課件九發(fā)酵液的預(yù)處理

1、模塊三、酶的分離純化模塊三、酶的分離純化酶制劑生產(chǎn)技術(shù)酶制劑生產(chǎn)技術(shù)生物化工學(xué)院生物化工學(xué)院 楊芳楊芳引入引入 微生物經(jīng)過(guò)好氣性發(fā)酵和厭氧發(fā)酵培養(yǎng)后，菌體會(huì)微生物經(jīng)過(guò)好氣性發(fā)酵和厭氧發(fā)酵培養(yǎng)后，菌體會(huì)大量繁殖，并合成和積累了相當(dāng)濃度的代謝產(chǎn)物，這大量繁殖，并合成和積累了相當(dāng)濃度的代謝產(chǎn)物，這時(shí)便終止發(fā)酵，進(jìn)入分離加工過(guò)程。時(shí)便終止發(fā)酵，進(jìn)入分離加工過(guò)程。 不管是胞內(nèi)產(chǎn)物還是胞外代謝產(chǎn)物，在分離純化目的不管是胞內(nèi)產(chǎn)物還是胞外代謝產(chǎn)物，在分離純化目的產(chǎn)物時(shí)，首先都要通過(guò)發(fā)酵液的預(yù)處理。將固相、液相產(chǎn)物時(shí)，首先都要通過(guò)發(fā)酵液的預(yù)處理。將固相、液相分離后，才能采用各種物理、化學(xué)、生物的方法進(jìn)行產(chǎn)分離后

2、，才能采用各種物理、化學(xué)、生物的方法進(jìn)行產(chǎn)物的進(jìn)一步分離純化。物的進(jìn)一步分離純化。學(xué)習(xí)情境九學(xué)習(xí)情境九 發(fā)酵液的預(yù)處理發(fā)酵液的預(yù)處理工作任務(wù)（一）酶的分離純化概述工作任務(wù)（一）酶的分離純化概述工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)處理工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)處理 酶得分離和純化是酶生產(chǎn)的下游酶得分離和純化是酶生產(chǎn)的下游工程，是將酶從細(xì)胞或培養(yǎng)基中取工程，是將酶從細(xì)胞或培養(yǎng)基中取出與雜質(zhì)分離開，而獲得符合使用出與雜質(zhì)分離開，而獲得符合使用要求的有一定純度的酶產(chǎn)品的過(guò)程。要求的有一定純度的酶產(chǎn)品的過(guò)程。分離純化分離純化（separation and purificationseparation and puri

3、fication）工作任務(wù)（一）酶的分離純化概述工作任務(wù)（一）酶的分離純化概述濃縮的發(fā)酵液濃縮的發(fā)酵液防止酶變性失效防止酶變性失效1、低溫操作、低溫操作2、避免過(guò)酸過(guò)堿、避免過(guò)酸過(guò)堿:確定合適的緩沖容量的緩沖溶液確定合適的緩沖容量的緩沖溶液 3、避免重金屬、有機(jī)溶劑、微生物污染、蛋白水解酶等、避免重金屬、有機(jī)溶劑、微生物污染、蛋白水解酶等破壞分解酶破壞分解酶選擇有效的純化方法選擇有效的純化方法 酶與其底物和抑制劑具有高親和性，因此可使用各種酶與其底物和抑制劑具有高親和性，因此可使用各種親和分離法；而且，當(dāng)這些物質(zhì)存在時(shí)，酶的理化性質(zhì)和親和分離法；而且，當(dāng)這些物質(zhì)存在時(shí)，酶的理化性質(zhì)和穩(wěn)定性往往

4、會(huì)發(fā)生一些有利的變化，這樣又?jǐn)U大了純化方穩(wěn)定性往往會(huì)發(fā)生一些有利的變化，這樣又?jǐn)U大了純化方法與純化條件的選擇范圍。法與純化條件的選擇范圍。酶活性測(cè)定貫穿純化過(guò)程的始終酶活性測(cè)定貫穿純化過(guò)程的始終 酶活性測(cè)定貫穿純化過(guò)程的始終。通過(guò)檢測(cè)酶活性可酶活性測(cè)定貫穿純化過(guò)程的始終。通過(guò)檢測(cè)酶活性可以跟蹤酶的來(lái)龍去脈，為酶的抽提、純化、以及選擇制劑以跟蹤酶的來(lái)龍去脈，為酶的抽提、純化、以及選擇制劑過(guò)程中的正確方法條件提供直接依據(jù)。過(guò)程中的正確方法條件提供直接依據(jù)。酶酶的的分分離離純純化化注注意意的的問(wèn)問(wèn)題題為什么？為什么？何溫度適何溫度適宜？宜？工作任務(wù)（一）酶的分離純化概述工作任務(wù)（一）酶的分離純化概述

