類藥物分析

1、滄州醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校滄州醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校藥學(xué)系藥學(xué)系吳爽吳爽甾體激素類藥物分析基本母核基本母核環(huán)戊烷駢多氫菲環(huán)戊烷駢多氫菲甾體激素類藥物分析23451016789121114131716151918ABCDC20C21依據(jù)總碳原子數(shù)、依據(jù)總碳原子數(shù)、A環(huán)及環(huán)及17位取代基的特點，將甾位取代基的特點，將甾體激素類藥物分為：體激素類藥物分為： 腎上腺皮質(zhì)激素腎上腺皮質(zhì)激素 雄性激素雄性激素 蛋白同化激素蛋白同化激素 性激素性激素 孕激素孕激素 雌激素雌激素各種甾體激素結(jié)構(gòu)上的差異主要在于其取代基的各種甾體激素結(jié)構(gòu)上的差異主要在于其取代基的種類種類、位置位置和和數(shù)目數(shù)目，雙鍵雙鍵的位置和數(shù)目的位置和

2、數(shù)目以及以及C C1010上上有無角甲基等。有無角甲基等。 甾體激素類藥物分析一、腎上腺皮質(zhì)激素類藥物分析一、腎上腺皮質(zhì)激素類藥物分析 （1 1）具有）具有2121個碳原子個碳原子（2 2）A A環(huán)具有環(huán)具有4 4-3-3-酮基的酮基的，-不飽和羰基結(jié)構(gòu)不飽和羰基結(jié)構(gòu)（3 3）C C1717具有具有-醇酮基并多數(shù)有醇酮基并多數(shù)有-羥基羥基（4 4）C C1010、C C1313具有角甲基；具有角甲基；C C1111具有羥基或酮基具有羥基或酮基 環(huán)上雙鍵的表示方法：環(huán)上雙鍵的表示方法： 用用“ ”表示表示 ,雙鍵的位置寫在雙鍵的位置寫在 的右上的右上角。角。 雙鍵位置雙鍵位置454 14251,

3、4 565105 5(10) （一）性（一）性 質(zhì)質(zhì)1與強酸呈色與強酸呈色2酮基的呈色反應(yīng)酮基的呈色反應(yīng)：含有：含有C3和和C20位酮基的甾體激素，位酮基的甾體激素，能與羰基試劑肼發(fā)生呈色反應(yīng)，產(chǎn)生有色物質(zhì)腙。能與羰基試劑肼發(fā)生呈色反應(yīng)，產(chǎn)生有色物質(zhì)腙。 常用常用的試劑：的試劑：2,4二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯肼。肼。 3C17-醇酮基的反應(yīng)醇酮基的反應(yīng) C17位上具有位上具有-醇酮基（醇酮基（-CO-CH2OH）的甾體激）的甾體激素，具還原性，可與多種氧化劑反應(yīng)。素，具還原性，可與多種氧化劑反應(yīng)。 （一）性（一）性 質(zhì)質(zhì)3 C17-醇酮基的反應(yīng)醇酮基的反應(yīng) （1）與

4、四氮唑鹽發(fā)生呈色）與四氮唑鹽發(fā)生呈色反應(yīng)，產(chǎn)物的顏色隨所用試劑條件反應(yīng)，產(chǎn)物的顏色隨所用試劑條件不同而定，多為紅色或藍色。不同而定，多為紅色或藍色。 原理：醇羥基可以被氧化為醛、或醇酮基發(fā)生斷裂。而氧化原理：醇羥基可以被氧化為醛、或醇酮基發(fā)生斷裂。而氧化劑四氮唑鹽被還原而顯色。劑四氮唑鹽被還原而顯色。 （2）堿性酒石酸銅堿性酒石酸銅（菲林試液）（菲林試液）反應(yīng)反應(yīng) ：Cu2O橙紅色）橙紅色） （3）與氨制硝酸銀與氨制硝酸銀（多倫試液）（多倫試液）反應(yīng)反應(yīng) ：Ag（黑色）（黑色）4UV特性特性- 4-3-酮基為共軛體系酮基為共軛體系。（二）實例分析（二）實例分析醋酸地塞米松的質(zhì)量分析醋酸地塞米松

