全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范(2019年修訂版)

1、構(gòu)思新穎，品質(zhì)一流，適合各個(gè)領(lǐng)域，謝謝采納附件1全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范NationalGuidelineforDetectionofHIV/AIDS（2015年修訂版）中國(guó)疾病預(yù)防控制中心二。年月構(gòu)思新穎，品質(zhì)一流，適合各個(gè)領(lǐng)域，謝謝采納全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范NationalGuidelineforDetectionofHIV/AIDS（2015年修訂版）中國(guó)疾病預(yù)防控制中心二。年月艾滋病在我國(guó)流行已數(shù)十年，隨著感染者和臨床病人的不斷增加、感染人群變化，艾滋病檢測(cè)工作量逐漸加大，對(duì)監(jiān)測(cè)和檢測(cè)的需求也不斷增加，承擔(dān)艾滋病檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室已遍及全國(guó)各級(jí)醫(yī)療、疾病預(yù)防控制、采供血、婦幼保健機(jī)構(gòu)，出入境檢

2、驗(yàn)檢疫、軍隊(duì)等各個(gè)系統(tǒng)。為了盡早發(fā)現(xiàn)HIV感染者和艾滋病病人，及早提供咨詢、治療，同時(shí)為適應(yīng)基層艾滋病檢測(cè)工作需求，在新的形勢(shì)下，根據(jù)關(guān)于艾滋病抗病毒治療管理工作的意見(jiàn)、中國(guó)預(yù)防與控制艾滋病中長(zhǎng)期規(guī)劃（19982010年）、中國(guó)遏制與防治艾滋病十二五行動(dòng)計(jì)劃的通知（國(guó)辦發(fā)20124號(hào)）、“四免一關(guān)懷”等國(guó)家艾滋病防治重要方針政策和十三五防治工作重點(diǎn)，在廣泛征求各省、市疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)和醫(yī)療機(jī)構(gòu)意見(jiàn)的基礎(chǔ)上，在中華人民共和國(guó)衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)艾滋病專家及省級(jí)專家的參與下，中國(guó)疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病預(yù)防控制中心對(duì)全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范（2009年版）進(jìn)行修改、增補(bǔ)和完善，制定出全國(guó)艾滋病檢測(cè)

3、技術(shù)規(guī)范（2015年版）（以下簡(jiǎn)稱規(guī)范），使其既能滿足目前艾滋病檢測(cè)工作的實(shí)際需求，又能體現(xiàn)檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展。本次規(guī)范修訂工作立足于我國(guó)目前檢測(cè)狀況，結(jié)合發(fā)達(dá)國(guó)家使用的指南，主要對(duì)以下幾個(gè)方面內(nèi)容進(jìn)行了修改、增補(bǔ)和完善：（1）完善了不同的檢測(cè)策略，并將其整合為獨(dú)立的一章；（2）增加了HIV-1新II構(gòu)思新穎，品質(zhì)一流，適合各個(gè)領(lǐng)域，謝謝采納發(fā)感染檢測(cè)一章；（3）新增補(bǔ)充試驗(yàn)概念，其內(nèi)容包括抗體確證試驗(yàn)（WBRIBA/LIA等）和核酸試驗(yàn)（定性和定量試驗(yàn)）；（4）增加了第4代試劑（抗原抗體聯(lián)合檢測(cè)試劑）的檢測(cè)流程；（5）增加核酸檢測(cè)流程；（6）完善了檢測(cè)報(bào)告。將抗體篩查和復(fù)檢報(bào)告整合為HIV抗體篩

4、查檢測(cè)報(bào)告，增加HIV-1核酸檢測(cè)報(bào)告和嬰兒艾滋病感染早期診斷檢測(cè)報(bào)告，取消了流行病檢測(cè)HIV抗體檢測(cè)報(bào)告單、艾滋病病毒抗體檢測(cè)數(shù)和陽(yáng)性人數(shù)統(tǒng)計(jì)報(bào)表、艾滋病職業(yè)暴露個(gè)案登記表和艾滋病防治工作人員職業(yè)暴露事故匯總表；（7）取消實(shí)驗(yàn)室生物安全一章和艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理一章。所有附表的檢測(cè)報(bào)告僅供使用實(shí)驗(yàn)室參考。本規(guī)范由中國(guó)疾病預(yù)防控制中心批準(zhǔn)，下發(fā)至全國(guó)艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室及有關(guān)單位。本規(guī)范將為國(guó)家、相關(guān)部委下發(fā)的艾滋病防治工作各項(xiàng)政策法規(guī)的有效實(shí)施提供強(qiáng)有力的技術(shù)支持，并具體指導(dǎo)艾滋病實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員開展日常工作。本規(guī)范起草單位：中國(guó)疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病預(yù)防控制中心。本規(guī)范參加編寫單位：中國(guó)

5、人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院、上海市疾病預(yù)防控制中心、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)、北京出入境檢驗(yàn)檢疫局、云南省疾病預(yù)防控制中心、四川省疾病預(yù)防控制中心、浙江省疾病預(yù)防控制中心、河南省疾病預(yù)防控制中心、北京市紅十字血液中心、衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心、江蘇省疾病預(yù)防控制中心、陜西省疾病預(yù)防控制中心、安徽省疾病預(yù)防控制中心、首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院、北京市疾病預(yù)防iii構(gòu)思新穎，品質(zhì)一流，適合各個(gè)領(lǐng)域，謝謝采納控制中心。本規(guī)范編寫組人員：蔣巖、汪寧、李敬云、鐘平、尚紅、邵一鳴、肖瑤、朱紅、邢文革、姚均、潘品良、邱茂鋒、馬艷玲、梁姝、郭志宏、王哲、葛紅衛(wèi)、王盈、李金明、徐曉琴、常文輝、吳建軍、張福杰、吳昊、蘇雪麗、廖玲潔

6、。本規(guī)范參加編寫主要國(guó)際機(jī)構(gòu)：世界衛(wèi)生組織（Po-linCHAN、張嵐）。美國(guó)疾病預(yù)防控制中心GA項(xiàng)目（ColinShepard、郝玲、齊明山）。本規(guī)范編寫工作聯(lián)系人：肖瑤。本規(guī)范自發(fā)布之日起實(shí)施，同時(shí)終止全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范（2009年版）。本規(guī)范適用于全國(guó)艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室。本規(guī)范解釋權(quán)屬于中國(guó)疾病預(yù)防控制中心。致謝：感謝蓋茨基金會(huì)在規(guī)范修訂過(guò)程中給予技術(shù)和人力等方面的支持。IV全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范目錄第一章樣品的采集和處理61范圍6.2規(guī)范性文件引用.6.3樣品種類及相應(yīng)的用途7.4操作步驟7.4.1 采樣前準(zhǔn)備7.4.2 樣品的采集和處理8.4.3 樣品的保存104.4 樣品的運(yùn)送1

7、14.5 樣品的接收12第二章HIV抗體檢測(cè)131范圍1.32規(guī)范性文件引用133 HIV抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室要求134 HIV抗體檢測(cè)的目的和要點(diǎn)144.1 HIV抗體檢測(cè)的目的144.2 HIV抗體檢測(cè)的要點(diǎn)145 常規(guī)HIV抗體檢測(cè)方法155.1 試劑和樣品155.2 方法156結(jié)果報(bào)告176.1 篩查報(bào)告1.76.2 WB及RIBA/LIA報(bào)告187質(zhì)量控制187.1 酶免或發(fā)光法抗體檢測(cè)的室內(nèi)質(zhì)量控制187.2 快速法抗體檢測(cè)質(zhì)控22第三章HIV-1新發(fā)感染檢測(cè)241范圍24.2規(guī)范性文件引用243新發(fā)感染檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室要求244目的24.5新發(fā)感染檢測(cè)方法255.1 方法學(xué)原理255.2 方

