實驗一細菌形態(tài)學(xué)檢查ppt課件

1、實驗一實驗一 細菌形狀學(xué)檢查細菌形狀學(xué)檢查 生物平安生物平安n1、進入實驗室必需穿白大褂，離室時脫下反折；無菌操作時必需戴口、進入實驗室必需穿白大褂，離室時脫下反折；無菌操作時必需戴口罩。罩。n2、不用要物品勿帶入實驗室，必要的文具、實驗指點和筆記本應(yīng)放在、不用要物品勿帶入實驗室，必要的文具、實驗指點和筆記本應(yīng)放在指定的操作區(qū)。指定的操作區(qū)。n3、實驗室內(nèi)制止帶入飲食，抽煙，不得高聲談笑或隨意走動。、實驗室內(nèi)制止帶入飲食，抽煙，不得高聲談笑或隨意走動。n4、需培育的物品應(yīng)做好標(biāo)志放在指定地點。用過的有菌器材必需放在、需培育的物品應(yīng)做好標(biāo)志放在指定地點。用過的有菌器材必需放在消毒缸內(nèi)，小心處置傳

2、染資料、培育物和污染的物品。消毒缸內(nèi)，小心處置傳染資料、培育物和污染的物品。n5、防止任何有菌資料的濺出，假設(shè)不甚污染任務(wù)臺、手、眼、衣服和、防止任何有菌資料的濺出，假設(shè)不甚污染任務(wù)臺、手、眼、衣服和地面等處，應(yīng)立刻報告教師及時適當(dāng)處置。地面等處，應(yīng)立刻報告教師及時適當(dāng)處置。n6、實驗終了后物歸原處，并清潔桌面；肥皂洗手、消毒液浸泡洗凈后，、實驗終了后物歸原處，并清潔桌面；肥皂洗手、消毒液浸泡洗凈后，封鎖水、電、煤氣和門窗方可分開實驗室。封鎖水、電、煤氣和門窗方可分開實驗室。【實驗?zāi)康摹俊緦嶒災(zāi)康摹縩1掌握臨床微生物實驗室規(guī)那么，生物平安及其它掌握臨床微生物實驗室規(guī)那么，生物平安及其它本卷須知

3、。本卷須知。n2掌握顯微鏡油鏡的運用和維護。掌握顯微鏡油鏡的運用和維護。n3熟習(xí)顯微鏡的構(gòu)造和各部分的功能。熟習(xí)顯微鏡的構(gòu)造和各部分的功能。n4不染色和各種染色標(biāo)本的顯微鏡察看。不染色和各種染色標(biāo)本的顯微鏡察看。n5細菌特殊構(gòu)造的染色與察看。細菌特殊構(gòu)造的染色與察看。n【實驗內(nèi)容】【實驗內(nèi)容】n光學(xué)顯微鏡的運用光學(xué)顯微鏡的運用n不染色標(biāo)本的檢查不染色標(biāo)本的檢查n革蘭氏染色和細菌根本形狀察看革蘭氏染色和細菌根本形狀察看n細菌特殊構(gòu)造染色和察看細菌特殊構(gòu)造染色和察看形狀學(xué)檢查的意義形狀學(xué)檢查的意義n細菌鑒定的重要手段，有助于細菌的初步分群細菌鑒定的重要手段，有助于細菌的初步分群n是決議采用何種生化

4、反響的重要提示是決議采用何種生化反響的重要提示n初步診斷初步診斷n結(jié)核涂片結(jié)核涂片n淋球菌涂片淋球菌涂片 顯微鏡的運用顯微鏡的運用n先用低倍鏡找出標(biāo)本位置，再轉(zhuǎn)用油鏡先用低倍鏡找出標(biāo)本位置，再轉(zhuǎn)用油鏡n粗調(diào)粗調(diào)+微調(diào)微調(diào)n香柏油的作用：玻片和空氣密度不同，使部分光線經(jīng)香柏油的作用：玻片和空氣密度不同，使部分光線經(jīng)空氣折射后不能進入透鏡，而香柏油的折光率與玻璃空氣折射后不能進入透鏡，而香柏油的折光率與玻璃相近，可使進入油鏡的光線增多，視野光度加強，物相近，可使進入油鏡的光線增多，視野光度加強，物像明晰像明晰n鏡頭要堅持清潔可用二甲苯擦拭鏡頭鏡頭要堅持清潔可用二甲苯擦拭鏡頭形狀學(xué)檢查的方法形狀學(xué)檢

5、查的方法n不染色標(biāo)本檢查法不染色標(biāo)本檢查法n染色標(biāo)本檢查法染色標(biāo)本檢查法n特殊染色檢查法特殊染色檢查法不染色標(biāo)本檢查法不染色標(biāo)本檢查法1n壓片法壓滴法壓片法壓滴法n1.用接種環(huán)分別取細菌用接種環(huán)分別取細菌23環(huán)，置于干凈環(huán)，置于干凈載玻片中央載玻片中央n2.悄然覆上蓋玻片悄然覆上蓋玻片n3.油鏡下察看油鏡下察看不染色標(biāo)本檢查法不染色標(biāo)本檢查法2n懸滴法懸滴法染色標(biāo)本檢查法染色標(biāo)本檢查法n染色根本步驟：染色根本步驟：n涂片：涂片：n枯燥：室溫自然枯燥枯燥：室溫自然枯燥n固定：殺死細菌固定：殺死細菌;使菌體與玻片粘附使菌體與玻片粘附;菌體蛋菌體蛋白變性易著色白變性易著色n染色：革蘭染色染色：革蘭染