5、酶酶的的分分離離純純化化過(guò)過(guò)程程預(yù)處理預(yù)處理（pretreatmentpretreatment）：）：包括固液分離和細(xì)胞破碎（分包括固液分離和細(xì)胞破碎（分離胞內(nèi)產(chǎn)物）等離胞內(nèi)產(chǎn)物）等初步純化初步純化（rough rough fractionafractionationtion）（提?。撼ヅc目）（提?。撼ヅc目的產(chǎn)物性質(zhì)差異很大的雜質(zhì)。的產(chǎn)物性質(zhì)差異很大的雜質(zhì)。高度純化高度純化（fine fractionatfine fractionationion）（精制）：除去與產(chǎn)物）（精制）：除去與產(chǎn)物性質(zhì)相似的雜質(zhì)。性質(zhì)相似的雜質(zhì)。濃縮與干燥濃縮與干燥（concentrationconcentra

6、tion and desiccation and desiccation）（成品加）（成品加工）工）: :使酶與溶劑分離的過(guò)程使酶與溶劑分離的過(guò)程離心分離，離心分離，過(guò)濾分離，過(guò)濾分離，沉淀分離，沉淀分離，層析分離，層析分離，電泳分離，電泳分離，萃取分離，萃取分離，結(jié)晶分離結(jié)晶分離等等工作任務(wù)（一）酶的分離純化概述工作任務(wù)（一）酶的分離純化概述發(fā)酵液預(yù)處理發(fā)酵液預(yù)處理 是指采用凝集、絮凝、加熱、稀釋法等技是指采用凝集、絮凝、加熱、稀釋法等技術(shù)來(lái)加速固相、液相分離。術(shù)來(lái)加速固相、液相分離。 過(guò)濾和離心是其最基本的單元操作。過(guò)濾和離心是其最基本的單元操作。 發(fā)酵產(chǎn)物在發(fā)酵液中的濃度較低，并與大量可

7、發(fā)酵產(chǎn)物在發(fā)酵液中的濃度較低，并與大量可溶的和混懸的雜質(zhì)混雜在一起。溶的和混懸的雜質(zhì)混雜在一起。 發(fā)酵液黏度大，過(guò)濾性能差，所以在過(guò)濾前必發(fā)酵液黏度大，過(guò)濾性能差，所以在過(guò)濾前必須進(jìn)行預(yù)處理。須進(jìn)行預(yù)處理。工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)處理工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)處理1 1 產(chǎn)物濃度低，產(chǎn)物濃度低，有的甚至在有的甚至在1%1%以下以下2 2 發(fā)酵液中的懸浮固形物主要是菌體和蛋白的膠狀物，發(fā)酵液中的懸浮固形物主要是菌體和蛋白的膠狀物，粘度大，不易過(guò)濾，增加了后續(xù)的難度粘度大，不易過(guò)濾，增加了后續(xù)的難度表面張力大表面張力大3 3 性質(zhì)不穩(wěn)定：性質(zhì)不穩(wěn)定：發(fā)酵液中含有少量的代謝副產(chǎn)物，其發(fā)酵液中含有少量的

8、代謝副產(chǎn)物，其結(jié)構(gòu)、理化特性與目標(biāo)物極為相似，會(huì)對(duì)后續(xù)操作有結(jié)構(gòu)、理化特性與目標(biāo)物極為相似，會(huì)對(duì)后續(xù)操作有影響。影響。發(fā)酵液的基本特性工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)處理工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)處理預(yù)處理的目的1 改變發(fā)酵液的物理性質(zhì)，促進(jìn)從懸浮液中分改變發(fā)酵液的物理性質(zhì)，促進(jìn)從懸浮液中分離固形物的速度，提高固液分離器的效率；離固形物的速度，提高固液分離器的效率；2 盡可能使產(chǎn)物轉(zhuǎn)入便于后處理的一相中（多盡可能使產(chǎn)物轉(zhuǎn)入便于后處理的一相中（多數(shù)是液相）；數(shù)是液相）；3 去除發(fā)酵液中的部分雜質(zhì)，以利于后續(xù)各步去除發(fā)酵液中的部分雜質(zhì)，以利于后續(xù)各步操作。操作。工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)處理工作任務(wù)（二）發(fā)酵