8、法255.3 樣品的入選標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)265.4 結(jié)果處理和解釋275.5 數(shù)據(jù)分析286質(zhì)量控制30.6.1 人員培訓(xùn).306.2 樣品質(zhì)控.306.3 試劑質(zhì)控.316.4 實(shí)驗(yàn)過(guò)程質(zhì)控31第四章HIV-1抗原檢測(cè)321范圍322規(guī)范性文件引用323HIV-1P24抗原檢測(cè)的意義324實(shí)驗(yàn)室要求325檢測(cè)方法及程序335.1 試劑335.2 樣品335.3 定性檢測(cè).335.4 定量檢測(cè).355.5 結(jié)果報(bào)告和解釋356質(zhì)量控制366.1 定性檢測(cè).366.2 定量檢測(cè).37第五章HIV核酸檢測(cè)381范圍382規(guī)范性文件引用383核酸檢測(cè)的意義391.1 HIV-1感染診斷391.2 治療

9、效果監(jiān)測(cè)401.3 病程監(jiān)控及預(yù)測(cè)401.4 耐藥性監(jiān)測(cè)404 HIV核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室要求414.1 實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)及工作基本原則414.2 實(shí)驗(yàn)室人員和要求414.3 實(shí)驗(yàn)室生物安全415 HIV-1核酸檢測(cè)方法及程序415.1 HIV-1核酸定性檢測(cè)415.2 HIV核酸定量檢測(cè)435.3 集合核酸定性檢測(cè)455.4 HIV核酸即時(shí)檢測(cè)476質(zhì)量保證和質(zhì)量控制476.1 實(shí)驗(yàn)室分區(qū)和環(huán)境476.2 儀器設(shè)備質(zhì)量控制486.3 檢測(cè)過(guò)程質(zhì)量控制486.4 外部質(zhì)量控制48第六章艾滋病病毒感染實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)策略491范圍492規(guī)范性文件引用493疫情監(jiān)測(cè)相關(guān)的檢測(cè)策略及結(jié)果報(bào)告493.1 HIV匿名無(wú)

10、關(guān)聯(lián)檢測(cè)流程493.2 HIV匿名關(guān)聯(lián)檢測(cè)流程504臨床診斷相關(guān)的檢測(cè)策略及結(jié)果報(bào)告504.1 使用抗體檢測(cè)試劑的檢測(cè)流程504.2 使用抗原抗體檢測(cè)試劑的檢測(cè)流程514.3 補(bǔ)充試驗(yàn)檢測(cè)策略535血液篩查相關(guān)的檢測(cè)策略及結(jié)果報(bào)告596嬰兒HIV-1感染早期診斷相關(guān)的檢測(cè)策略及結(jié)果報(bào)告626.1 核酸檢測(cè)策略（RNA/DNA.626.2 抗體檢測(cè)策略及結(jié)果報(bào)告.64第七章HIV-1基因型耐藥檢測(cè)661范圍662規(guī)范性文件引用663 HIV-1基因型耐藥檢測(cè)的意義.673.1 群體耐藥監(jiān)測(cè)673.2 個(gè)體耐藥檢測(cè)684 HIV-1基因型耐藥檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室要求684.1 實(shí)驗(yàn)室功能分區(qū)684.2 實(shí)驗(yàn)

11、室人員和要求694.3 設(shè)施和設(shè)備695 HIV-1基因型耐藥檢測(cè)方法及程序.695.1 樣品695.2 檢測(cè)原理.695.3 檢測(cè)方法.695.4 耐藥分析.706質(zhì)量保證與質(zhì)量控制7.16.1 室內(nèi)質(zhì)控716.2 外部質(zhì)控.72第八章CD4+和CD8+T*巴細(xì)月的檢測(cè)731范圍732規(guī)范性文件引用733 CD4+和CD8+T*巴細(xì)胞檢測(cè)的意義743.1 HIV感染臨床分期743.2 HIV感染兒童免疫抑制分級(jí)和治療輔助指標(biāo)743.3 疾病進(jìn)展監(jiān)測(cè)743.4 機(jī)會(huì)性感染的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估743.5 抗病毒治療適應(yīng)癥選擇及療效評(píng)價(jià)743.6 CD8+T淋巴細(xì)胞為抑制性/細(xì)胞毒性T細(xì)胞754 CD4+和

12、CD8+T#巴細(xì)胞檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室要求754.1 人員754.2 功能分區(qū).754.3 設(shè)施和設(shè)備765常規(guī)CD4+和CD8+T*巴細(xì)胞檢測(cè)的方法和程序765.1 樣品采集、運(yùn)輸和接收765.2 方法.775.3 試齊1J795.4 實(shí)驗(yàn)資料的記錄795.5 結(jié)果報(bào)告.806質(zhì)量控制80第九章HIV-1的分離培養(yǎng)821范圍822規(guī)范性文件引用823HIV-1分離的意義823.1 HIV抗體不確定或HIV-1陽(yáng)性母親所生嬰兒的鑒別診斷及診斷823.2 HIV表型耐藥檢測(cè)及其他HIV生物學(xué)特征的研究。823.3 HIV感染的輔助診斷HIV-1感染窗口期。.824實(shí)驗(yàn)室要求824.1 實(shí)驗(yàn)室.824.2

13、設(shè)備824.3 材料825HIV-1分離的方法及程序835.1 樣本835.2 靶細(xì)胞制備835.3 建立共培養(yǎng)835.4 監(jiān)測(cè)病毒生長(zhǎng)835.5 病毒鑒定。835.6 判定結(jié)果和解釋836質(zhì)量控制84附表1HIV抗體篩查檢測(cè)報(bào)告85附表2HIV抗體確證檢測(cè)報(bào)告86附表3HIV-1核酸檢測(cè)報(bào)告87附表4HIV抗體確證檢測(cè)報(bào)告（特定條件）88附表5CD4+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)報(bào)告89附表6HIV-1耐藥基因型檢測(cè)報(bào)告90附表7嬰兒艾滋病感染早期診斷檢測(cè)報(bào)告9146第一章樣品的采集和處理1范圍本章規(guī)定了用于人免疫缺陷病毒（HIV）檢測(cè)的全血、血清、血漿、細(xì)胞、口腔黏膜滲出液、尿液以及濾紙干血斑（DBS樣

14、品的采集和處理方法，適用于HIV抗體、抗原、核酸、基因亞型、耐藥檢測(cè)、CD4和CD8+T淋巴細(xì)胞數(shù)測(cè)定及HIV分離培養(yǎng)。2規(guī)范性文件引用艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS-293有效版本。艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)質(zhì)量及保證指南（中國(guó)疾病預(yù)防控制中心，2013年版）。«HIV-1病毒載量測(cè)定及質(zhì)量保證指南（中國(guó)疾病預(yù)防控制中心，2013年版）。HIV-1基因型耐藥檢測(cè)及質(zhì)量保證指南，（中國(guó)疾病預(yù)防控制中心，2013年版）。ConsolidatedGuidelinesonHIVTestingServices.WHOJuly2015.可感

15、染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定，衛(wèi)生部第45號(hào)令,2006年2月1日。3樣品種類及相應(yīng)的用途3.1 全血、血清、血漿、口腔黏膜滲出液、尿液以及干血斑樣品可用于HIV抗體檢測(cè)。3.2 全血、血清、血漿、病毒培養(yǎng)上清液可用于HIV抗原檢測(cè)。3.3 抗凝全血可用于CD4刷CD8+TW巴細(xì)胞測(cè)定。3.4 血漿、DBS可用于HIV-1病毒載量、基因型、耐藥檢測(cè)。3.5 淋巴細(xì)胞富集液、外周血單核淋巴細(xì)胞（PBMC及全血可用于HIV核酸定性與定量、基因型檢測(cè)和HIV-1分離培養(yǎng)。4操作步驟4.1 采樣前準(zhǔn)備根據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目的具體要求，確定采集樣品的種類、處理、保存及運(yùn)輸?shù)臅r(shí)限和方法，按

