LVLXSDS體系的熒光特性及左氧氟沙星的測定

1、LVLXSDS體系的熒光特性及左氧氟沙星的測定作者：蔡花真 劉彥釗 席會平 謝紅濤【摘要】目的 研究不同表面活性劑對左氧氟沙星(levofloxacin，LVLX)熒光強(qiáng)度的影響，建立表面活性劑增敏，熒光光度法測定左氧氟沙星含量的新方法。方法 比較不同表面活性劑對左氧氟沙星熒光特性的影響，發(fā)現(xiàn)在pH6.0的緩沖溶液中十二烷基硫酸鈉(SDS)對左氧氟沙星熒光強(qiáng)度有顯著的增敏作用，建立SDS增敏，熒光光度法快速測定左氧氟沙星的新方法。結(jié)果 將該方法用于左氧氟沙星片劑和注射液的測定，結(jié)果與國標(biāo)檢測方法高效液相色譜(HPLC)法一致，樣品平均回收率為100.4%，RSD為0.64%，檢出限為18.9g

2、/L。結(jié)論 該方法簡便、快捷、準(zhǔn)確。 【關(guān)鍵詞】左氧氟沙星； 十二烷基硫酸鈉； 熒光測定法ABSTRACT Objective Effect of different surfactants on the fluorimetric intensity of levofloxacin (LVLX) were studied. We established a new method for quantitative determination of levofloxacin. Methods Effect of different surfactants on the fluorimetric i

3、ntensity of levofloxacin have been compared. We discovered sodium dodecyl sulfate could enhance the fluorimetric intensity of levofloxacin. Based on this reaction, levofloxacin was determined by fluorescence spectrophotometry. Results The reaction conditions were investigated in detail. In LVLXSDS s

4、ystem, the linear range was 54,500 g/L and regression equation was F=1.34339+0.09311C (g/L) (r=0.9994). The average recovery of levofloxacin was 100.4% with RSD of 0.64%. Conclusion This method was simple, accurate, rapid and could be used to determine ciprofloxacin in tablet and injection.KEY WORDS

5、 Levofloxacin; SDS; Fluorimetry左氧氟沙星(levofloxacin，LVLX)是第三代喹諾酮類藥物，主要用于呼吸道、泌尿道、腸道及皮膚軟組織等的感染，具有抗菌譜廣、作用強(qiáng)并與多種抗菌藥間無交叉耐藥性的特點1，臨床上已得到廣泛應(yīng)用。目前，其含量測定主要采用高效液相色譜法(HPLC)2和分光光度法3，但HPLC法費用昂貴且背景干擾較多，分光光度法的靈敏度較低。利用LVLX的熒光特性，吳東方等4報道了用熒光法測定LVLX的含量，但由于LVLX的熒光特性比較弱，該法的靈敏度不高。本文系統(tǒng)研究了多種表面活性劑對LVLX熒光特性的影響， 通過研究發(fā)現(xiàn)在pH6.0的緩沖溶液中

6、，表面活性劑十二烷基硫酸鈉(SDS)對LVLX具有顯著的增敏作用，以此為基礎(chǔ)，建立了SDS增敏熒光光度法測定LVLX的新方法。本方法的線性范圍寬(54500g/L)，檢出下限低(18.9g/L)，用于片劑及注射液中LVLX含量的測定，平均回收率為100.4%，RSD=0.64%，結(jié)果滿意。1 實驗部分 1.1 主要儀器與試劑970CRT型熒光分光光度計(上海精密 科學(xué) 有限公司)；2471CHA型酸度計(上海大中儀器廠)；LVLX對照品(揚子江藥業(yè)集團(tuán)公司， 純度大于99.6%)；SDS(化學(xué)純)；所用其它試劑均為分析純，實驗用水為二次蒸餾水。LVLX儲備液(1.00mg/ml)的配制 準(zhǔn)確稱

7、取干燥至恒重的LVLX對照品0.0500g于50ml燒杯中，加入適量水溶解后，定量轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶中，定容，搖勻，即得LVLX儲備液。LVLX標(biāo)準(zhǔn)溶液(10.00mg/L)的配制 精密量取2.50ml儲備液于250ml容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，得到10.00mg/L的LVLX標(biāo)準(zhǔn)溶液。1.2 實驗方法于10ml比色管中依次加入適量的含有LVLX的溶液，2.00ml乙酸乙酸鈉緩沖液(pH6.0)，1.00ml表面活性劑(0.10mol/L)溶液，用水稀釋至刻度，搖勻，室溫放置10min，在ex 335nm，em 490nm處測定其熒光強(qiáng)度F。2 結(jié)果與討論 2.1 不同表面活性劑對LV

8、LX熒光特性的影響按照實驗方法，固定其它實驗條件，改變不同的表面活性劑，測定不加表面活性劑和加入不同表面活性劑時體系的熒光強(qiáng)度。實驗表明，于LVLX中加入不同類型的表面活性劑后，其熒光光譜形狀不變(ex=335nm，ex=490nm)，但熒光強(qiáng)度有所改變。當(dāng)加入SDS后，測定體系的熒光強(qiáng)度結(jié)果示于圖1。實驗表明，加入SDS使LVLX的熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)，提示SDS對LVLX的熒光特性有顯著的增敏作用；當(dāng)加入十二烷基苯磺酸鈉(LAS)后，LVLX的熒光強(qiáng)度顯著減弱，說明LAS對LVLX的熒光強(qiáng)度有明顯的淬滅作用；當(dāng)加入十六烷基三甲基溴化銨、氯代十六烷基吡啶、十二烷基磺酸鈉和乳化劑OP后，對LVLX

