YH-QMS-SP-305-A培養(yǎng)基配制使用操作規(guī)范

1、砂湖南佑華醫(yī)療用品有限公司 培養(yǎng)基配制使用操作規(guī)范版權(quán)所有，注意保名YH-QMS-SP-305Rev A第1頁共5頁制定：簽名審核：簽名批準(zhǔn)：簽名制定：審核：批準(zhǔn)：版本號修改日期修改內(nèi)容描述A2020.3.16首次發(fā)布砂湖南佑華醫(yī)療用品有限公司 培養(yǎng)基配制使用操作規(guī)范版權(quán)所有，注意保名YH-QMS-SP-305Rev A第2頁共5頁1.0 目的規(guī)定培養(yǎng)基的配制、使用、操作流程。2.0 范圍適用于本公司所有培養(yǎng)基的配制使用操作。3.0 職責(zé)質(zhì)量法規(guī)部：? 微生物檢驗員負(fù)責(zé)培養(yǎng)基的管理、配制、使用及操作。? 微生物檢驗員負(fù)責(zé)整個操作過程的記錄。? 質(zhì)量負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)數(shù)據(jù)的審核。4.0 工作要求4.1

2、培養(yǎng)基的驗收? 收到培養(yǎng)基后，應(yīng)檢查包裝情況和完整性，保質(zhì)期是否符合要求。? 每批每種的培養(yǎng)基到貨后，有提供靈敏度測試，核對靈敏測試報告。無靈敏度測試報告的進(jìn) 行測試，合格后方可用于試驗。4.2 培養(yǎng)基的儲存嚴(yán)格按照培養(yǎng)基說明書儲存培養(yǎng)基。4.3 培養(yǎng)基的開封對于開封的脫水培養(yǎng)基，應(yīng)對其質(zhì)量進(jìn)行檢查。質(zhì)量檢查包括：粉末的流動性、均勻性、結(jié) 塊情況和色澤變化等。若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基受潮或物理性狀發(fā)生明顯改變（結(jié)塊、褪色等）時，則不應(yīng) 再使用。4.4 培養(yǎng)基的配制? 嚴(yán)格按照廠商提供的使用說明配制。? 分裝好的培養(yǎng)基及時密封后必須在配制當(dāng)天（ 2h內(nèi)最佳）進(jìn)行滅菌處理。所有培養(yǎng)基都是 熱敏感的，不要超時加

3、熱。? 配制批號編號規(guī)則：配制日期 +兩位流水號? 稱量：稱取適量的脫水培養(yǎng)基于合適的容器中。? 溶解：先加入少量的純化水，充分混合，再加水至所需的量，并不停攪拌至完全溶解。? 分裝：將配制好的培養(yǎng)基分裝到適當(dāng)?shù)娜萜髦?。分裝量不得超過容器容積的2/3。砂湖南佑華醫(yī)療用品有限公司 培養(yǎng)基配制使用操作規(guī)范版權(quán)所有，注意保名YH-QMS-SP-305Rev A第3頁共5頁? 標(biāo)簽：在已配制好的培養(yǎng)基瓶上注明：培養(yǎng)基名稱、配制時間，并記錄于培養(yǎng)基配制記錄 表中。4.5 培養(yǎng)基的滅菌按照培養(yǎng)基說明書上的滅菌條件對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌。培養(yǎng)基不能重復(fù)滅菌。4.6 培養(yǎng)基 的融化? 已凝固的培養(yǎng)基可放于沸水浴中或

4、使用相同效果的方法（如高壓鍋中的蒸汽）進(jìn)行融化。? 培養(yǎng)基融化后放入 47 c 2C的恒溫水浴鍋或使用有相同效果的方法（如高壓鍋中的蒸汽）中保溫，直至使用。? 注：經(jīng)過高壓的培養(yǎng)基應(yīng)盡量減少重復(fù)加熱時間，固體培養(yǎng)基的再融化只允許一次，避免過度加熱。融化后的培養(yǎng)基應(yīng)盡快使用，放置時間一般不應(yīng)超過4h。4.7 平板的制備? 傾注已融化的培養(yǎng)基到滅菌平皿中，直至在平皿中形成一個至少2mm厚的瓊脂層（直徑90mm的平皿通常要加入 15mL瓊脂培養(yǎng)基）。? 將平皿蓋好皿蓋后放在水平平面上使瓊脂冷卻凝固。4.8 培養(yǎng)基的培養(yǎng)及質(zhì)量控制? 分裝后的培養(yǎng)基要按配制批號隨機抽取2PCS的樣品進(jìn)行陰性對照培養(yǎng)。應(yīng)