5、的質(zhì)量分析 【性狀性狀】熔點：熔點：223223233233，熔融同時分解；，熔融同時分解；比旋度：比旋度：+82+82+88+88；240nm240nm處吸收系數(shù)處吸收系數(shù)343343371371。 （二）實例分析（二）實例分析醋酸地塞米松的質(zhì)量分析醋酸地塞米松的質(zhì)量分析 解析：有機氟的呈色反應(yīng)解析：有機氟的呈色反應(yīng) ：含氟的甾體含氟的甾體激素藥物激素藥物 氧瓶燃燒氧瓶燃燒茜素氟藍茜素氟藍顯藍紫色顯藍紫色F硝酸亞鈰硝酸亞鈰（二）實例分析（二）實例分析醋酸地塞米松醋酸地塞米松的質(zhì)量分析的質(zhì)量分析 【檢查檢查】1、有關(guān)物質(zhì)：、有關(guān)物質(zhì)：HPLC法法2、干燥失重、干燥失重3、硒：取本品、硒：取本品

6、0.1g，依法檢查（附錄，依法檢查（附錄 D，硒檢查法）應(yīng)符合，硒檢查法）應(yīng)符合規(guī)定（規(guī)定（0.005%）。）。解析：本品在生產(chǎn)過程中使用二氧化硒脫氫，硒對人體有害，解析：本品在生產(chǎn)過程中使用二氧化硒脫氫，硒對人體有害，需對其殘留進行限量檢查。需對其殘留進行限量檢查。醋酸地塞米松醋酸地塞米松氧瓶燃燒氧瓶燃燒Se6+鹽酸羥胺鹽酸羥胺Se4+pH2.02 2，3-二氨基二氨基萘試液萘試液 4，5-苯并苯硒二唑苯并苯硒二唑 環(huán)己烷環(huán)己烷 max378nm（二）實例分析（二）實例分析醋酸地塞米松醋酸地塞米松的質(zhì)量分析的質(zhì)量分析 【含量測定含量測定】1、HPLC法（外標法）法（外標法）原料原料2、UV法

7、法潑尼松龍片、氫化可的松片等潑尼松龍片、氫化可的松片等例如，潑尼松龍片含量測定方法：取本品例如，潑尼松龍片含量測定方法：取本品20片，精密稱定，研細，片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于潑尼松龍精密稱取適量（約相當于潑尼松龍20mg），置），置100ml量瓶中，量瓶中，加乙醇約加乙醇約75ml，振搖，振搖30分鐘使溶解，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，分鐘使溶解，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置另一，置另一100ml量瓶中，用乙醇稀釋量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，照紫外至刻度，搖勻，照紫外-可見分光光度法，在可見分光光度法，在243nm的波長處測的波長

8、處測定吸光度，按定吸光度，按C21H28O5的吸收系數(shù)（的吸收系數(shù)（E）為）為415計算，即得。計算，即得。貯液器貯液器輸液泵輸液泵梯度裝置梯度裝置進樣裝置進樣裝置分離柱分離柱控溫裝置控溫裝置檢測器檢測器（二）實例分析（二）實例分析醋酸地塞米松的質(zhì)量分析醋酸地塞米松的質(zhì)量分析 （四）含量測定（四）含量測定3、四氮唑比色法原理：、四氮唑比色法原理：4、異煙肼比色法原理：、異煙肼比色法原理：四氮唑鹽四氮唑鹽 OH-有 色 的 甲有 色 的 甲臢臢比色比色17-醇酮基（具還原醇酮基（具還原性）性）H+異煙肼異煙肼縮合縮合黃色異煙腙，比色黃色異煙腙，比色 酮基酮基二、雄性激素及蛋白同化激素二、雄性激素

9、及蛋白同化激素 （一）典型藥物的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)（一）典型藥物的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)二、雄性激素及蛋白同化激素二、雄性激素及蛋白同化激素 性性 質(zhì)質(zhì)1、與強酸呈色：與濃硫酸呈色。、與強酸呈色：與濃硫酸呈色。2、酮基的呈色反應(yīng)：、酮基的呈色反應(yīng)：3位羰基，與羰基試劑顯位羰基，與羰基試劑顯色。色。3、活潑次甲基反應(yīng)：與亞硝基鐵氰化鈉、間、活潑次甲基反應(yīng)：與亞硝基鐵氰化鈉、間二硝基苯、芳醛反應(yīng)呈色。二硝基苯、芳醛反應(yīng)呈色。4、UV特性：特性：4-3-酮結(jié)構(gòu)酮結(jié)構(gòu)二、雄性激素及蛋白同化激素二、雄性激素及蛋白同化激素 （二）實例分析（二）實例分析甲睪酮的質(zhì)量分析甲睪酮的質(zhì)量分析【性狀性狀】熔點：熔點：163167；比旋