9、的熒光強(qiáng)度基本無影響。上述研究表明，SDS對LVLX的熒光特性有顯著的增敏作用，所以本實驗選擇SDS作為增敏劑。2.2 LVLXSDS體系熒光特性的系統(tǒng)研究(1)SDS用量的影響 按照實驗方法，固定其它實驗條件，改變SDS用量，測定不同SDS溶液用量時體系的熒光強(qiáng)度，結(jié)果示于圖2。實驗表明，當(dāng)SDS(0.10mol/L)溶液用量在00.50ml范圍內(nèi)時，隨著SDS用量的增加，熒光強(qiáng)度明顯增強(qiáng)并達(dá)到最大值，當(dāng)SDS用量大于0.50ml時，隨著SDS用量的增加，熒光強(qiáng)度基本保持穩(wěn)定，實驗選用SDS用量為1.00ml。(2)pH值及緩沖溶液用量的影響緩沖體系的影響 LVLX分子中含有羰基、羧基和氨基

10、，氮原子與氧原子在不同酸堿溶液中的質(zhì)子化程度將直接影響發(fā)光體系的 電子 性質(zhì)以及電子云分布，因此溶液酸堿度的變化對LVLXSDS體系的熒光a：LVLX的激發(fā)光譜； b：LVLXSDS的激發(fā)光譜； a：LVLX的發(fā)射光譜； b：LVLXSDS的發(fā)射光譜圖1 SDS對LVLX熒光強(qiáng)度的影響圖2 SDS用量對LVLX熒光強(qiáng)度的影響強(qiáng)度有顯著影響。本實驗研究了乙酸乙酸鈉、鹽酸檸檬酸鈉、磷酸二氫鈉磷酸氫二鈉緩沖體系對LVLX熒光強(qiáng)度的影響。實驗表明，在pH值相同的情況下，不同緩沖體系對LVLX的熒光強(qiáng)度影響不大，只要控制pH值相同，體系的熒光強(qiáng)度保持不變。本實驗選擇乙酸乙酸鈉作為緩沖溶液。pH值的影響

11、按照實驗方法，固定其它實驗條件，改變乙酸乙酸鈉緩沖溶液的pH值，測定不同pH值時體系的熒光強(qiáng)度，結(jié)果示于圖3。實驗表明，當(dāng)乙酸乙酸鈉緩沖溶液的pH為6.0時，體系熒光強(qiáng)度最大，本實驗選用pH6.0。緩沖溶液用量的影響 按照實驗方法，固定pH6.0及其它實驗條件，改變乙酸乙酸鈉緩沖溶液的用量，測定不同用量時體系的熒光強(qiáng)度，結(jié)果示于圖4。實驗表明，隨著乙酸乙酸鈉溶液用量的增加，體系的熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)，當(dāng)乙酸乙酸鈉緩沖溶液的用量為1.50ml時，體系熒光強(qiáng)度達(dá)到最大值，并隨著乙酸乙酸鈉用量的增大，體系的熒光強(qiáng)度基本保持不變，本實驗選用pH6.0的乙酸乙酸鈉緩沖液2.00ml。2.3 反應(yīng)時間和絡(luò)合物

12、的穩(wěn)定性按照實驗方法，固定其它實驗條件，改變反應(yīng)時間，測定不同反應(yīng)時間時體系的熒光強(qiáng)度。實驗表明：當(dāng)SDS加入到LVLX中后，體系的熒光強(qiáng)度立即達(dá)到最大值，且4h內(nèi)F值保持不變。故反應(yīng)時間對體系的F值無影響，為了快速測定LVLX的含量，本實驗選擇最佳反應(yīng)時間為10min。2.4 藥物輔料的影響按照實驗方法，固定其它實驗條件，測定添加不同藥物輔料時體系的熒光強(qiáng)度。實驗表明，當(dāng)SDS加入量相同時，體系的熒光強(qiáng)度相同，不隨藥物輔料的改變而改變。故藥物輔料對體系的F值無影響。2.5 工作曲線與檢出限精密吸取LVLX標(biāo)準(zhǔn)溶液適量， 配制成5圖3 pH對LVLX熒光強(qiáng)度的影響圖4 緩沖液用量對LVLX熒光

13、強(qiáng)度的影響4500g/L的系列溶液，按照實驗方法，分別測定其相對熒光強(qiáng)度，以LVLX的濃度C為橫坐標(biāo)，相對熒光強(qiáng)度F為縱坐標(biāo)繪制工作曲線，結(jié)果示于圖5，該曲線的線性回歸方程：F=1.34339+0.09311C(g/L) r=0.9994結(jié)果表明，在54500g/L范圍內(nèi)，相對熒光強(qiáng)度與LVLX濃度呈良好的線性關(guān)系。根據(jù)國際理論與應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會IUPAC規(guī)定(檢出限=3S/n)，測得該法檢出限為18.9g/L。3 樣品分析和回收率試驗 3.1 樣品分析分別取LVLX注射液(江蘇揚子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號04092501，標(biāo)示量為0.2g/100ml)和片劑(四川科瑞德醫(yī)藥有限公司，批號040206，標(biāo)示量100mg/粒)樣品，用水將其稀釋或溶解到合適的濃度，得樣品溶液。在選擇的最佳實驗條件下，用工作曲線法進(jìn)行測定，并與標(biāo)準(zhǔn)方法高效液相色譜法進(jìn)行比較，測定結(jié)果見表1。3.2 回收率試驗用標(biāo)準(zhǔn)加入法進(jìn)行回收率試驗，結(jié)果示于表2。平表1 左氧氟沙星注射液和片劑樣品的測定結(jié)果表2 回收率試驗(n=5)均回收率為100.4%，平均RSD為0.64%?！?參考文獻(xiàn) 】 1 陳新謙，金有豫. 新編藥物學(xué)M第14版. 北京：