聚酰胺吸附鋁離子顯色法測定烏藥葉中總黃酮的含量(一)

1、聚酰胺吸附鋁離子顯色法測定烏藥葉中總黃酮的含量(一)    【摘要】 目的采用聚酰胺吸附-鋁離子顯色法測定烏藥葉中總黃酮的含量。方法經(jīng)聚酰胺吸附后的樣品，以蘆丁為對照品，在420 nm處測定吸收波長，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，確定濃度。結(jié)果總黃酮在0.0020.10 mg·ml-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=0.999 5）。該法的平均加樣回收率為97.5%,RSD為2.76%(n=5)。結(jié)論該方法簡單、可靠。 【關(guān)鍵詞】 烏藥； 總黃酮； 聚酰胺； 紫外分光光度法烏藥Lindera aggregate（Sims）Kosterm.，樟科Lauraceae山

2、胡椒屬（Lindera）藥用植物。中國藥典（2005版）規(guī)定其塊根入藥，具有順氣止痛、溫腎散寒等功效，臨床上被廣泛用于治療寒凝氣滯所致脘腹疼痛，中成藥配伍廣泛。據(jù)報(bào)道烏藥葉中黃酮資源豐富，為烏藥葉中抗菌、抗炎的主要成分1,2。關(guān)于應(yīng)用紫外-可見光分光光度法測定其他植物中總黃酮的含量已有相關(guān)報(bào)道36，具有操作簡單、數(shù)據(jù)可靠等優(yōu)點(diǎn)；但是關(guān)于用分光光度法分析烏藥葉中總黃酮的含量尚未見相關(guān)的報(bào)道。為更好地開發(fā)利用烏藥葉資源，本文建立了聚酰胺吸附鋁離子顯色法，對烏藥葉中總黃酮的含量進(jìn)行了測定。1 儀器與材料1.1 儀器UV2401PC型紫外分光光度計(jì)（日本島津公司）；RE52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生

3、化儀器廠）；FA2004A型電子天平（上海精天電子儀器有限公司）；SB80超聲波清洗機(jī)（寧波江南藥廠）。1.2 試劑無水乙醇、甲醇（分析級AR，宜興市展望化工試劑廠），石油醚（沸程6090，上海試劑二廠）；聚酰胺（浙江省臺州市路橋四甲生化塑料廠）；AlCl3·6H2O（分析級AR，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；蘆丁對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號0080-9705）。1.3 樣品烏藥樣地設(shè)在浙江省天臺縣三州鄉(xiāng)。200610在樣地隨機(jī)選取植株，用濕布包裹，塑料袋封裝，立即帶回實(shí)驗(yàn)室。將材料洗凈，自然風(fēng)干，70下干燥12 h，研磨后過金屬網(wǎng)篩，將烘干樣品放入到干燥器中保存，備用。2 方

4、法與結(jié)果2.1 對照品溶液的制備精密稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品0.025 g，置于25 ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，即得濃度為1.0 mg/ml的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。2.2 供試品溶液的制備精密稱取烏藥葉粉末1.0 g，置250 ml三頸燒瓶中，用50%乙醇水浴加熱（85）回流3次，每次溶劑100 ml，回流時間1 h，合并提取液，減壓蒸餾除去溶劑，用甲醇溶解殘?jiān)⒍ㄈ葜?0 ml。然后，加入10 ml水，用石油醚（6090）萃取3次，每次用量為30 ml。萃取液經(jīng)減壓蒸餾除去甲醇后，過聚酰胺柱，用95%乙醇洗脫至無黃酮類物質(zhì)為止。洗脫液減壓濃縮，除去溶劑，殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ葜?5 ml，備用。2.

5、3 測定波長的確定精密移取1 ml供試品溶液于10 ml容量瓶中，加入4 ml 1%氯化鋁甲醇溶液，然后用甲醇定容至10 ml。同法，制得空白，在200600 nm進(jìn)行掃描，記錄紫外吸收光譜，見圖1。從圖1可以看出供試品溶液在225，275 nm和420 nm有吸收峰。由于420 nm干擾較小，因此確定檢測波長為420 nm。2.4 顯色時間的確定精密移取1 ml供試品溶液于10 ml容量瓶中，加入4 ml 1%氯化鋁甲醇溶液，然后用甲醇定容至10 ml。每隔1 min于420 nm處測定其吸光度。結(jié)果表明，供試品溶液顯色15 min后，吸光度幾乎維持穩(wěn)定。圖1 樣品的紫外吸收光譜圖（略）2.

6、5 聚酰胺用量的考察取適量聚酰胺粉末用95%乙醇煮沸30 min后抽濾，如此重復(fù)3次。將最后抽干的粉末先置于室溫下自然干燥30 min，然后放入烘箱70下干燥1 h。分別稱取0.15，0.30，0.45，0.60，0.90 g聚酰胺粉，以95%乙醇作流動相，裝入層析柱中，加入黃酮提取液，以1015倍95%乙醇洗脫，采用鋁離子顯色反應(yīng)檢測出口流出液。將流出液濃縮用甲醇定容至50 ml，用紫外測定其吸光值變化。結(jié)果表明當(dāng)聚酰胺用量超過0.45 g之后，吸光度變化不大。2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密量取蘆丁對照品溶液0.2，0.5，1.0，5.0，10 ml置于10 ml容量瓶中，甲醇定容。分別移取1

7、ml溶液，分別置于10 ml容量瓶中，加入4 ml 1%的氯化鋁甲醇溶液，用甲醇定容至刻度線，搖勻，放置15 min。同法制得空白液，按分光光度法，在420 nm波長處測吸光值。以吸光值為縱坐標(biāo)，對照品溶液得濃度為橫坐標(biāo)，繪制曲線，進(jìn)行線性回歸。得回歸方程為：A7.059 2C0.006 6，相關(guān)系數(shù)r0.999 5。結(jié)果表明，蘆丁對照品在所試濃度0.0020.10 mg/ml內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一供試品溶液按上述方法連續(xù)檢測6次，RSD0.24%，可見該方法重復(fù)性好，精密度高。2.8 回收率實(shí)驗(yàn)采用加樣回收率法，取供試品溶液0.10 ml 5份，分別添加已知含量的蘆丁對

8、照品溶液，測定總黃酮量，平均加樣回收率為97.5%，RSD2.76%（n5）。2.9 樣品測定取供試品溶液于420 nm處測定吸光值，計(jì)算供試品含量為2.10%。3 結(jié)論黃酮類化合物為烏藥葉抗菌、抗炎的主要有效成分，本研究建立總黃酮含量的分析方法，樣品經(jīng)提取、聚酰胺吸附、三氯化鋁絡(luò)合后，采用分光光度法，在420 nm處，以蘆丁為對照品測定其含量。本研究并進(jìn)行了重復(fù)性、回收率實(shí)驗(yàn)，證明方法簡便可靠，為以后深入開展烏藥葉資源的研究奠定了基礎(chǔ)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1 張朝鳳, 孫啟時, 趙燕燕, 等. 烏藥葉中黃酮類成分研究J.中國藥物化學(xué)雜志，2001，11(5)：274.2 張朝鳳, 孫啟時,桂新，等. 烏藥葉中黃酮類成分研究（2）J.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，20(5)：342.3 閆永紅, 王文全, 楊 娜. 栽培甘草中總黃酮的含量測定J.中國中藥雜志，2006，31(12)：1019.4 黃林芳, 萬德光.