16、照臨床采血技術(shù)要求操作，遵守生物安全相關(guān)要求。檢查所需物品是否已備齊，是否在有效期內(nèi)，有無(wú)破損，是否足量，特別應(yīng)檢查受檢者信息與樣品容器表面的標(biāo)記是否一致，并注明樣品采集時(shí)間及唯一編碼。采集血液樣本宜選擇合適的室內(nèi)（外）采血空間，受檢者坐（臥）于合適的位置，準(zhǔn)備采血用具、皮膚消毒用品、采血管及試管架、硬質(zhì)廢棄物容器等。口腔黏膜滲出液樣本應(yīng)使用試劑盒提供的專用采樣工具，尿液樣本建議使用可保持尿液穩(wěn)定的專用采尿管。4.1.1 樣品的編碼和記錄4.1.2 應(yīng)制定樣品編碼的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP,規(guī)定樣品編碼的原則和方法，為樣品制定唯一性編碼（編號(hào)），保證其唯一性。4.1.3 采血前，先對(duì)試管或?yàn)V紙進(jìn)行

17、標(biāo)記，核對(duì)后編碼。要將標(biāo)簽貼在試管的側(cè)面，推薦使用預(yù)先印制好的、專門用于冷凍儲(chǔ)存的耐低溫標(biāo)簽。干血斑濾紙應(yīng)使用具有資質(zhì)的產(chǎn)品。4.1.4 口腔黏膜滲出液樣本應(yīng)采集口腔滲出液，不是唾液。4.1.5 尿液樣本準(zhǔn)備好帶有唯一編碼的采尿管，并保留唯一編碼。4.1.6 應(yīng)使用專門的樣品記錄本或登記表記錄樣品，同時(shí)錄入電腦保存。4.2 樣品的采集和處理4.2.1 血液4.2.1.1 抗凝全血：消毒局部皮膚，用加有抗凝劑（EDT府內(nèi)鹽或鉀鹽、枸椽酸鈉、肝素鈉）的真空采血管抽取適量靜脈血，或用一次性注射器抽取靜脈血，轉(zhuǎn)移至加有抗凝劑的試管中，輕輕顛倒混勻68次，備用。4.2.1.2 末梢全血：消毒局部皮膚（成

18、人和1歲以上兒童可選擇耳垂、中指、無(wú)名指或食指。1歲以下兒童采用足跟部）。用采血針刺破皮膚，用無(wú)菌紗布擦掉第一滴血。收集滴出的血液，備用。4.2.1.3 血漿：將采集的抗凝全血15003000r/min離心15分鐘，上層即為血漿，吸出置于合適的容器中，備用。4.2.1.4 血清：根據(jù)需要，用不含抗凝劑的真空采血管抽取510ml靜脈血，或一次性注射器抽取靜脈血，轉(zhuǎn)移至無(wú)抗凝劑的試管中，室溫下自然放置12小時(shí)，待血液凝固、血塊收縮后再用15003000r/min離心15分鐘，吸出血清，置于合適的容器中，備用。4.2.1.5 淋巴細(xì)胞富集液：將采集的抗凝全血15003000r/min離心15分鐘，吸

19、取血漿層下的淋巴細(xì)胞富集液，置于合適的容器中，備用4.2.1.6 PBMC:使用淋巴細(xì)胞分離液，進(jìn)行密度梯度離心，吸出PBMC層，置于合適的容器中，備用。4.2.1.7 抗凝劑的選擇：根據(jù)檢測(cè)要求選用適當(dāng)?shù)目鼓齽鏑D4拜口CD8+端巴細(xì)胞測(cè)定可選用EDTA納鹽或鉀鹽、枸椽酸鈉、肝素鈉；HIV-1病毒分離、核酸定性/定量檢測(cè)可選用EDT府內(nèi)鹽或鉀鹽或枸椽酸鈉。4.2.1.8 樣品采集后處理、保存、運(yùn)輸?shù)臅r(shí)限和條件，因不同的檢測(cè)項(xiàng)目而異，應(yīng)參見(jiàn)不同檢測(cè)項(xiàng)目要求。4.2.1.9 采血完成后的穿刺針頭必須丟棄于放置尖銳危險(xiǎn)品容器內(nèi)，妥善處理，防止發(fā)生職業(yè)暴露。4.2.2 濾紙干血斑4.2.2.1

20、根據(jù)需要，可將采集的各種血液樣品制備成濾紙干血斑，用于檢測(cè)。最常用的是用抗凝全血、末梢全血和血漿制備濾紙干血斑。4.2.2.2 用移液器從樣品管中吸取100pL抗凝全血（或血漿），對(duì)準(zhǔn)濾紙印圈的中心處，將樣品滴在濾紙上，或?qū)⒋┐毯笞云つw傷口流出的末梢全血直接滴加在濾紙印圈的中心處。4.2.2.3 根據(jù)需要，連續(xù)在數(shù)個(gè)印圈上滴加樣品。4.2.2.4 于室溫下自然干燥至少4小時(shí)（潮濕氣候下至少干燥24小時(shí)），不要加熱或堆疊血斑，勿與其它界面接觸。4.2.2.5 血斑充分干燥后，將其放入密封袋中，每張干血斑單獨(dú)保存，避免血斑之間的相互污染，同時(shí)放入干燥劑及濕度指示卡，密封包裝，保存?zhèn)溆谩?.2.3

21、尿液和口腔黏膜滲出液4.2.3.1 尿液：推薦使用專用采尿管，保持尿液穩(wěn)定。尿液樣品可采集隨機(jī)尿，女性經(jīng)期應(yīng)取中段尿。4.2.3.2 口腔黏膜滲出液：使用試劑盒提供的容器收集樣品。存放時(shí)間和是否凍存以試劑盒說(shuō)明書為準(zhǔn)?？谇火つB出液應(yīng)采集口腔滲出液，不是唾液。4.3 樣品的保存4.3.1 用于抗體和抗原檢測(cè)的血清或血漿樣品，短期（1周）內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的可存放于28C,一周以上應(yīng)存放于-20C以下。4.3.2 用于核酸檢測(cè)的血漿和血細(xì)胞樣品4天內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的可存放于4C,3個(gè)月以內(nèi)應(yīng)存放于-20C以下。3個(gè)月以上應(yīng)置于-70C以下保存。4.3.3 口腔黏膜滲出液樣品應(yīng)即刻使用，需要保存應(yīng)以產(chǎn)品說(shuō)明書為

22、準(zhǔn)。4.3.4 尿液樣品，使用專用采尿管，室溫下可保存2周，一年之內(nèi)存放宜在28CO長(zhǎng)期保存（一年以上）的樣本凍存條件、是否添加防腐劑等以產(chǎn)品說(shuō)明書為準(zhǔn)。4.3.5 用于CD4+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)的全血樣品，室溫保存，時(shí)間不超過(guò)24小時(shí)。如果用CD45設(shè)門，樣品彳存不超過(guò)72小時(shí)。4.3.6 篩查陽(yáng)性樣品應(yīng)及時(shí)進(jìn)行補(bǔ)充試驗(yàn)，篩查陰性樣品，可根據(jù)具體需要決定保存時(shí)間，建議至少保存1個(gè)月。特殊用途或?qū)ｍ?xiàng)項(xiàng)目的樣品根據(jù)具體要求確定保存時(shí)間。補(bǔ)充試驗(yàn)陽(yáng)性樣品按照國(guó)家生物樣品管理的有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。4.4 樣品的運(yùn)送4.4.1 全血、血漿的運(yùn)送應(yīng)符合生物安全要求，參照可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣

