代寫醫(yī)學職稱論文桂西生姜總黃酮的提取及對羥自由基的清除作用研

1、代寫醫(yī)學職稱論文桂西生姜總黃酮的提取及對羥自由基的清除作用研究    【摘要】  目的探討桂西生姜總黃酮的提取、鑒別及對羥自由基清除作用，以充分利用桂西生姜植物資源，避免資源的浪費。方法采用超聲波乙醇浸提法從桂西生姜中提取黃酮類物質(zhì)，對所提取的黃酮類物質(zhì)進行驗證，并用分光光度法測定含量，用桂西生姜總黃酮對羥自由基清除作用進行實驗。結(jié)果測得樣品中總黃酮的含量C=0.9573 mg/ml，回收率為101.8%，其純度和產(chǎn)率均較高。結(jié)論 該方法采用全物理過程，無任何污染，是提取桂西生姜黃酮類物質(zhì)的有效途徑。桂西生姜總黃酮提取液對Fenton體系產(chǎn)生的

2、·OH自由基有很好的清除作用。【關(guān)鍵詞】  超聲波提取 生姜 總黃酮 鑒別 自由基 清除Extraction of Total Flavanone from Guixi's Zingiber officinale Roecoe and Its Effects on Scavenging of Hydroxyl RadicalsYANG Shaoliang，MENG Chunyue，LUO Jianhua，ZHANG Lidan，F(xiàn)ENG Ling，PAN Longji， HUANG Suoyi1. Baise Agricultural School, Baise,

3、Guangxi 533000, China;2. Youjiang Medical College for Nationalities, Baise 533000，ChinaAbstract：ObjectiveTo make use of the resources of Guixi's Zingiber officinale Roecoe,avoid wasting and approach the extraction of total flavanone of Guixi's Zingiber officinale Roecoe and to study its effe

4、cts on scavenging of hydroxyl radicals.MethodsThe flavonoids were extracted by ethanol as the solvent from Guixi's zingiber officinale roecoe with ultrasonic wave and ethanol extraction.Using spectrophotometry to extract and check the flavanone of Guixi's Zingiber officinale RoecoeThe effect

5、 of extracts on Guixi's Zingiber officinale Roecoe scavenging of hydroxyl radicals was studiedResultsBy this method the density of the total flavanone of Guixi's Zingiber officinale Roecoe was C=0.9573 mg/ml and the rate of recovery was 101.8%.ConclusionThe outcome and the purity of the flav

6、anone by the extraction and purifying methods are all very high .The methods are purely physical processes and have not any pollution. It is an ideal way to extract the flavanone of Guixi's Zingiber officinale Roecoe. Total flavanone from Guixi's Zingiber officinale Roecoe have effects on sc

7、avenging of hydroxyl radicals.Key words：Ultrasonic wave treatment；  Zingiber officinale Roecoe；  Total flavanone；  Identification；  Hydroxyl radical；  Scavenging     生姜是姜科植物姜Zingiber officinale Roecoe的新鮮根莖，又名地辛、百辣云，系姜科多年生宿根草本植物的根莖，是一種被廣泛應(yīng)用的藥食兩用植物，既是調(diào)味佳品，可以去魚肉腥

8、味，也是工業(yè)上提取香精的重要原料，更是寶貴的中藥材(生姜、鮮姜汁、生姜皮，以及加工炮制后煨姜、炮姜、姜炭等都是治病常用的藥)，能夠抵御百邪1。原產(chǎn)于太平洋群島，我國中部、東南部至西南部廣為栽培，資源豐富2。生姜性辛熱，具有溫中逐寒、回陽通脈的功效3。其有辣味香氣，有刺激味，能增強食欲，興奮胃腸平滑肌和呼吸中樞，有促進消化液分泌的作用3。其主要成分為姜烯、姜醇、沒藥烯、 一姜黃烯、甲基庚烯酮等3。早期的藥理實驗證明，生姜具有發(fā)表、散寒、止嘔、開痰之功效，用于治療傷風感冒、咳嗽多痰、胃寒嘔吐等癥3。現(xiàn)代科學證實，生姜具有抗衰老、抗腫瘤、降血脂、促進血液循環(huán)、調(diào)解中樞神經(jīng)、消炎抗菌等作用3。目前國內(nèi)

9、外對生姜的黃酮類物質(zhì)的研究還相當?shù)娜狈?。黃酮類有效成分對治療冠心病、老年性癡呆、腦血栓、神經(jīng)系統(tǒng)疾病和消除自由基、抑菌、抗癌等方面有顯著效果，無副作用，并以此開發(fā)出多種藥品和保健食品4。筆者曾用乙醇提取法提取桂西生姜總黃酮，但提取效率仍較低。近年來，超聲技術(shù)應(yīng)用于提取植物中的生物堿、苷類、生物活性物質(zhì)、動物組織漿的毒質(zhì)等研究已有報道5，6，表明其具有能耗低、效率高、不破壞有效成分的特點。很多研究表明，利用超聲波產(chǎn)生的強烈振動、高的加速度、強烈的空化效應(yīng)、攪拌作用等，可加速植物材料中的有效成分進入溶劑，從而增加有效成分的提取率，縮短提取時間，并且還可避免高溫對提取成分的影響6，但超聲技術(shù)應(yīng)用于提