6、色n鏡檢鏡檢革蘭染色革蘭染色-根本步驟根本步驟a ) 初 染 ： 結(jié) 晶 紫初 染 ： 結(jié) 晶 紫 1min；b)媒染：碘液媒染：碘液1min；c)脫色：脫色：95%乙醇乙醇至無紫色零落為止；至無紫色零落為止；d)復(fù)染：石碳酸復(fù)紅復(fù)染：石碳酸復(fù)紅30s，自然枯燥后，自然枯燥后鏡檢鏡檢革蘭染色革蘭染色-結(jié)果與本卷須知結(jié)果與本卷須知結(jié)果判別：紫色為革蘭陽性菌、紅色為革蘭陰性菌結(jié)果判別：紫色為革蘭陽性菌、紅色為革蘭陰性菌本卷須知：本卷須知：涂片不宜過厚涂片不宜過厚固定不宜過熱固定不宜過熱脫色是關(guān)鍵：脫色不夠：革蘭陰性菌脫色是關(guān)鍵：脫色不夠：革蘭陰性菌革蘭陽性菌革蘭陽性菌脫色過度：革蘭陽性菌脫色過度：

7、革蘭陽性菌革蘭陰性菌革蘭陰性菌1824h菌齡最正確菌齡最正確知金葡與大腸作為陽性和陰性對照知金葡與大腸作為陽性和陰性對照特殊染色示教特殊染色示教n鞭毛染色鞭毛染色n芽胞染色芽胞染色n莢膜染色莢膜染色鞭毛染色鞭毛染色-套組內(nèi)容及規(guī)格套組內(nèi)容及規(guī)格內(nèi)容內(nèi)容規(guī)格規(guī)格主要成分主要成分復(fù)紅酒精溶液復(fù)紅酒精溶液(A液液)20ml品紅品紅鞣酸水溶液鞣酸水溶液(B液液)20ml鞣酸鞣酸鉀明礬溶液鉀明礬溶液(C液液)20ml鉀明礬鉀明礬任務(wù)液過濾瓶任務(wù)液過濾瓶鞭毛染色鞭毛染色-任務(wù)液配制任務(wù)液配制n根據(jù)運用量將根據(jù)運用量將A液、液、B液、液、C液等比例混合，并置于任液等比例混合，并置于任務(wù)液過濾瓶內(nèi)，混合均勻靜

8、置務(wù)液過濾瓶內(nèi)，混合均勻靜置2h后方可運用后方可運用n任務(wù)液任務(wù)液28約可保管約可保管23天天鞭毛染色鞭毛染色-玻片的處置玻片的處置n鞭毛染色勝利與否，與玻片的干凈度有非常親密的關(guān)鞭毛染色勝利與否，與玻片的干凈度有非常親密的關(guān)系系n取新的載玻片，先用洗潔精清洗干凈后，再浸泡在取新的載玻片，先用洗潔精清洗干凈后，再浸泡在3%鹽酸酒精鹽酸酒精2天以上，運用時從酸性酒精中取出，并天以上，運用時從酸性酒精中取出，并用純水沖洗干凈，再以干凈紗布擦干或自然枯燥后運用純水沖洗干凈，再以干凈紗布擦干或自然枯燥后運用用鞭毛染色鞭毛染色-涂片的制備涂片的制備n將菌種接種在肉湯管中，經(jīng)將菌種接種在肉湯管中，經(jīng)24h

9、37孵育后離心，孵育后離心，倒掉上清液，用接種環(huán)沾取沉淀物一環(huán)置于玻片的一倒掉上清液，用接種環(huán)沾取沉淀物一環(huán)置于玻片的一端，并將玻片傾斜，使菌液自然流動至玻片的另一端，端，并將玻片傾斜，使菌液自然流動至玻片的另一端，室溫下自然枯燥室溫下自然枯燥鞭毛染色鞭毛染色-操作方法操作方法n滴加任務(wù)液于玻片上，染色滴加任務(wù)液于玻片上，染色1015minn將玻片微傾斜，用蒸餾水一滴滴沖洗干凈將玻片微傾斜，用蒸餾水一滴滴沖洗干凈n將玻片直立使水分流盡，自然晾干，鏡檢將玻片直立使水分流盡，自然晾干，鏡檢n結(jié)果：菌體及鞭毛均為紅色結(jié)果：菌體及鞭毛均為紅色芽胞染色芽胞染色-染液規(guī)格染液規(guī)格n石碳酸復(fù)紅液石碳酸復(fù)紅液20ml堿性品紅堿性品紅n脫色液脫色液20ml乙醇乙醇n堿性美藍液堿性美藍液20ml亞甲藍亞甲藍芽胞染色芽胞染色-染色步驟與方法染色步驟與方法n將有芽胞細菌制成涂片，自然枯燥后加熱固定將有芽胞細菌制成涂片，自然枯燥后加熱固定n滴加石碳酸復(fù)紅液于涂片上，并弱火加熱，使染液冒滴加石碳酸復(fù)紅液于涂片上，并弱火加熱，使染液冒蒸氣約蒸氣約5min，冷后水洗，并用脫色液脫色，冷后水洗，并用脫色液脫色2min，水，水洗洗n堿性美藍復(fù)染堿性美藍復(fù)染30s，水洗，干后用油鏡鏡檢，水洗，干后用油鏡鏡檢n結(jié)果：