9、液的預(yù)處理發(fā)酵液預(yù)處理的要求發(fā)酵液預(yù)處理的要求1 1、菌體分離、菌體分離 發(fā)酵液中除發(fā)酵產(chǎn)物外，還含有大量的發(fā)酵液中除發(fā)酵產(chǎn)物外，還含有大量的菌體，為方便提取和精制，首先要將菌體菌體，為方便提取和精制，首先要將菌體與發(fā)酵液分離。與發(fā)酵液分離。 為保證離心和過(guò)濾順利進(jìn)行，要正確為保證離心和過(guò)濾順利進(jìn)行，要正確控制發(fā)酵終點(diǎn)。否則對(duì)目標(biāo)物的回收均控制發(fā)酵終點(diǎn)。否則對(duì)目標(biāo)物的回收均不利。不利。工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)處理工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)處理工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)處理工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)處理發(fā)酵液預(yù)處理的要求發(fā)酵液預(yù)處理的要求2 2、固體懸浮物的去除、固體懸浮物的去除 通過(guò)過(guò)濾處理，將發(fā)酵

10、液中相當(dāng)數(shù)量的通過(guò)過(guò)濾處理，將發(fā)酵液中相當(dāng)數(shù)量的固體懸浮雜質(zhì)去除，獲得透光度合格的澄固體懸浮雜質(zhì)去除，獲得透光度合格的澄清處理液。清處理液。3 3、蛋白質(zhì)的去除、蛋白質(zhì)的去除 發(fā)酵液中去除菌體和固體懸浮物后，一些發(fā)酵液中去除菌體和固體懸浮物后，一些可溶性蛋白質(zhì)仍留在濾液中，需設(shè)法去除?？扇苄缘鞍踪|(zhì)仍留在濾液中，需設(shè)法去除。 除去蛋白質(zhì)的濾液要保證在一定的除去蛋白質(zhì)的濾液要保證在一定的pH pH 范范圍內(nèi)不發(fā)生混濁，否則影響溶媒提取和離子圍內(nèi)不發(fā)生混濁，否則影響溶媒提取和離子交換提取。交換提取。 發(fā)酵液預(yù)處理的方法發(fā)酵液預(yù)處理的方法 加熱加熱 調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)pH值值 凝聚和絮凝凝聚和絮凝 使用惰性助濾

11、劑使用惰性助濾劑 高價(jià)態(tài)無(wú)機(jī)離子去除的方法高價(jià)態(tài)無(wú)機(jī)離子去除的方法 可溶性雜蛋白的去除法可溶性雜蛋白的去除法工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)處理工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)處理 前提：熱穩(wěn)定性高的發(fā)酵液。前提：熱穩(wěn)定性高的發(fā)酵液。 方式：最簡(jiǎn)單和廉價(jià)的預(yù)處理方法。將發(fā)酵方式：最簡(jiǎn)單和廉價(jià)的預(yù)處理方法。將發(fā)酵液加熱至所需溫度并保持一定時(shí)間。液加熱至所需溫度并保持一定時(shí)間。 效果：降低發(fā)酵液黏度，加速聚集作用以除效果：降低發(fā)酵液黏度，加速聚集作用以除去熱變性雜蛋白，破壞凝膠狀膠體結(jié)構(gòu)，增去熱變性雜蛋白，破壞凝膠狀膠體結(jié)構(gòu)，增加濾餅孔隙率，減少發(fā)酵液體積，達(dá)到固液加濾餅孔隙率，減少發(fā)酵液體積，達(dá)到固液分離的目的

12、。分離的目的。工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)處理工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)處理加加熱熱法法調(diào)調(diào)節(jié)節(jié)pH值值例：去除四環(huán)素中鈣、鎂離子，四環(huán)素能與鈣、例：去除四環(huán)素中鈣、鎂離子，四環(huán)素能與鈣、鎂形成不溶解的化合物，沉積在菌絲體內(nèi)，用草鎂形成不溶解的化合物，沉積在菌絲體內(nèi)，用草酸酸化后，能將其轉(zhuǎn)入水相。酸酸化后，能將其轉(zhuǎn)入水相。pHpH值直接影響發(fā)酵液中某些物質(zhì)的電離度和電值直接影響發(fā)酵液中某些物質(zhì)的電離度和電荷性質(zhì)，適當(dāng)調(diào)節(jié)荷性質(zhì)，適當(dāng)調(diào)節(jié)pHpH值可改善其過(guò)濾特性。此值可改善其過(guò)濾特性。此法是發(fā)酵工業(yè)中發(fā)酵液預(yù)處理較常用的方法之法是發(fā)酵工業(yè)中發(fā)酵液預(yù)處理較常用的方法之一。一。 例：利用酸堿性來(lái)調(diào)整例：

