研究虎杖苷對(duì)實(shí)驗(yàn)性急性胃黏膜損傷的保護(hù)作用及其與抗氧化的關(guān)系

1、研究虎杖苷對(duì)實(shí)驗(yàn)性急性胃黏膜損傷的保護(hù)作用及其與抗氧化的關(guān)系    研究虎杖苷對(duì)實(shí)驗(yàn)性急性胃黏膜損傷的保護(hù)作用及其與抗氧化的關(guān)系摘要：目的：研究虎杖苷（polydatin,PD）對(duì)實(shí)驗(yàn)性急性胃黏膜損傷的保護(hù)作用及其與抗氧化的關(guān)系。方法制備小鼠無(wú)水乙醇型、吲哚美辛（消炎痛）型、大鼠束縛-冷凍（restraint-cold stress,RCS）應(yīng)激型胃黏膜損傷模型，測(cè)定胃黏膜損傷指數(shù)；測(cè)定大鼠血清 SOD活性和 MDA含量。結(jié)果PD可劑量依賴性地抑制實(shí)驗(yàn)性急性胃黏膜損傷。PD可使大鼠束縛冷凍應(yīng)激型胃黏膜損傷過(guò)程中血清中升高的 MDA含量降低，可使降低的 S

2、OD水平回升。結(jié)論P(yáng)D對(duì)實(shí)驗(yàn)性急性胃黏膜損傷具有保護(hù)作用，其作用機(jī)制與 PD抗氧化有關(guān)。關(guān)鍵詞：胃黏膜損傷；虎杖苷；無(wú)水乙醇；吲哚美辛；束縛-冷凍應(yīng)激Abstract：Objective: To study the protective effect of polydatin (PD) on experimental gastric mucosal lesion in rats and relationship of antioxidative effect. Methods: Make the model of gastric mucosal lesion in rats induced b

3、y ethanol absoute ,RCS and indomethacin;the index of gastric mucosal lesion in rats was determined; the contents of MDA and SOD of serum  were measured. Results: The index of experimental gastric mucosal lesion in rats was inhibited after administration of PD, the decrease of SOD of serum was e

4、levated to normal level. Conclusion: PD can possess protective effect on experimental gastric mucosal lesion in rats .Its mechanism may be related to antioxidative effect.Keywords: Gastric mucosal lesion;  Polydatin;  Ethanol absolute;  Indomethacin;  Restraint-cold stress(RCS) 虎

5、杖苷（polydatin,PD）為蓼科蓼屬多年生草本植物虎杖（Polygonum cuspidatumSieb.et Zucc.）的干燥根和莖中提取的一種單體，也稱白藜蘆醇苷。虎杖性味苦寒，歸肝、肺、膽經(jīng)。主要功效有祛風(fēng)利濕，祛痰止咳，清熱解毒，活血化瘀。中醫(yī)臨床用于治療濕熱黃疸、肺熱咳嗽、瘡癰腫毒、關(guān)節(jié)痹痛、經(jīng)閉經(jīng)痛、水火燙傷、跌打損傷等?，F(xiàn)代研究已證實(shí) PD具有保護(hù)心肌細(xì)胞、改善微循環(huán)、抑制血小板聚集、抵抗內(nèi)毒素休克、降血脂、抗脂質(zhì)過(guò)氧化、保肝利膽、鎮(zhèn)咳、平喘，抗病原微生物多種藥理作用1，現(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道虎杖口服液有抗?jié)冏饔?，但有關(guān) PD對(duì)急性胃黏膜損傷的影響尚未見(jiàn)報(bào)道。本文應(yīng)用小鼠無(wú)水乙

6、醇型、吲哚美辛型和大鼠束縛-冷凍應(yīng)激型胃黏膜損傷模型研究 PD對(duì)實(shí)驗(yàn)性急性胃黏膜損傷的保護(hù)作用與抗氧化的關(guān)系。1  材料與方法1.1  材料1.1.1  動(dòng)物昆明種小鼠，（24±2）g；SD大鼠，（200±30）g，兼用安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心（皖醫(yī)實(shí)動(dòng)準(zhǔn)字第01號(hào)）提供。實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。1.1.2  儀器752 MC紫外分光光度計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司）、TDZ4-W低速臺(tái)式離心機(jī)（長(zhǎng)沙湘儀離心儀器有限公司）、AT250十萬(wàn)分之一電子天平（瑞士 METTLER公司）。1.1.3  藥品試劑PD：西安冠宇生物技術(shù)有