23、本運(yùn)輸管理規(guī)定（衛(wèi)生部第45號(hào)令,2006年2月1日?qǐng)?zhí)行）。4.4.2 血液樣品運(yùn)送時(shí)應(yīng)采用三層容器對(duì)樣品進(jìn)行包裝，隨樣品應(yīng)附有與樣品唯一性編碼相對(duì)應(yīng)的送檢單。送檢單應(yīng)標(biāo)明受檢者姓名、樣品種類等信息，并應(yīng)放置在第二層和第三層容器之間。4.4.2.1 第一層容器：直接裝樣品，應(yīng)防滲漏。樣品應(yīng)置于帶蓋的試管內(nèi)，試管上應(yīng)有明顯的標(biāo)記，標(biāo)明樣品的唯一性編碼或受檢者姓名、種類和采集時(shí)間。在試管的周圍應(yīng)墊有緩沖吸水材料，以免碰碎。4.4.2.2 第二層容器：容納并保護(hù)第一層容器，可以裝若干個(gè)第一層容器。要求不易破碎、帶蓋、防滲漏、容器的材料要易于消毒處理。4.4.2.3 第三層容器：容納并保護(hù)第二層容器的

24、運(yùn)輸用外層包裝箱。外面要貼上醒目的標(biāo)簽，注明數(shù)量、收樣和發(fā)件人及聯(lián)系方式，同時(shí)要注明“小心輕放、防止日曬、小心水浸、防止重壓”等字樣，還應(yīng)易于消毒。4.4.2.4 用于抗體檢測(cè)的血清和血漿樣品應(yīng)在凍存條件下運(yùn)送用于CD4和CD8+T淋巴細(xì)胞測(cè)定的樣品應(yīng)在室溫下（1825C）運(yùn)送。用于病毒載量檢測(cè)的樣品應(yīng)在-20C以下運(yùn)輸。DBS和尿液樣品應(yīng)在室溫下（1825C）運(yùn)送，可通過(guò)郵寄方式運(yùn)送。4.4.2.5 運(yùn)送樣品必須有記錄。4.5 樣品的接收4.5.1 樣品包裹必須在具有處理感染性材料能力的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)、由經(jīng)過(guò)培訓(xùn)的工作人員打開，打開包裹時(shí)應(yīng)穿戴防護(hù)衣、戴口罩和防護(hù)眼鏡，在生物安全柜中打開，用后的包

25、裹應(yīng)及時(shí)進(jìn)行消毒。4.5.2 核對(duì)樣品與送檢單，檢查樣品管有無(wú)破損和溢漏。如發(fā)現(xiàn)溢漏應(yīng)立即將尚存留的樣品移出，對(duì)樣品管和盛器消毒，同時(shí)報(bào)告實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人和上一級(jí)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員。4.5.3 檢查樣品的狀況，記錄血液樣品有無(wú)嚴(yán)重溶血、微生物污染、血脂過(guò)多以及黃疸等情況。記錄干血斑和尿液樣品包裝是否完整，如果污染過(guò)重或者不符合接收要求，應(yīng)將樣品安全廢棄。并立即將樣品情況通知送樣人，要求重新采集樣品。4.5.4 接收樣品時(shí)應(yīng)填寫樣品接收單。第二章HIV抗體檢測(cè)1范圍本章規(guī)定了HIV抗體的檢測(cè)方法、結(jié)果報(bào)告及質(zhì)量控制。適用于各級(jí)各類醫(yī)療、疾病預(yù)防控制、檢驗(yàn)檢疫、采供血及衛(wèi)生保健機(jī)構(gòu)。可作為對(duì)HIV感染者診

26、斷和監(jiān)測(cè)的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。2規(guī)范性文件引用艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標(biāo)準(zhǔn)（中華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，WS293有效版本）。ConsolidatedGuidelinesonHIVTestingServices.WHOJuly2015StatementfromtheSurveillanceandSurveyWorkingGroupandtheLaboratoryWorkingGrouptotheOfficeoftheGlobalAIDSCoordinator.26Nov.2006.GuidelinesforusingHIVtestingtechnologiesinsurveillance.UNAID

27、S/WHO.2009.艾滋病病毒抗體快速檢測(cè)技術(shù)手冊(cè)（中國(guó)疾病預(yù)防控制中心，2011年版。3 HIV抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室要求應(yīng)符合國(guó)家對(duì)實(shí)驗(yàn)室生物安全的有關(guān)要求。實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制按本規(guī)范相關(guān)章節(jié)規(guī)定執(zhí)行。4 HIV抗體檢測(cè)的目的和要點(diǎn)4.1 HIV抗體檢測(cè)的目的4.1.1 HIV抗體檢測(cè)可用于診斷、血液篩查、監(jiān)測(cè)等。4.1.2 以診斷為目的的檢測(cè)是為了確定個(gè)體HIV感染狀況，包括臨床檢測(cè)、自愿咨詢檢測(cè)、根據(jù)特殊需要進(jìn)行的體檢等。4.1.3 以血液篩查為目的的檢測(cè)是為了防止輸血傳播HIV,包括獻(xiàn)血員篩查和原料血漿篩查。4.1.4 以監(jiān)測(cè)為目的的檢測(cè)是為了解不同人群HIV感染率及其變化趨勢(shì)，包括各類高危

28、人群、重點(diǎn)人群和一般人群。4.2 HIV抗體檢測(cè)的要點(diǎn)4.2.1 根據(jù)目的選擇檢測(cè)方法及檢測(cè)策略。4.2.2 嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP。4.2.3 結(jié)果判定以試劑盒說(shuō)明書為標(biāo)準(zhǔn)。4.2.4 篩查試驗(yàn)有反應(yīng)，須作補(bǔ)充試驗(yàn)。補(bǔ)充試驗(yàn)是通過(guò)檢測(cè)樣本中是否存在艾滋病病毒抗體、抗原或者核酸而確定艾滋病病毒感染的檢測(cè)方法。補(bǔ)充試驗(yàn)包括抗體確證試驗(yàn)（免疫印跡試驗(yàn)，條帶/線性免疫試驗(yàn)，特定條件*下的替代檢測(cè)，免疫層析或免疫滲濾試驗(yàn)）和核酸試驗(yàn)（核酸定性和核酸定量試驗(yàn)）。替代檢測(cè)包括三種酶聯(lián)免疫試驗(yàn)、三種快速試驗(yàn)或酶聯(lián)免疫加快速試驗(yàn)*特定條件：高流行地區(qū)（流行率大于5%、高危人群（如男男同性戀，吸毒人

29、群）、三種試劑均經(jīng)過(guò)使用地區(qū)中心實(shí)驗(yàn)室評(píng)價(jià)。4.2.5 篩查試驗(yàn)無(wú)反應(yīng)，不應(yīng)做補(bǔ)充試驗(yàn)4.2.6 對(duì)篩查及補(bǔ)充試驗(yàn)對(duì)象均應(yīng)做好咨詢工作。5常規(guī)HIV抗體檢測(cè)方法5.1 試劑和樣品必須是經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局注冊(cè)批準(zhǔn)、在有效期內(nèi)的試劑。推薦使用臨床質(zhì)量評(píng)估敏感性和特異性高的方法及試劑。樣品可采用血清、血漿、全血、濾紙干血斑、口腔黏膜滲出液和尿液。5.2 方法5.2.1 篩查方法5.2.1.1 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）這類試驗(yàn)可使用血液（包含血清、血漿和濾紙干血斑）、尿液樣品，ELISA多為HIV抗體檢測(cè)試劑。HIV抗原抗體聯(lián)合檢測(cè)試劑可同時(shí)檢測(cè)血液中HIV-1P24抗原和HIV-1/2

