培養(yǎng)基母液配制

1、培養(yǎng)基母液配制培養(yǎng)基配制通常先根據(jù)各組分性質(zhì)，配制成較濃的母液（母液濃度為培養(yǎng)基濃度的若干倍如50或100倍），貯存在冰箱中備用，以后配制培養(yǎng)基時根據(jù)用量量取。由于培養(yǎng)基成分較多，如果每配制一次即進行多次稱量（不少成分用量較微），不僅會造成較大的誤差，而且會增加工作量，因而配制母液可使培養(yǎng)基配制方便準確。配制大量成分母液通常為原培養(yǎng)基濃度的20、50或100倍，倍數(shù)不宜過高。MS培養(yǎng)基母液及培養(yǎng)基配方法參考表2。大量成分母液經(jīng)常將CaCl2·2H2O單獨配制保存，以免長期貯存發(fā)生沉淀。若將全部大量成分配在一起時，為防止在混合時發(fā)生沉淀，須在各藥品充分溶解后，按表1.2中化合物出現(xiàn)順序

2、混合，氯化鈣最后加入，以免與硫酸鎂形成沉淀.大量成分稱量溶解后，在1000 ml容量瓶中定 容，然后移入磨口瓶中，貼上標簽，置于普通冰箱（4）貯存。微量元素母液配制時，由于培養(yǎng)基中微量元素用量甚微，濃度為0.l0.0001mg/l，所以母液濃度宜為原培養(yǎng)基配方中用量的100倍。一般將微量元素分別稱量溶解，定容在1000 ml容量瓶中后貯存在一個細口瓶中，但也有將KI分別配制，單獨貯存在棕色瓶中。配好后，貼上標簽，貯存于4冰箱。培養(yǎng)基中的鐵鹽母液一般單獨配制。目前常用的鐵鹽為硫酸亞鐵和乙二胺四乙酸二納的螯合物。稱取Na2-EDTA 3.73 g，F(xiàn)eSO4 ·2H2O 2.78 g，分

3、別溶解（可加熱），然后混合定溶于1000 ml容量瓶中。轉入細口瓶，貼上標簽，4冰箱中保存。氨基酸和維生素等有機成分母液可配制時，母液濃度通常為原培養(yǎng)基配方的50倍（或100）。常用氨基酸和維生素為水溶性物質(zhì)，可用蒸餾水溶解，但葉酸要先用少量稀堿或稀氨水溶解，然后用重蒸餾水定容。配制好后，轉入細口瓶，貼上標簽，-20（或4）冰箱中保存。 植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)如生長素類和細胞分裂素類可以根據(jù)需要，靈活設計其濃度，一般為 0.01、0.1、0.2、0.5或1 mg/l。如配0.5 mg/l NAA母液，稱25 mg NAA溶于50 ml重蒸餾水，或50 mg的NAA定溶于100 ml重蒸餾水

4、中。IAA要用棕色瓶暗中貯存，以免光照分解。常用植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)和維生素特征見表3。生長素為醇溶性物質(zhì)，配制時，應用少量95%酒精或稀堿溶解，然后用重蒸餾水溶解定容；細胞分裂素應先用少量1 N NaOH或HCl溶解，然后用重蒸餾水定容。配制好的母液放置在4普通冰箱中備用。這些母液保存時間不宜過長，當出現(xiàn)沉淀、渾濁及霉菌團時，應重新配制。椰乳中因含有許多種細胞分裂素物質(zhì)，如KT類似物（9-D-ribofuranosylzeatin）、玉米素及玉米素核糖甙等，有時可與細胞分裂素相互代替。采集到椰子時，應檢查其汁液（保證沒有變質(zhì)），煮沸，濾紙過濾掉蛋白，高溫高壓消毒，貯存在-20下備用。有時可直接加

5、入培養(yǎng)基。酵母提取液也一般也現(xiàn)用現(xiàn)配，稱量酵母粉后，加熱至沸騰30分鐘，過濾去渣。 四、實驗步驟1、大量元素母液的配制各成分按照表1培養(yǎng)基濃度含量擴大10倍用天平稱取，用蒸餾水分別溶解，按順序逐步混合。后用蒸餾水定容到 1000ml的容量瓶中，即為10倍的大量元素母液。到入細口瓶，貼好標簽保存于冰箱中。配制培養(yǎng)基時，每配1L培養(yǎng)基取此液100ml。表1  MS培養(yǎng)基大量元素母液制備 序號藥品名稱培養(yǎng)基濃度（mg/L）擴大10稱量(mg)1NH4NO31650165002KNO31900190003CaCl2·2H2O 44044004MgSO4

6、·7H2O37037005KH2PO41701700 注意：(1) 配制大量元素母液時，某些無機成分如Ca2+、SO42、Mg 2+和H2PO4一等在一起可能發(fā)生化學反應，產(chǎn)生沉淀物。為避免此現(xiàn)象發(fā)生，母液配制時要用純度高的重蒸餾水溶解，藥品采用等級較高的分析純，各種化學藥品必須先以少量重蒸餾水使其充分溶解后才能混合，混合時應注意先后順序。特別應將Ca2+、SO42一、Mg 2十和H2PO4一等離子錯開混合，速度宜慢，邊攪拌邊混合。(2)CaCl2·2H2O要在最后單獨加入，在溶解CaCl2·2H2O 時，蒸餾水需加熱沸騰，除去水中的CO2，以防沉淀。另