7、限公司產(chǎn)品，虎杖苷含量為99.12%，批號(hào) GY050518，臨用前用生理水（NS）配制；無(wú)水乙醇（ethanol absolute）：上海試劑一廠綜合經(jīng)營(yíng)公司，批號(hào)20050608；吲哚美辛（indomethacin）：上海辛帕斯制藥有限公司，批號(hào)050101；西咪替?。╟imetidine,Cim）：常州康普藥業(yè)有限公司，批號(hào)0503024；MDA試劑盒：南京建成生物工程研究所，批號(hào)20051128；SOD試劑盒：南京建成生物工程研究所，批號(hào)20051202。1.2  方法1.2.1  分組與給藥昆明種小鼠60只，隨機(jī)分為6組：空白對(duì)照組，模型對(duì)照組，PD大、中、小劑量

8、組（240，120，60 mg/kg），Cim陽(yáng)性藥對(duì)照組（200 mg/kg）。藥物均用 NS配制，臨用前充分混勻后灌胃（ig）給藥，連續(xù)5 d?？瞻讓?duì)照組，模型對(duì)照組給予 NS，給藥容積均為0.1 ml/10 g。SD大鼠48只，隨機(jī)分為6組：空白對(duì)照組，模型對(duì)照組，PD大、中、小劑量組（180，90，45 mg/kg），Cim陽(yáng)性藥對(duì)照組（140 mg/kg）。連續(xù) ig給藥5 d?？瞻讓?duì)照組，模型對(duì)照組給予 NS，給藥容積均為1 ml/100 g。1.2.2  無(wú)水乙醇誘發(fā)的小鼠胃黏膜損傷模型制備3昆明種小鼠實(shí)驗(yàn)前禁食24 h，自由飲水。在最后一次 ig給藥1 h后，除正常對(duì)

9、照組外，每只均 ig無(wú)水乙醇0.1 ml，引起胃黏膜損傷，1 h后處死動(dòng)物。1.2.3  吲哚美辛誘發(fā)的小鼠胃黏膜損傷模型制備4昆明種小鼠實(shí)驗(yàn)前禁食24 h，自由飲水。在最后一次 ig給藥1 h后，小鼠 ig吲哚美辛溶液（64 mg/kg），2 h后處死動(dòng)物。1.2.4  大鼠 RCS應(yīng)激型黏膜損傷模型制備5SD大鼠實(shí)驗(yàn)前禁食24 h，自由飲水。在最后一次 ig給藥1 h后，在乙醚輕度麻醉下，將大鼠縛于鐵柵上，待動(dòng)物清醒后放入4冰箱中應(yīng)激，3 h后從冰箱中取出腹動(dòng)脈放血處死取胃。1.2.5  觀察指標(biāo)和方法1.2.5.1  小鼠胃黏膜損傷面積的測(cè)定動(dòng)物處

10、死后，取出胃，并向胃內(nèi)注入10%甲醛2 ml，置于同濃度甲醛中充分固定。20 min后，沿胃大彎剪開(kāi)胃，展平并置于雙目體式鏡下觀察胃出血性病灶，用測(cè)微尺計(jì)算胃黏膜損傷面積，以每只小鼠胃黏膜損傷面積（mm2）的總和作為其損傷指數(shù)，并計(jì)算胃黏膜損傷抑制率。1.2.5.2  大鼠胃黏膜損傷指數(shù)測(cè)定6動(dòng)物處死后，取出胃，并向胃內(nèi)注入10%甲醛10 ml，置于同濃度甲醛中充分固定，30 min后，沿胃大彎將胃剪開(kāi)展平，可見(jiàn)局限于胃黏膜的點(diǎn)狀或條索狀出血性病灶，按 Guth標(biāo)準(zhǔn)改良評(píng)分：其中病灶長(zhǎng)度1 mm為1分，病灶長(zhǎng)度2 mm為2分，病灶長(zhǎng)度 3 mm為3分，病灶長(zhǎng)度4 mm為4分，若病灶長(zhǎng)