30、抗體。HIV抗原/抗體包被于固相載體，加入待檢樣品和酶標(biāo)記的HIV抗原/抗體，加底物顯色，用酶標(biāo)儀測(cè)定結(jié)果。有效試驗(yàn)的陰性和陽(yáng)性對(duì)照必須符合試劑盒規(guī)定。5.2.1.2 化學(xué)發(fā)光或免疫熒光試驗(yàn)（CIA/IFA）這類試驗(yàn)采用發(fā)光或熒光底物，可使用血液（包含血清和血漿）、尿液樣品，既可檢測(cè)抗體，也可聯(lián)合檢測(cè)抗原抗體。HIV抗原/抗體包被于固相載體，加入待檢樣品和酶或熒光標(biāo)記的HIV抗原/抗體，加發(fā)光或熒光底物，用發(fā)光或熒光儀測(cè)定結(jié)果。有效試驗(yàn)的陰性和陽(yáng)性對(duì)照必須符合試劑盒規(guī)定。5.2.1.3 快速檢測(cè)（RT）及其它試驗(yàn)這類試驗(yàn)可使用血液、口腔黏膜滲出液，操作簡(jiǎn)便快速，適用于應(yīng)急檢測(cè)、門診急診檢測(cè)、V

31、CT及檢測(cè)點(diǎn)等。一般可在1030分鐘內(nèi)得出結(jié)果。明膠顆粒凝集試驗(yàn)（PA）:是HIV抗體檢測(cè)的一種簡(jiǎn)便方法。將HIV抗原致敏的明膠顆粒，與待檢樣品作用。當(dāng)待檢樣品含有HIV抗體時(shí)，明膠顆粒與抗體發(fā)生凝集反應(yīng)，根據(jù)凝集情況判讀結(jié)果。PA試劑有兩種：同時(shí)檢測(cè)HIV-1和HIV-2抗體以及分別檢測(cè)HIV-1和HIV-2抗體。有效試驗(yàn)的陰性和陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)控，需符合試劑盒的規(guī)定。免疫滲濾試驗(yàn)：斑點(diǎn)ELISA和斑點(diǎn)免疫膠體金（或膠體硒）快速試驗(yàn)：均以硝酸纖維膜為載體，HIV抗原點(diǎn)狀或線狀固定在膜上，加待檢樣品，利用微孔濾膜的可濾過(guò)性，使抗原抗體反應(yīng)。陽(yáng)性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色斑點(diǎn)或條帶。反應(yīng)時(shí)間在10分

32、鐘以內(nèi)。有效試驗(yàn)的質(zhì)控點(diǎn)必須顯色。免疫層析試驗(yàn)：以硝酸纖維膜為載體，HIV抗原線狀固定在膜上，待檢樣品沿著固相載體遷移，陽(yáng)性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色條帶。有效試驗(yàn)的質(zhì)控帶必須顯色。反應(yīng)時(shí)間在30分鐘以內(nèi)。5.2.2 抗體確證試驗(yàn)5.2.2.1 免疫印跡試驗(yàn)（W$W的使用血清、血漿和濾紙干血斑。W睬用間接法檢測(cè)樣品中的抗HIV-1/HIV-2特異性抗體。采用聚丙烯酰胺凝膠電泳把分子量大小不等的HIV-1蛋白分離開來(lái)，然后再把這些分離的不同蛋白帶轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上（或PVDF膜）。將此膜切割成條狀，每一膜條上均含有經(jīng)電泳分離過(guò)的HIV抗原。待測(cè)樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋后，加至硝酸纖維素膜上，恒溫震蕩，

33、使其充分接觸反應(yīng)，血清中若含有HIV抗體，就會(huì)與膜條上抗原帶相結(jié)合。加入抗人-IgG酶結(jié)合物和底物后，根據(jù)出現(xiàn)條帶情況，按照試劑盒說(shuō)明書判定標(biāo)準(zhǔn)，判斷待測(cè)樣品為陽(yáng)性、陰性或不確定。5.2.2.2 條帶/線性免疫試驗(yàn)（RIBA/LIA）RIBA/LIA采用間接法檢測(cè)樣品中的抗HIV-1/HIV-2特異性抗體。試劑盒的膜條上包被有HIV-1/HIV-2不同的重組抗原片段，加入待測(cè)樣品后，其中的相應(yīng)抗體與抗原發(fā)生特異性的免疫反應(yīng)；隨后加入抗人IgG（堿性磷酸酶標(biāo)記）與HIV特異性IgG抗體相結(jié)合；加入顯色底物后，在堿性磷酸酶的催化下，特異性抗體的結(jié)合部位出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的條帶，按照試劑盒說(shuō)明書判定標(biāo)準(zhǔn)，

34、判斷待測(cè)樣品為陽(yáng)性、陰性或不確定。5.2.2.3 其他方法：可用于確證的特定條件下的三種酶聯(lián)免疫、三種快速試驗(yàn)或酶聯(lián)加快速試驗(yàn)，免疫層析和免疫滲濾試驗(yàn)。6結(jié)果報(bào)告6.1 篩查報(bào)告HIV抗體篩查試驗(yàn)報(bào)告使用附表1（HIV抗體篩查檢測(cè)報(bào)告）。篩查試驗(yàn)無(wú)反應(yīng)報(bào)告為“HIV抗體陰性”；有反應(yīng)必須進(jìn)行復(fù)檢，復(fù)檢兩次檢測(cè)均無(wú)反應(yīng)報(bào)告為“HIV抗體陰性”，復(fù)檢檢測(cè)均有反應(yīng)或一個(gè)有反應(yīng)一個(gè)無(wú)反應(yīng)需進(jìn)行“補(bǔ)充試驗(yàn)”；報(bào)告為“HIV感染待確定”，不能出具陽(yáng)性報(bào)HIV抗體篩查報(bào)告需由一名檢驗(yàn)人員和一名審核者簽字。6.2 確證報(bào)告6.2.1 WB及RIBA/LIA報(bào)告HIV抗體W吸RIBA/LIA試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告使用附表

35、2(HIV抗體確證檢測(cè)報(bào)告)。(1)符合HIV-1抗體陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)，報(bào)告“HIV-1抗體陽(yáng)性”，并按規(guī)定做好檢測(cè)后咨詢和疫情報(bào)告。符合HIV-2抗體陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)，報(bào)告“HIV-2抗體陽(yáng)性”，并按規(guī)定做好檢測(cè)后咨詢和疫情報(bào)告。(2)符合HIV抗體陰性判斷標(biāo)準(zhǔn)，報(bào)告“HIV抗體陰性”。如疑似“窗口期”感染，建議進(jìn)一步做HIV核酸檢測(cè)或2-4周后隨訪，盡早明確診斷。(3)符合HIV抗體不確定判斷標(biāo)準(zhǔn)，報(bào)告“HIV抗體不確定”，在備注中應(yīng)注明“2-4周后復(fù)檢”或盡快做核酸檢測(cè)。(4)HIV抗體確證檢測(cè)報(bào)告應(yīng)在收到樣品后的7個(gè)工作日內(nèi)發(fā)出。6.2.2 特定條件的用于確證的三種酶聯(lián)免疫、三種快速試驗(yàn)或酶聯(lián)