10、度：；比旋度：+79+85【鑒別鑒別】二、雄性激素及蛋白同化激素二、雄性激素及蛋白同化激素 甲睪酮甲睪酮的質(zhì)量分析的質(zhì)量分析【檢查檢查】1、有關(guān)物質(zhì)：、有關(guān)物質(zhì)：HPLC法法P142：問題：問題雜質(zhì)（單個雜質(zhì)、總雜質(zhì)）限量？雜質(zhì)（單個雜質(zhì)、總雜質(zhì)）限量？2、干燥失重、干燥失重【含量測定含量測定】 HPLC法法-外標法外標法三、孕激素三、孕激素（一）結(jié)構(gòu)與性質(zhì)（一）結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 三、孕激素三、孕激素性性 質(zhì)質(zhì)1、旋光性。、旋光性。2、酮基的呈色反應(yīng)：、酮基的呈色反應(yīng)：4-3-酮基、酮基、C20酮基，與羰基試劑顯酮基，與羰基試劑顯色。色。3、17位甲酮基的呈色反應(yīng)位甲酮基的呈色反應(yīng)黃體酮的專屬鑒別黃

11、體酮的專屬鑒別4、UV特性特性黃體酮的黃體酮的17位甲酮基位甲酮基亞硝基鐵氰化鈉亞硝基鐵氰化鈉藍紫色藍紫色（二）實例分析（二）實例分析黃體酮的質(zhì)量分析黃體酮的質(zhì)量分析 【性狀性狀】熔點：熔點：128131；比旋度：；比旋度：+186+198【鑒別鑒別】 三、孕激素三、孕激素 三、孕激素三、孕激素黃體酮的質(zhì)量分析黃體酮的質(zhì)量分析 【檢查檢查】 有關(guān)物質(zhì)有關(guān)物質(zhì)HPLC法法【含量測定含量測定】 HPLC法法外標法外標法 四、雌激素四、雌激素（一一）結(jié)構(gòu)與性質(zhì)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)性性 質(zhì)質(zhì)1、旋光性。、旋光性。2、與強酸呈色、與強酸呈色3、酚羥基的反應(yīng)：與重氮苯磺酸偶合生成紅色偶氮化合物。、酚羥基的反應(yīng)：與重

12、氮苯磺酸偶合生成紅色偶氮化合物。4、乙炔基的反應(yīng)：末端炔基與硝酸銀反應(yīng)生成白色乙炔銀鹽沉、乙炔基的反應(yīng)：末端炔基與硝酸銀反應(yīng)生成白色乙炔銀鹽沉淀淀5、三硝基苯酚的顯色反應(yīng)：炔諾酮在堿性條件下與三硝基苯酚、三硝基苯酚的顯色反應(yīng)：炔諾酮在堿性條件下與三硝基苯酚生成紅色化合物。生成紅色化合物。6、UV特性：母核含有苯環(huán)特性：母核含有苯環(huán) 四、雌激素四、雌激素 四、雌激素四、雌激素（二）實例分析（二）實例分析雌二醇的質(zhì)量分析雌二醇的質(zhì)量分析 【性狀性狀】熔點：熔點：175180；比旋度：；比旋度：+76+83【鑒別鑒別】 四、四、 雌激素雌激素二、實例分析二、實例分析雌二醇的質(zhì)量分析雌二醇的質(zhì)量分析

13、【檢查檢查】 有關(guān)物質(zhì)有關(guān)物質(zhì)HPLC法法 水分：不得超過水分：不得超過3.5%?！竞繙y定含量測定】 HPLC法法外標法外標法甾體激素甾體激素碳原子碳原子數(shù)數(shù)A環(huán)環(huán)17位取代基位取代基腎上腺皮質(zhì)腎上腺皮質(zhì)激素激素21 4-3-酮酮 -醇酮基醇酮基雄性激素雄性激素19 4-3-酮酮 -OH -CH3孕激素孕激素21 4-3-酮酮甲酮基甲酮基雌激素雌激素18苯環(huán)苯環(huán)C3-酚酚OH -OH -CCH小結(jié)：甾體激素結(jié)構(gòu)特征小結(jié)：甾體激素結(jié)構(gòu)特征課后練習(xí)課后練習(xí)黃體酮的靈敏、專屬的鑒別的鑒別為黃體酮的靈敏、專屬的鑒別的鑒別為 甲酮基的呈色反應(yīng)甲酮基的呈色反應(yīng) B B有機氟的呈色反應(yīng)有機氟的呈色反應(yīng) C CC17-C17-醇酮基的還原性醇酮基的還原性 D D酮基的呈色反應(yīng)酮基的呈色反應(yīng)2 2中國藥典（中國藥典（20102010年版）收載的甾體激素類原料藥物大多采用年版）收載的甾體激素類原料藥物大多采用的鑒別方法為的鑒別方法為 HPLC BHPLC BTLC CTLC CIR DIR DUVUV3 3取某一甾體約取某一甾體約2mg2mg，置潔凈的試管中，加乙醇，置潔凈的試管中，加乙醇2ml2ml，加氨