13、利用酸堿性來(lái)調(diào)整pHpH值使蛋白質(zhì)等兩性物質(zhì)值使蛋白質(zhì)等兩性物質(zhì)達(dá)到等電點(diǎn)得以除去。又如過(guò)濾中，發(fā)酵液中的達(dá)到等電點(diǎn)得以除去。又如過(guò)濾中，發(fā)酵液中的大分子物質(zhì)易與膜發(fā)生吸附，通過(guò)調(diào)整大分子物質(zhì)易與膜發(fā)生吸附，通過(guò)調(diào)整pHpH值改變值改變易吸附分子的電荷性質(zhì)，即可減少堵塞和污染。易吸附分子的電荷性質(zhì)，即可減少堵塞和污染。 工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)處理工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)處理凝凝集集和和絮絮凝凝 這兩項(xiàng)技術(shù)能有效地改變細(xì)胞、菌體和這兩項(xiàng)技術(shù)能有效地改變細(xì)胞、菌體和蛋白質(zhì)等膠體粒子的分散狀態(tài)、使之聚集，蛋白質(zhì)等膠體粒子的分散狀態(tài)、使之聚集，增大體積，利于過(guò)濾，常用于菌體細(xì)小且粘增大體積，利于過(guò)濾

14、，常用于菌體細(xì)小且粘度大的發(fā)酵液預(yù)處理中。度大的發(fā)酵液預(yù)處理中。工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)處理工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)處理 凝集凝集是指在投加的化學(xué)物質(zhì)作用下，發(fā)酵液中是指在投加的化學(xué)物質(zhì)作用下，發(fā)酵液中的膠體脫穩(wěn)并使粒子相互凝集成為的膠體脫穩(wěn)并使粒子相互凝集成為1mm大小塊大小塊狀絮凝體的過(guò)程。狀絮凝體的過(guò)程。凝集劑的作用凝集劑的作用：粒子表面電荷的簡(jiǎn)單中和；消：粒子表面電荷的簡(jiǎn)單中和；消除粒子表面穩(wěn)定的雙電荷層；通過(guò)氫鍵或其它除粒子表面穩(wěn)定的雙電荷層；通過(guò)氫鍵或其它復(fù)雜的形式與粒子結(jié)合。最終使膠體粒子的排復(fù)雜的形式與粒子結(jié)合。最終使膠體粒子的排斥電位降低而發(fā)生聚沉。斥電位降低而發(fā)生聚沉。 凝

15、凝集集和和絮絮凝凝工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)處理工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)處理凝凝聚聚過(guò)過(guò)程程凝凝集集和和絮絮凝凝工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)處理工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)處理 絮凝絮凝 指某些高分子絮凝劑能在懸浮粒子之間產(chǎn)生橋指某些高分子絮凝劑能在懸浮粒子之間產(chǎn)生橋梁作用，使膠粒形成梁作用，使膠粒形成10mm大小絮凝團(tuán)的過(guò)程。絮凝團(tuán)的過(guò)程。 絮凝的作用絮凝的作用 增大發(fā)酵液中懸浮粒子的體積；提高固液分離增大發(fā)酵液中懸浮粒子的體積；提高固液分離速度和濾液質(zhì)量。速度和濾液質(zhì)量。 絮凝是一種以物理的集合為主的過(guò)程。絮凝是一種以物理的集合為主的過(guò)程。凝凝集集和和絮絮凝凝聚丙烯酰胺絮凝劑聚丙烯酰胺絮凝劑工作任務(wù)