36、加快速試驗(yàn)報(bào)告。見(jiàn)附表4。7質(zhì)量控制7.1 酶免或發(fā)光法抗體檢測(cè)的室內(nèi)質(zhì)量控制7.1.1 試劑盒內(nèi)部對(duì)照試劑J盒內(nèi)部對(duì)照質(zhì)控品即為試劑盒內(nèi)提供的陽(yáng)性和陰性對(duì)照。試齊I盒內(nèi)部對(duì)照用于判斷每次實(shí)驗(yàn)的有效性，不能作為室內(nèi)質(zhì)控品使用。每一次檢測(cè)臨床樣品時(shí)，必須有試劑盒內(nèi)部對(duì)照，而且只能在同批號(hào)的試劑盒中使用。如內(nèi)部對(duì)照結(jié)果無(wú)效，必須重新試驗(yàn)。7.1.2 室內(nèi)質(zhì)控品為非試劑盒組份的外部質(zhì)控品，是為了監(jiān)控檢測(cè)的重復(fù)性而設(shè)置的，質(zhì)控品定值必須為弱陽(yáng)性。外部質(zhì)控品的作用是判斷該批臨床樣品檢測(cè)的可信性。因此，每次實(shí)驗(yàn)必須包含室內(nèi)質(zhì)控品，出現(xiàn)失控時(shí)，必須重新試驗(yàn)。室內(nèi)質(zhì)控品可以購(gòu)買或?qū)嶒?yàn)室自行制備。質(zhì)控品應(yīng)穩(wěn)定、

37、無(wú)菌、且不含有影響試劑反應(yīng)的防腐劑。7.1.3 Levey-Jennings質(zhì)控圖7.1.3.1 質(zhì)控圖參數(shù)外部質(zhì)控品的均值和標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)建立在實(shí)驗(yàn)室常規(guī)使用方法對(duì)外部質(zhì)控品重復(fù)測(cè)定的基礎(chǔ)上。一般采用在不同批次檢測(cè)取得至少20個(gè)數(shù)據(jù)；如果僅做少量批次的檢測(cè)，也至少做5個(gè)批次的檢測(cè)，每個(gè)批次中不少于4個(gè)質(zhì)控血清測(cè)定結(jié)果，以建立一個(gè)臨時(shí)性的均值和標(biāo)準(zhǔn)差，當(dāng)達(dá)到20批次數(shù)據(jù)后，替代臨時(shí)性的均值和標(biāo)準(zhǔn)差。（1）算術(shù)平均值（X）:代表一組質(zhì)控品測(cè)定S/CO值的均值。為了統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性意義，應(yīng)該采用至少20次（天）測(cè)得的外部對(duì)照質(zhì)控品的S/CO值計(jì)算平均值。（2）標(biāo)準(zhǔn)差（s）:是描述樣品與均數(shù)之間離散程度的

38、一個(gè)指標(biāo)，是與質(zhì)控品S/CO值均值有關(guān)的預(yù)期范圍。一組S/CO值的標(biāo)準(zhǔn)差以s表示。（3）變異系數(shù)（cv）：是反映各次S/CO值相對(duì)于均值離散程度的一個(gè)指標(biāo)，可以用來(lái)衡量檢測(cè)的重復(fù)性或精密度。(4)控制限：由實(shí)驗(yàn)室根據(jù)對(duì)外部質(zhì)控品檢測(cè)結(jié)果的均值和標(biāo)準(zhǔn)差來(lái)確定。例如，按照12S質(zhì)控規(guī)則，控制限為外部質(zhì)控品S/CO均值加減2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差；按照13S質(zhì)控規(guī)則，控制限為外部質(zhì)控品S/CO均值加減3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差。7.1.3.2 質(zhì)控規(guī)則實(shí)驗(yàn)室在報(bào)告結(jié)果之前必須評(píng)價(jià)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，可通過(guò)圖形記錄的檢查或由計(jì)算機(jī)審核結(jié)果來(lái)決定。目前有許多質(zhì)控規(guī)則，常用的是12S和13S規(guī)則。(1)告警(缶)：當(dāng)外部質(zhì)控品的S/CO值超出又

39、+2s范圍時(shí)，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，是否可以繼續(xù)檢測(cè)需要進(jìn)一步觀察。若將12S做失控標(biāo)準(zhǔn)，有較高的假失控概率，所以一般不采用。(2)失控(13S)：當(dāng)外部質(zhì)控品的S/CO值超出7+3S范圍時(shí)，系統(tǒng)處于失控狀態(tài)，本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能被接受，可能是系統(tǒng)誤差、隨機(jī)誤差或外部質(zhì)控品穩(wěn)定性下降所致。7.1.3.3 質(zhì)控圖的分析及失控處理實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立質(zhì)控圖分析及失控情況處理的程序。當(dāng)出現(xiàn)失控時(shí)，必須找出發(fā)生問(wèn)題的原因，找出解除問(wèn)題的方法，并消除原因。7.1.4 室內(nèi)質(zhì)控其他方式一“即刻法”質(zhì)控“即刻法”質(zhì)控方法是在對(duì)同一批外部質(zhì)控品連續(xù)測(cè)定3次后，即可對(duì)第3次以后的檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行質(zhì)控。具體計(jì)算方法如下：7

40、.1.4.1 將質(zhì)控品的測(cè)定值從小到大排列：X1,X2,X3Xn(Xi為最小值，Xn為最大值)7.1.4.2 計(jì)算X和s。7.1.4.3 計(jì)算SI上限值和SI下限值。X最大值-ISI上限二SX-X最小值SI下限二S7.1.4.4將SI上限、SI下限與SI值表(表1)中的數(shù)字比較。表1SI值表NN2snn3sNs31.161.15122.552.2941.491.46132.612.3351.751.67142.662.3761.941.82152.712.4172.101.94162.752.4482.222.03172.792.4792.322.11182.822.50102.412.181

41、92.852.53112.482.23202.882.56(1)當(dāng)SI上限和SI下mn2s時(shí)表示處于控制范圍內(nèi)，可以繼續(xù)測(cè)定繼續(xù)重復(fù)以上各項(xiàng)計(jì)算(2)當(dāng)SI上限和SI下限有一值處于n2sn3s值之間時(shí)說(shuō)明該值在2s3s范圍，處于“告警”狀態(tài)。(3)當(dāng)SI上限和SI下限有一值,n3s值時(shí)說(shuō)明該值已在3s范圍之外，屬“失控”?！凹纯谭ā敝荒茉谇?0次內(nèi)使用，超出即可采用L-J質(zhì)控圖方法。7.2 快速法抗體檢測(cè)質(zhì)控7.2.1 試劑內(nèi)對(duì)照在質(zhì)控窗口內(nèi)出現(xiàn)質(zhì)控帶，該質(zhì)控帶是試劑自帶的內(nèi)部過(guò)程質(zhì)控，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)操作全部完成并且實(shí)驗(yàn)所用材料處于工作狀態(tài)。清潔的檢測(cè)區(qū)背景是內(nèi)部陰性過(guò)程質(zhì)控。如實(shí)驗(yàn)完成后未呈現(xiàn)紅色

42、質(zhì)控帶，說(shuō)明試劑盒內(nèi)質(zhì)控?zé)o效，該試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效，樣品須重檢。7.2.2 室內(nèi)質(zhì)控品對(duì)照外部質(zhì)控品可采用商用質(zhì)控品或自制質(zhì)控品。質(zhì)控品應(yīng)包含抗體陽(yáng)性樣品和陰性樣品。自制質(zhì)控品可使用本室保留的陽(yáng)性樣品，。下列情況需做質(zhì)量控制：更換試劑批號(hào)；更換檢測(cè)人員；更換包裝；更換試劑廠家。除此之外，建議每個(gè)檢測(cè)日檢測(cè)一次陽(yáng)性和陰性質(zhì)控品；如果日檢測(cè)量大于50份樣品，至少應(yīng)作2次質(zhì)控。出現(xiàn)以下問(wèn)題，提示存在質(zhì)量隱患，應(yīng)引起重視：運(yùn)輸包裝、內(nèi)盒或試劑盒的物理?yè)p傷；在單包裝內(nèi)存在混雜物質(zhì)；標(biāo)簽出現(xiàn)錯(cuò)誤、缺失或字跡模糊(特別是產(chǎn)品名稱或出產(chǎn)廠家名稱，批號(hào)和貨號(hào)，失效期或/和生產(chǎn)日期)；缺失目錄；泄漏或污染；不適宜的存放