11、度4 mm，則分段計(jì)分，病灶寬度2 mm時(shí)，分?jǐn)?shù)乘以2，最后以全胃病灶分?jǐn)?shù)總和作為該動(dòng)物胃黏膜損傷指數(shù)，并計(jì)算損傷抑制率。1.2.5.3  大鼠血清中 MDA含量測(cè)定腹主動(dòng)脈采血，靜置2 h后3 000 r/min離心15 min。取血清-20冷凍保存。采用硫代巴比妥法（TBA法），操作按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行，單位 nmol/ml。1.2.5.4  大鼠血清中 SOD活性測(cè)定按 SOD測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，單位 nmol/ml。1.2.5.5  數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)以±s表示，兩組間數(shù)據(jù)比較采用 t檢驗(yàn)。NextPage2  結(jié)果2.1  PD對(duì)無(wú)

12、水乙醇致小鼠胃黏膜損傷的影響表1表示，PD劑量組胃黏膜損傷指數(shù)與模型組對(duì)照組比較，大、中劑量組均具有顯著性差異，PD小劑量組胃黏膜損傷指數(shù)雖較模型組有所降低，但統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)差異無(wú)顯著性。各劑量組損傷抑制率分別為模型對(duì)照組統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)差異無(wú)顯著性。各劑量組損傷抑制率分別為模型對(duì)照組的43.04%，29.84%，18.51%，說(shuō)明PD大、中劑量可明顯減輕無(wú)水乙醇所致的實(shí)驗(yàn)性急性胃黏膜損傷。表1  PD對(duì)無(wú)水乙醇致小鼠急性胃黏膜損傷的影響(略)與模型對(duì)照組比較，*P0.05，*P0.01，n=102.2  PD對(duì)吲哚美辛致小鼠胃黏膜損傷的影響由表2可見(jiàn)，PD60、120、240 mg

13、/kg組小鼠胃黏膜損傷指數(shù)與模型對(duì)照組比較，差異均具有顯著性意義，表明 PD對(duì)小鼠吲哚美辛致急性胃黏膜損傷的模型也具有明顯的保護(hù)作用。表2  PD對(duì)吲哚美辛致小鼠胃黏膜損傷的影響(略)與模型對(duì)照組比較，*P0.05，*P0.01，n=102.3  PD對(duì)大鼠 RCS應(yīng)激型胃黏膜損傷的影響大鼠束縛-冷凍應(yīng)激后，鏡下可見(jiàn)鼠胃黏膜表面出現(xiàn)廣泛點(diǎn)狀或條索狀損傷。各組胃黏膜損傷情況見(jiàn)表3，結(jié)果顯示不同劑量的 PD對(duì)大鼠 RCS應(yīng)激型胃黏膜損傷均具有明顯的抑制作用。表3  PD對(duì)大鼠束縛-冷凍應(yīng)激型胃黏膜損傷的影響(略)與模型對(duì)照組比較，*P0.05，*P0.01，n=82.

14、4  PD對(duì)大鼠血清中 MDA含量和 SOD活性的影響表4顯示，模型對(duì)照組大鼠血清中和 SOD較正常對(duì)照組明顯升高，SOD含量明顯降低。而用藥組經(jīng)給予 PD后，血清中 MDA含量較模型對(duì)照組明顯降低，SOD明顯升高。3  討論本研究通過(guò)采用大鼠束縛-冷凍應(yīng)激和小鼠無(wú)水乙醇、吲哚美辛灌胃3種動(dòng)物模型，發(fā)現(xiàn)預(yù)先給予 PD灌胃，連續(xù)5 d可以劑量依賴性地抑制由上述3種模型所引起的急性胃黏膜損傷，表明 PD對(duì)急性胃黏膜損傷具有明顯的保護(hù)作用。表4  PD對(duì)大鼠血清中的 MDA和 SOD活性的影響(略)與模型對(duì)照組比較，*P0.05，*P0.01；與空白對(duì)照組比較，#P0.