16、（二）發(fā)酵液的預(yù)處理工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)處理常用凝聚劑常用凝聚劑高價(jià)陽(yáng)離子高價(jià)陽(yáng)離子 凝聚能力的次序?yàn)椋耗勰芰Φ拇涡驗(yàn)椋?Al Al3+3+FeFe3+3+HH+ +CaCa2+2+MgMg2+2+KK+ +NaNa+ +LiLi+ + 常用電解質(zhì)：常用電解質(zhì)： Al Al2 2(SO(SO4 4) )3 318H18H2 2O O、AlClAlCl3 36H6H2 2O O、FeClFeCl3 3、ZnSOZnSO4 4、MgSOMgSO4 4發(fā)酵液的預(yù)處理發(fā)酵液的預(yù)處理凝凝集集和和絮絮凝凝工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)處理工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)處理常用絮凝劑：常用絮凝劑：人工高分子聚合物

17、：人工高分子聚合物：聚丙烯酰胺、聚苯乙烯，聚乙稀亞胺的衍生物聚丙烯酰胺、聚苯乙烯，聚乙稀亞胺的衍生物無(wú)機(jī)高分子聚合物：聚合鋁鹽、聚合鐵鹽無(wú)機(jī)高分子聚合物：聚合鋁鹽、聚合鐵鹽天然有機(jī)高分子絮凝劑：天然有機(jī)高分子絮凝劑：殼聚糖、葡聚糖、明膠、骨膠殼聚糖、葡聚糖、明膠、骨膠微生物絮凝劑：微生物絮凝劑：糖蛋白，粘多糖，纖維素，核酸糖蛋白，粘多糖，纖維素，核酸發(fā)酵液的預(yù)處理發(fā)酵液的預(yù)處理凝凝集集和和絮絮凝凝工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)處理工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)處理 影響絮凝的因素影響絮凝的因素絮凝劑的濃度：絮凝劑的濃度：低濃度時(shí)，增大濃度有利于絮凝，低濃度時(shí)，增大濃度有利于絮凝，但濃度過(guò)大同樣會(huì)產(chǎn)生反作用

18、；但濃度過(guò)大同樣會(huì)產(chǎn)生反作用；絮凝劑的分子量：絮凝劑的分子量：絮凝劑分子量在，鏈越長(zhǎng)，吸絮凝劑分子量在，鏈越長(zhǎng)，吸附架橋效果越好，但在水中溶解度減小會(huì)對(duì)絮附架橋效果越好，但在水中溶解度減小會(huì)對(duì)絮凝不利，故應(yīng)分子量適當(dāng)?shù)男跄齽?；凝不利，故?yīng)分子量適當(dāng)?shù)男跄齽?；溶液的溶液的pHpH：影響絮凝劑活性基團(tuán)的解離，應(yīng)選擇影響絮凝劑活性基團(tuán)的解離，應(yīng)選擇合適合適pHpH值，使絮凝劑解離度最大，作用最好。值，使絮凝劑解離度最大，作用最好。攪拌速度和時(shí)間：攪拌速度和時(shí)間：攪拌速度和時(shí)間要控制在一個(gè)攪拌速度和時(shí)間要控制在一個(gè)合理范圍合理范圍發(fā)酵液的預(yù)處理發(fā)酵液的預(yù)處理凝凝集集和和絮絮凝凝工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)

19、處理工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)處理加加入入助助濾濾劑劑法法 作用：避免濾布或生成的濾餅阻塞而影響過(guò)濾。作用：避免濾布或生成的濾餅阻塞而影響過(guò)濾。 從發(fā)酵液中分離菌體、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)時(shí)，懸浮從發(fā)酵液中分離菌體、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)時(shí)，懸浮物細(xì)小易受壓，易阻塞或粘住過(guò)濾介質(zhì)的細(xì)孔。物細(xì)小易受壓，易阻塞或粘住過(guò)濾介質(zhì)的細(xì)孔。加入助濾劑后，能在過(guò)濾介質(zhì)和要分離的固形物加入助濾劑后，能在過(guò)濾介質(zhì)和要分離的固形物之間形成一層不可壓縮的多孔且極為細(xì)密的濾層，之間形成一層不可壓縮的多孔且極為細(xì)密的濾層，從而截留懸浮雜質(zhì)。從而截留懸浮雜質(zhì)。 還能使形成的濾餅疏松，具有較大孔隙，形還能使形成的濾餅疏松，具有較大孔隙，形成暢通