43、條件；保護(hù)包裝紙破損或污染；未達(dá)到質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)（陽(yáng)性/陰性控制結(jié)果以及質(zhì)控條帶出現(xiàn)與否等標(biāo)志）；試劑質(zhì)量問(wèn)題須報(bào)告省確證中心實(shí)驗(yàn)室。7.2.3 開展抗體相關(guān)檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室須參加有資質(zhì)機(jī)構(gòu)組織的能力驗(yàn)證，或室間比對(duì)。第三章HIV-1新發(fā)感染檢測(cè)1范圍本章規(guī)定了HIV新發(fā)感染的檢測(cè)方法、程序、結(jié)果報(bào)告及質(zhì)量控制。適用于開展新發(fā)感染檢測(cè)的各類實(shí)驗(yàn)室。2規(guī)范性文件引用TechnicalupdateonHIVincidenceassaysforsurveillanceandmonitoringprocesses.WHO/UNAIDS.2015.GuidelinesfortheuseoftheBEDassa

44、yforincidenceestimationandsurveillanceinresource-limitedcountries.Atlanta,5June2006.UsingtheBEDHIV-1CaptureEIAAssaytoEstimateIncidenceUsingSTARHSintheContextofSurveillanceintheUnitedStates.Atlanta,Oct2007.3新發(fā)感染檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室要求須經(jīng)過(guò)培訓(xùn)考核合格的艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室，方可開展本項(xiàng)檢測(cè)。4目的了解重點(diǎn)人群HIV-1新發(fā)感染情況，為估計(jì)艾滋病流行形勢(shì)和判斷疫情變化提供科學(xué)依據(jù)。5新發(fā)感染檢測(cè)方法5

45、.1 方法學(xué)原理用于新發(fā)感染檢測(cè)的方法包括HIV-1限制性抗原親和力酶聯(lián)免疫方法(HIV-1LAgAvidityenzymeimmunoassay,LAg-AvidityEIA)和BEDHIV-1捕獲酶聯(lián)免疫方法(BEDcaptureenzymeimmunoassay,BED-CEIA。LAg-AvidityEIA方法的原理是，人體在感染HIV后產(chǎn)生的HIV-1特異性抗體對(duì)相應(yīng)抗原的識(shí)別和結(jié)合能力隨著感染時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，即親和力逐漸增加。而BED-CEIA方法的原理是，HIV特異性IgG占總IgG抗體的比例隨著感染時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸增高。兩種方法均只適用于HIV-1抗體陽(yáng)性樣品。只應(yīng)用于監(jiān)測(cè)目

46、的，不能用于個(gè)體診斷和臨床，其用于監(jiān)測(cè)及發(fā)病率計(jì)算的條件參見(jiàn)“艾滋病病毒新發(fā)感染監(jiān)測(cè)操作手冊(cè)”。目前對(duì)兩種方法的評(píng)價(jià)結(jié)果顯示，LAg-AvidityEIA方法的假陽(yáng)性率較BED-CEI防法低，受疾病狀態(tài)，如CD4田胞計(jì)數(shù)，抗病毒治療等因素的影響較BE昉法小，可以更加準(zhǔn)確地區(qū)分新近感染和長(zhǎng)期感染者。因止匕BED-CEI防法正逐漸被LAg-Avidity日A方法所替代。止匕外，也有快速新發(fā)感染檢測(cè)方法的研究報(bào)道，因其具有快速、簡(jiǎn)便、價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)，未來(lái)對(duì)其需求將會(huì)越來(lái)越多。5.2 方法5.2.1 樣品和信息：來(lái)源于哨點(diǎn)監(jiān)測(cè)和病例報(bào)告系統(tǒng)，用于檢測(cè)的為抗體陽(yáng)性樣本。5.2.2 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)：首選推薦L

47、Ag-Avidity日A,也可使用BED-CEIA5.2.3數(shù)據(jù)分析：根據(jù)哨點(diǎn)監(jiān)測(cè)各人群新發(fā)感染檢測(cè)結(jié)果，結(jié)合流行病學(xué)相關(guān)資料，計(jì)算重點(diǎn)人群HIV-1新發(fā)感染率，并進(jìn)行適當(dāng)校正；根據(jù)病例報(bào)告系統(tǒng)新報(bào)告感染者新發(fā)感染檢測(cè)結(jié)果，計(jì)算新發(fā)感染者占新報(bào)告感染者的比例，并根據(jù)相關(guān)背景信息，綜合分析新發(fā)感染情況。5.3 樣品的入選標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)5.3.1 入選標(biāo)準(zhǔn)(1)新發(fā)感染檢測(cè)必須應(yīng)用診斷為HIV-1抗體陽(yáng)性的血清或血漿樣品，禁止將HIV-1抗體陰性樣品納入新發(fā)感染檢測(cè)。(2)每份樣品量不少于1mL樣品要求清亮、無(wú)嚴(yán)重溶血、沒(méi)有交叉污染，必須保存在-20C以下，反復(fù)凍融次數(shù)不多于三次。5.3.2 排除

48、標(biāo)準(zhǔn)5.3.2.1 LAgAvidityEIA方法(1)如果同一人在六個(gè)月以內(nèi)出現(xiàn)兩份或兩份以上確認(rèn)陽(yáng)性樣品，將第一份樣品納入新發(fā)感染檢測(cè)。(2)所有艾滋病病人的樣品。(3)所有接受抗病毒治療的感染者樣品。5.3.2.2 BED-CEIA方法(1)如果同一人在六個(gè)月以內(nèi)出現(xiàn)兩份或兩份以上確認(rèn)陽(yáng)性樣品，將第一份樣品納入新發(fā)感染檢測(cè)。(2)所有艾滋病病人的樣品。(3)所有接受抗病毒治療的感染者樣品。(4)CD4細(xì)胞200個(gè)/uL者的樣本。5.3.3 相關(guān)要求(1)對(duì)于哨點(diǎn)樣品，進(jìn)行新發(fā)感染檢測(cè)的樣品量必須占應(yīng)檢測(cè)陽(yáng)性樣品的85%U上，否則不納入新發(fā)感染檢測(cè)。(2)哨點(diǎn)樣品必須具有哨點(diǎn)問(wèn)卷編號(hào)，并盡

49、可能補(bǔ)充病例報(bào)告系統(tǒng)卡片ID號(hào)。病例報(bào)告樣品應(yīng)當(dāng)填寫病例報(bào)告系統(tǒng)卡片ID號(hào)5.4 結(jié)果處理和解釋5.4.1 LAg-AvidityEIA方法：5.4.1.1 確定對(duì)照和校準(zhǔn)品的中值OD直（中值OD值為3次OD直排序后中間的值，陰性對(duì)照的中值為兩孔OD值的平均值），對(duì)照和校準(zhǔn)品的中值OD直必須在下表范圍內(nèi)，兩個(gè)NC樣品的OD直都必須在該范圍內(nèi)，該試驗(yàn)才有效。否則，任何一個(gè)對(duì)照和校準(zhǔn)品的中值OD直不在表2范圍內(nèi)，判定為無(wú)效，需要重新稀釋樣品進(jìn)行檢測(cè)。5.4.1.2 計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)OD®（ODn對(duì)照的ODn«=對(duì)照的中值OD直/校準(zhǔn)品的中值OD直初篩試驗(yàn)：各樣品的0口硝=各1品的OD直