15、01，n=8研究表明多種類型的急性胃黏膜損傷都與氧自由基有關(guān)79。氧自由基在整體和細(xì)胞水平都可以引起胃黏膜或黏膜細(xì)胞的脂質(zhì)過(guò)氧氣化，引發(fā)胃黏膜損傷。MDA作為羥基自由基（誘導(dǎo)脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)）的一個(gè)指標(biāo)，可以間接地反映羥自由基形成的數(shù)量。已經(jīng)證明乙醇誘發(fā)的急性胃黏膜損傷與氧自由基和胃黏膜的血流量減少有關(guān)?；⒄瓤诜簩?duì)無(wú)水乙醇誘發(fā)的胃黏膜損傷與氧自由基和胃黏膜的血流量減少有關(guān)，而虎杖口服液對(duì)無(wú)水乙醇誘發(fā)的胃黏膜損傷有保護(hù)作用，PD能改善微循環(huán)，抗脂質(zhì)過(guò)氧化。本實(shí)驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn) PD大、中劑量對(duì)無(wú)水乙醇誘發(fā)的胃黏膜損傷有保護(hù)作用，可能是與 PD的抗氧化有關(guān)，具體機(jī)制有待研究。束縛-冷凍應(yīng)激性胃黏膜損傷與

16、胃黏膜血流量減少有關(guān)外，還有氧自由基參與10。本實(shí)驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn)PD能有效拮抗大鼠束縛-冷凍應(yīng)激所致 SOD活性降低，并抑制脂質(zhì)過(guò)氧氣化產(chǎn)物 MDA升高，具有較強(qiáng)的清除氧氣自由基作用。提示 PD的這種胃黏膜保護(hù)作用可能與其抗氧化作用有關(guān)。吲哚美辛屬于非甾體抗炎藥，作為環(huán)氧化酶抑制劑，其作用結(jié)果是抑制胃內(nèi)前列腺素（PG）的合成，從而使胃黏膜的防御能力降低。文獻(xiàn)報(bào)道虎杖對(duì)吲哚美辛致大鼠胃潰瘍有保護(hù)作用11，其機(jī)制與抗氧化有關(guān)。本研究中 PD可使小鼠吲哚美辛苦型胃黏膜損傷減輕，提示 PD對(duì)胃黏膜保護(hù)作用可能與促進(jìn)胃組織中 PG的生物合成有關(guān)，或與 PD的抗氧化相關(guān)。另有文獻(xiàn)報(bào)道應(yīng)激所致急性胃黏膜損傷與缺

17、血再灌注有關(guān)，PD是否有抗胃黏膜缺血再灌注損傷作用，將有待進(jìn)一步探討。參考文獻(xiàn)：1馮  雷.虎杖研究新進(jìn)展J.醫(yī)藥論壇雜志，2003，24（9）：78.2傅志泉，雍定國(guó)，周智林，等.虎杖口服液抗胃出血及抗胃潰瘍作用的實(shí)驗(yàn)研究J.浙江中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，28（4）：60.3  馬  燕，胡  強(qiáng)，趙維中.梔子總苷對(duì)小鼠實(shí)驗(yàn)性胃黏膜損傷的保護(hù)作用J.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2005，16（2）：386.4  梁心平，楊素娟.消炎痛致胃黏膜操作時(shí)胃組織胺含量變化及甲氰咪呱的影響J.中國(guó)應(yīng)用生理學(xué)雜志，1990，6（1）：55.5  趙維中，王宇翎

18、，陳志武，等.蕓香甙的胃黏膜保護(hù)作用研究J.安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1998，33（2）：93.6  Guth PH,Paulsen G,Nagata H et al.Histologic and microcirculatory changs in alcohol-induced gastric lesions in the rat:Effect of prostaglandin cytoprotectionJ. J Gastroenterology,1984,87(5):1083.7  IZgüt-Uysal VN,Arzu Ag ac,Narin Derin .Effect of carnitine on stress-induced lipid perxidation in rat gastric mucosa.J.J Gastroenterol 2001,36(4):231.8  K wiecien S,Brzozowski T,Kontuek SJ.Effects