7、外，CaCl2·2H2O放入沸水中易沸騰，操作時要防止其溢出。、微量元素母液的配制MS培養(yǎng)基的微量元素無機鹽由7種化合物（除Fe ）組成。微量元素用量較少，特別是 CuSO4·5H2O、 CoCl2·6H2O ，因此在配制中分微量、配制。按照表2，表3配方，用電光天平稱量，其它同大量元素。配制培養(yǎng)基時，每配制1L培養(yǎng)基，取微量10ml，微量0.1ml。表2   MS培養(yǎng)基微量的配制 序號化合物名稱培養(yǎng)基濃度（mg/L）擴大100倍稱量(mg)1MnSO4·4H2O22.322302ZnSO4&#

8、183;7H2O8.68603H3BO36.26204KI0.83835Na2MoO4·2H2O0.2525  表3   MS培養(yǎng)基微量的配制 序號化合物名稱培養(yǎng)基濃度（mg/L）擴大10000倍稱量(mg)1CuSO4·5H2O 0.0252502CoCl2·6H2O  0.025250 注意：使用電子分析天平時注意不要把藥品撒到稱盤上，用完以后，用吸耳球?qū)⑻炱絻?nèi)的臟物清理干凈。3、鐵鹽母液的配制鐵鹽不是都需要單獨配成母液，如檸檬酸鐵，只需和大量元素一起配成母液即可。目前常

9、用的鐵鹽是硫酸亞鐵和乙二胺四乙酸二鈉的螯合物，必須單獨配成母液。這種螯合物使用起來方便，又比較穩(wěn)定，不易發(fā)生沉淀。配制方法同上，直接用蒸餾水加熱攪拌溶解，定容至1L。配制培養(yǎng)基時，配制1L取此液10ml。表4  MS鐵鹽母液的配制 序號化合物名稱培養(yǎng)基濃度（mg/L）擴大100倍稱量(mg)1Na2-EDTA 37.337302FeSO4·7H2O 27.82780 注意：在配制鐵鹽時，如果加熱攪拌時間過短，會造成FeS04和Na2-EDTA 鰲合不徹底，此時若將其冷藏，F(xiàn)eSO4會結晶析出。為避免此現(xiàn)象發(fā)生，配制鐵鹽母液時，F(xiàn)eSO

10、4和Na2-EDTA 應分別加熱溶解后混合，并置于加熱攪拌器上不斷攪拌至溶液呈金黃色(約加熱20 - 30 min)，調(diào)pH值至5 .5，室溫放置冷卻后，再冷藏。4、有機母液的配制MS培養(yǎng)基的有機成分有甘氨酸、肌醇、煙酸、鹽酸硫胺素和鹽酸吡哆素。培養(yǎng)基中的有機成分原則上應分別單獨配制。配制直接用蒸餾水溶解，定容至1L，注意稱量時用電子分析天平。配制培養(yǎng)基時，每配1L培養(yǎng)基取此液5ml。注意：由于維生素母液營養(yǎng)豐富，因此貯藏時極易染菌。被菌類污染的維生素母液，有效濃度降低，并且易給后期培養(yǎng)造成傷害，不宜再用。避免此現(xiàn)象發(fā)生的方法是:配制母液時用無菌重蒸餾水溶解維生素，并貯存在棕色無菌瓶中，或縮短

11、貯藏時間。表5   MS培養(yǎng)基有機物質(zhì)母液的制備 序號化合物名稱培養(yǎng)基濃度（mg/L）擴大200倍稱量(mg)1甘氨酸24002肌醇100200003鹽酸硫胺素(VB1)0.51004鹽酸吡哆素(VB6)0.51005煙酸0.5100 5、激素母液配制植物組織培養(yǎng)中使用的激素種類及含量需要根據(jù)不同的研究目的而定。一般激素母液的配制的終濃度以0.5mg/ml為好，需要注意的是：（）配制生長素類，例如IAA、NAA、2.4-D、6BA，應先用少量95%乙醇或無水乙醇充分溶解，或者用 1mol/L的NaOH溶解，然后用蒸餾水定容到一定的濃度。（）細胞分裂素，例

12、如KT，應先用少量95%乙醇或無水乙醇加34滴1mol/L的鹽酸溶解，再用蒸餾水定容。（）配制生物素，用稀氨水溶解，然后定容。注意：所有的母液都應保存在04冰箱中，若母液出現(xiàn)沉淀或霉團則不能繼續(xù)使用。植物組織培養(yǎng)的必要條件錄入時間:2011-7-19 13:59:05 來源：生技網(wǎng) （一）溫度： 對大多數(shù)植物組織2028即可滿足生長所需，其中2627最適合。 （二）光： 組織培養(yǎng)通常在散射光線下進行。光的影響可導致不同的結果。有些植物組織在暗處生長較好，而另一些植物組織在光亮處生長較好，但由愈傷組織分化成器官時，則每日必須要有一定時間的光照才能形成芽和根。有些次生物質(zhì)的形成，光是決定三因素。 （三）滲透壓： 滲透壓對植物組織的生長和分化很有關系。在培養(yǎng)基中添加食鹽、蔗糖、甘露醇和乙二醇等物質(zhì)可以調(diào)整滲透壓。通常