50、/校準(zhǔn)品的中值OD直確認(rèn)試驗(yàn)：各樣品的ODn«=各樣品的中值OD直/校準(zhǔn)品的中值OD值任一對(duì)照和校準(zhǔn)品的ODn值必須在下表顯示值的范圍內(nèi)，該試驗(yàn)才有效。否則，如果任何一個(gè)對(duì)照的ODn直不在表3范圍內(nèi)，該試驗(yàn)判定為無(wú)效，需要重新稀釋樣本并進(jìn)行檢測(cè)。5.4.1.3 結(jié)果的解釋初篩試驗(yàn)：樣本進(jìn)行單孔檢測(cè)，當(dāng)ODn直2.0時(shí)，該樣本被判為長(zhǎng)期感染樣本，不需要進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)。當(dāng)樣本的ODn直2.0時(shí)，該樣本需納入確證試驗(yàn)。確認(rèn)試驗(yàn)：初篩試驗(yàn)中ODrn12.0的樣本稀釋三份并三孔重復(fù)檢測(cè)。當(dāng)ODn直1.5,該樣本判為近期感染，當(dāng)ODn11.5時(shí)，該樣本判為長(zhǎng)期感染樣本。5.4.2 BED-CEIA

51、方法5.4.2.1 確定對(duì)照和校準(zhǔn)品的中值OD中值O防3次OD值排序后中間的值），對(duì)照和校準(zhǔn)品的中值OD值必須在表4范圍內(nèi)，該試驗(yàn)才有效。兩個(gè)NC羊品的OD直在初篩和確認(rèn)中都必須在該范圍內(nèi)5.4.2.2 計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)OD®（ODn對(duì)照的ODn«=對(duì)照的中值OD/K準(zhǔn)品白中值OD初篩試驗(yàn)：各樣品的0口硝=各中品的OD直/校準(zhǔn)品的中值OD確認(rèn)試驗(yàn)：各樣品的ODn®=各樣品的中值OD直/校準(zhǔn)品的中值OD對(duì)照和校準(zhǔn)品ODn直的正常范圍：Xt照和校準(zhǔn)品的ODn直必須在要求的范圍內(nèi)，該試驗(yàn)才有效。5.4.2.3 結(jié)果解釋在中國(guó)的研究顯示，BED勺ODn為0.8時(shí)，可以指明平均血清

52、陽(yáng)轉(zhuǎn)時(shí)間為168天。ODn為0.8時(shí)可以減少AIDS病人錯(cuò)分為近期感染的幾率，進(jìn)而得到較好的近期感染的預(yù)測(cè)值。在初篩試驗(yàn)中樣本為單份檢測(cè)，當(dāng)ODn直1.2時(shí)，樣本需分成三份重復(fù)檢測(cè)。在確認(rèn)試驗(yàn)中，若ODn直0.8時(shí)，該份樣品判為近期感染。5.5 數(shù)據(jù)分析5.5.1 LAg-AvidityEIAHIV-1新發(fā)感染率的計(jì)算監(jiān)測(cè)哨點(diǎn)HIV-1新發(fā)感染率是指：各省哨點(diǎn)監(jiān)測(cè)重點(diǎn)人群中，每年新感染HIV-1人群占暴露人群的比例。原則上以省為單位計(jì)算各重點(diǎn)人群新發(fā)感染率。當(dāng)樣品數(shù)量足夠大時(shí)，可以考慮按照地區(qū)計(jì)算新發(fā)感染率，也可以按照設(shè)定的因素（如年齡、性別、感染途徑、婚姻狀況、行為因素、受教育程度、地區(qū)等）

53、對(duì)HIV-1新發(fā)感染率監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行分層分析將新發(fā)感染檢測(cè)數(shù)據(jù)匯總后（參考附件4格式），即可進(jìn)行類似分析。新發(fā)感染率計(jì)算公式：（1）美國(guó)CDG口UNAIDS/WHO薦用于橫斷面研究計(jì)算公式：100%RFRR*P(1FRR*(w/36*N(2) Hargrove校正法:中點(diǎn)公式：I回顧公式：I100%RFRR*P(R/2)N(w/365)FRR*(NP/2)100%RFRR*PRN(w/365)FRR*T變量符號(hào)：待計(jì)算的變量值：I=新發(fā)感染率（高危人群中每100人年新感染的數(shù)量）；在橫斷面調(diào)查中測(cè)量的變量值：！=調(diào)查的總?cè)藬?shù)，P=HIV-1檢測(cè)為陽(yáng)性的總?cè)藬?shù)，N=HIV-1檢測(cè)為陰性的總?cè)藬?shù),R

54、=實(shí)驗(yàn)判定為新近感染的總?cè)藬?shù)；從單獨(dú)的校準(zhǔn)研究中獲得的變量值：w=窗口期（從血清陽(yáng)轉(zhuǎn)到實(shí)驗(yàn)方法能夠判為新發(fā)感染的最長(zhǎng)時(shí)間），F(xiàn)RR錯(cuò)分率。ODr#于1.5為界值判定新發(fā)感染計(jì)算LAg方法的窗口期為130天感染時(shí)間超過(guò)一年且未接受ART治療HIV感染者獲得的FR時(shí)2.30%。5.5.2BEDHIV-1新發(fā)感染率的計(jì)算監(jiān)測(cè)哨點(diǎn)各類人群HIV-1新發(fā)感染率。同親和力方法。新發(fā)感染率有McDougal和Hargrove兩種計(jì)算法（在中國(guó)推薦優(yōu)先使用McDougal計(jì)算法），每種方法均有中點(diǎn)公式和回顧公式。回顧公式是對(duì)在橫斷面抽樣前一年的新發(fā)感染率估計(jì)，中點(diǎn)公式是對(duì)在橫斷面抽樣約+/-6個(gè)月時(shí)的新發(fā)感染

55、率估計(jì)。（1） McDougal法(調(diào)整靈敏度/特異度)F(365/w)R100%NF(365/w)R/2回顧公式：IF(365/w)R100%NF(365/w)R(R/P)(21)校正因子F：F®P)1100%（2） Hargrove法（調(diào)整特異度）中點(diǎn)公式：I回顧公式：IRP100%(R/2)N(w/365)N(P/2)RPR一P100%RN(w/365)T變量符號(hào)：待計(jì)算的變量值：I=新發(fā)感染率（高危人群中每100人年新感染的數(shù)量），F(xiàn)=調(diào)整靈敏度或特異度的調(diào)整因子；在橫斷面調(diào)查中測(cè)量的變量值：！=調(diào)查的總?cè)藬?shù)，P=HIV-1檢測(cè)為陽(yáng)性的總?cè)藬?shù)，N=HIV-1檢測(cè)為陰性的總?cè)藬?shù)，R=實(shí)驗(yàn)判定為新近感染的總?cè)藬?shù)；從單獨(dú)的校準(zhǔn)研究中獲得的變量值：w=窗口期（從血清陽(yáng)轉(zhuǎn)到實(shí)驗(yàn)方法能夠判為新發(fā)感染的最長(zhǎng)時(shí)間），=實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)新發(fā)感染（1w）的靈敏度，（3=實(shí)驗(yàn)方法對(duì)感染時(shí)間在1w-2w天樣品的特異度，丫=實(shí)驗(yàn)方法對(duì)感染時(shí)間超過(guò)2w天樣品的特異度，£=實(shí)驗(yàn)方法對(duì)感染時(shí)間超過(guò)2w天樣品的誤判率我國(guó)BED方法HIV