5、無菌生長。? 用于需氧菌培養(yǎng)的培養(yǎng)基置30 C35 c培養(yǎng)不少于48h ;用于霉菌和酵母菌培養(yǎng)的培養(yǎng)基置2025 C培養(yǎng)不少于72h。4.9 制備好的培養(yǎng)基的儲存制備好的培養(yǎng)基可儲存于 2 C-8 c密閉容器中，其使用期限為一周。4.10 培養(yǎng)基的棄置? 所有已超過使用期限或已污染的培養(yǎng)基應(yīng)不再使用。? 已使用的培養(yǎng)基（包括失效的培養(yǎng)基），放入高壓滅菌器中進(jìn)行高壓滅菌處理（12lC,30min）后廢棄。4.11 培養(yǎng)基的靈敏檢查4.11.1 準(zhǔn)備好制備合格的培養(yǎng)基。4.11.2 依照菌液說明制備菌懸液。?梯度稀釋”示例：用移液器吸取1mL菌懸液原液加到裝有 9 mL無菌生理鹽水的試管中，震蕩混

6、勻，即為“10菌懸液”；用移液器吸取1ml “101菌懸液”加到裝有9mL無菌生理鹽水的 試管中，震蕩混勻，即為“1G菌懸液”；依次類推。砂湖南佑華醫(yī)療用品有限公司 培養(yǎng)基配制使用操作規(guī)范版權(quán)所有，注意保名YH-QMS-SP-3051Rev AI 第 4 頁共 5 頁2mL菌懸液，分別加到2塊無菌空平皿內(nèi),選取合適的稀釋梯度的菌懸液，分別用移液器吸取每皿1mL 。? 將冷卻到45 c左右的相應(yīng)培養(yǎng)基分別注入平皿中，與菌懸液充分混勻，凝固后倒置培養(yǎng)。 根據(jù)相應(yīng)菌種設(shè)置培養(yǎng)溫度及培養(yǎng)時間。? 菌懸液原液置于2-8 C冰箱內(nèi)保藏。? 菌懸液在室溫下放置應(yīng)在 2h內(nèi)使用，若保存在 2-8 C可在24h

7、內(nèi)使用。黑曲霉抱子懸液可 保存在2-8 C,在驗證過的貯存期內(nèi)使用。4.11.3 培養(yǎng)基靈敏度檢測? 根據(jù) 菌液制備”的計數(shù)結(jié)果，確定含菌量為不大于100cfu的稀釋梯度。? 用0.9%無菌氯化鈉溶液（或含 0.05% （ml/ml）聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液）將 菌懸液原液梯度稀釋至含菌量為50100cfu的菌懸稀釋液，作為試驗用菌懸液待用。? 按照以下方法進(jìn)行接種、培養(yǎng)。珞加生名稱接種、培赤方法硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（向氨國土甘笠廣生） .取每管裝量不少于12ml的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基7支，分別接種不大于100cfu的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌人 生抱梭菌各2支。另1支不接種作為

8、空白對照，30-35C培養(yǎng)不少于3天。逐日觀察結(jié)果。同時，用相應(yīng)的對照培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基同法操作。胰酪大豆月東液體培養(yǎng)基（TSB）:取每管裝量不少于 9ml的胰酪大豆月東液體培養(yǎng)基（TSB）培養(yǎng)基7支，分別接種不大于100cfu的枯草芽抱桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支。另1支不接種作為空白對照，20-25C培養(yǎng)5天。逐日觀察結(jié)果。同時，用相應(yīng)的對照培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基同法操作。沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基：取每管裝量不少于9ml的沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基7支，分別接種50100cfu的大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌各2支。另1 支不接種作為空白對照，3035 C培養(yǎng)3天。逐日觀察結(jié)果。同時，用

9、相應(yīng)的對照培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基同法操作。胰蛋白月東大豆瓊脂培（ ISA培喬基）:取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽抱桿菌不大于100cfu ,分別注入無菌平皿中，立即傾注 ISA培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備 2個平皿， 混勻，凝固，置 3035 c培養(yǎng)3天，計數(shù)。同時，用相應(yīng)的對照培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基同法操作。砂湖南佑華醫(yī)療用品有限公司 培養(yǎng)基配制使用操作規(guī)范版權(quán)所有，注意保名YH-QMS-SP-3051Rev AI 第 5 頁共 5 頁沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基：取金黃色葡.萄球菌、銅假綠單胞菌、枯草芽抱桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各小于100cfu ,分別注入無菌平皿中，立即傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備 2個平皿，混勻，凝固，置 2025 C培養(yǎng)5天， 計數(shù)。同時，用相應(yīng)的對照培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基同法操作。?空白對照管應(yīng)無菌生長，若加菌的培養(yǎng)基管 （與加菌的對照培養(yǎng)基管）均生長良好，判該培