20、的細(xì)密管道。成暢通的細(xì)密管道。工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)處理工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)處理加加入入助助濾濾劑劑法法助濾劑的使用方法：助濾劑的使用方法： 在濾布上預(yù)涂一層助濾劑，作為過(guò)濾介質(zhì)使在濾布上預(yù)涂一層助濾劑，作為過(guò)濾介質(zhì)使用，待濾畢后與濾餅一起除去；用，待濾畢后與濾餅一起除去； 助濾劑按一定比例均勻地混入待濾的懸浮液助濾劑按一定比例均勻地混入待濾的懸浮液中，然后一起進(jìn)入過(guò)濾機(jī)，使其形成較松的濾餅，中，然后一起進(jìn)入過(guò)濾機(jī)，使其形成較松的濾餅，降低其可壓縮性，讓濾液可以順暢流通。降低其可壓縮性，讓濾液可以順暢流通。用作惰性助濾劑的材料：用作惰性助濾劑的材料： 硅藻土、膨脹珍珠巖、石棉、纖維素、硅

21、藻土、膨脹珍珠巖、石棉、纖維素、未活化的碳、爐渣、重質(zhì)碳酸鈣或這些材料的未活化的碳、爐渣、重質(zhì)碳酸鈣或這些材料的混合物?；旌衔?。要根據(jù)目的產(chǎn)物、過(guò)濾介質(zhì)要根據(jù)目的產(chǎn)物、過(guò)濾介質(zhì)及過(guò)濾情況來(lái)選擇助濾劑的及過(guò)濾情況來(lái)選擇助濾劑的品種、助濾劑的粒度、用量。品種、助濾劑的粒度、用量。工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)處理工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)處理高高價(jià)價(jià)態(tài)態(tài)無(wú)無(wú)機(jī)機(jī)離離子子去去除除的的方方法法Ga2+Ga2+：加入草酸和草酸鹽，生成草酸鈣；加入：加入草酸和草酸鹽，生成草酸鈣；加入磷酸鹽，生成磷酸鈣磷酸鹽，生成磷酸鈣Mg2+Mg2+：加入草酸；加入磷酸鹽，生成磷酸鎂；：加入草酸；加入磷酸鹽，生成磷酸鎂；三聚磷酸

22、鈉（三聚磷酸鈉（NaNa5 5P P3 3O O1010），生成可溶性絡(luò)合物），生成可溶性絡(luò)合物Fe3+Fe3+：加入黃血鹽，生成普魯士蘭沉淀：加入黃血鹽，生成普魯士蘭沉淀工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)處理工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)處理可可溶溶性性雜雜蛋蛋白白的的去去除除法法變性沉淀變性沉淀 適于熱穩(wěn)定物質(zhì)適于熱穩(wěn)定物質(zhì) 加熱使蛋白質(zhì)變性，其空間結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，加熱使蛋白質(zhì)變性，其空間結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，疏水基團(tuán)暴露，溶解度降低易產(chǎn)生沉淀。疏水基團(tuán)暴露，溶解度降低易產(chǎn)生沉淀。 在目標(biāo)產(chǎn)物耐熱允許的范圍內(nèi)，采用加熱在目標(biāo)產(chǎn)物耐熱允許的范圍內(nèi)，采用加熱并保持一定時(shí)間，可去除可溶性雜蛋白。并保持一定時(shí)間，可去除可溶

23、性雜蛋白。例：去除鏈霉素中雜蛋白例：去除鏈霉素中雜蛋白 pHpH值值3.03.0，溫度，溫度70,70,時(shí)間時(shí)間0.5h0.5h，使黏，使黏度降為原來(lái)的度降為原來(lái)的1/61/6，過(guò)濾速度提高，過(guò)濾速度提高1010100100倍。倍。工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)處理工作任務(wù)（二）發(fā)酵液的預(yù)處理等電點(diǎn)沉淀等電點(diǎn)沉淀 根據(jù)蛋白質(zhì)的兩性性質(zhì)，在等電點(diǎn)時(shí)溶解根據(jù)蛋白質(zhì)的兩性性質(zhì)，在等電點(diǎn)時(shí)溶解度最低，易產(chǎn)生沉淀，用酸或堿調(diào)節(jié)發(fā)酵液度最低，易產(chǎn)生沉淀，用酸或堿調(diào)節(jié)發(fā)酵液pHpH值，使其達(dá)到蛋白等電點(diǎn)而沉淀。值，使其達(dá)到蛋白等電點(diǎn)而沉淀。 但有些蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)仍有一定的溶解但有些蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)仍有一定的溶解度，還要結(jié)合其它的化學(xué)方法。度，還要結(jié)合其它的化學(xué)方法?？煽扇苋苄孕噪s雜蛋蛋白