10、取桂西生姜中黃酮類物質(zhì)的研究尚未見報道。為此，本文報道用超聲波乙醇浸提法提取桂西生姜總黃酮、鑒別及提取物總黃酮對羥自由基的清除作用?，F(xiàn)報道如下。1  儀器與試劑1.1  儀器KQ5200DB型數(shù)控超聲波清洗器（超聲工作頻率40KHz、江蘇省昆山市超聲儀器有限公司）；UV-755B紫外可見分光光度計（上海分析儀器總廠）；ZF-I型三用紫外分析儀(上海顧村光電儀器廠)；SHB-III循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）。1.2  試劑95%乙醇AR；亞硝酸鈉AR；硝酸鋁AR；氫氧化鈉AR；三氯化鋁AR；鹽酸AR；氨水AR；冰醋酸AR；醋酸乙酯AR；乙酸鎂AR；

11、甲醇AR；鎂粉AR；正丁醇AR；蘆丁標準品（中國藥品生物制品檢定所）；新鮮桂西生姜采自廣西百色市。2  方法與結(jié)果2.1  總黃酮成分提取 取新鮮桂西生姜，烘干，粉碎。稱取桂西生姜粉末6 g，加80 ml 95%乙醇，超聲波提取2.5 h，抽濾。濾渣再加80 ml 95%乙醇，超聲波提取2.5 h，抽濾，合并兩次濾液，減壓回收乙醇至濾液僅剩57 ml左右為止，放置100 ml容量瓶中，用60%乙醇稀釋至刻度，得樣品液。2.2  測定方法依據(jù)以蘆丁為對照品測定桂西生姜中總黃酮的含量，加入鋁離子試劑，同時控制適宜pH值，使黃酮化合物與鋁鹽形成絡(luò)合物，在可見光區(qū)能獲得穩(wěn)

12、定的特征吸收峰。2.3  定量實驗-總黃酮的含量測定2.3.1  波長的選擇取樣品液適量，在0.30 ml 5%亞硝酸鈉溶液存在的堿性條件下，經(jīng)硝酸鋁顯色后，以試劑為空白參比液在420700 nm波長范圍測定絡(luò)合物的吸光度，絡(luò)合物于510 nm波長處有最大吸收，故測定時選用此波長。2.3.2  標準曲線的繪制分別精密吸取蘆丁對照液（0.10 mg/ml）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 ml于10.00 ml容量瓶中，分別加入5%亞硝酸鈉溶液0.30 ml，搖勻，靜置6 min；再加10%硝酸鋁溶液0.30 ml，搖勻，靜置6

13、min；再加4%氫氧化鈉溶液4.00 ml，用60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，靜置12 min，以試劑作空白參比液，于510 nm處測吸光度。結(jié)果見表1。表1  紫外可見分光光度計測定蘆丁對照液吸光度結(jié)果（略）根據(jù)上表得回歸方程：A=-0.0311+13.5184C，r=0.9999。2.3.3  提取物含量的測定精密吸取樣品液0.50 ml，置10 ml容量瓶，按標準曲線的制備方法測定吸光度A=0.616，根據(jù)回歸方程：A=-0.031 1+13.518 4C，計算樣品中總黃酮的含量C=0.957 3 mg/ml。2.3.4  回收率實驗精密量取樣品液1.00 ml

14、，加入標準蘆丁對照品1.00 ml（0.10 mg/ml），同前樣品測定方法操作測定吸光度，求出回收率為101.8% 。2.4  定性實驗-總黃酮的鑒別2.4.1  顏色反應(yīng)紫外光下呈色反應(yīng)：取該樣品溶液點在濾紙上，在可見光下呈灰黃色，在紫外光下呈灰褐色并有熒光斑點。濃氨水反應(yīng)：取該樣品溶液點在濾紙上，將濾紙在氨水上方熏0.5 min，立即在紫外光下觀察，呈極明顯的黃褐色熒光斑點。三氯化鋁反應(yīng)：取樣品溶液點在濾紙上，滴加三氯化鋁乙醇溶液，吹干。在可見光下呈灰黃色，在紫外光下呈黃色熒光斑點。乙酸鎂反應(yīng)：取樣品溶液點在濾紙上，滴加1%乙酸鎂甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黃色斑點。鹽

15、酸-鎂粉反應(yīng)：取乙醇提取液1 ml于試管中加鎂粉，再加入濃鹽酸數(shù)滴（1次加入），在泡沫處呈紫紅色。2.4.2   紙層析 取樣品溶液10 l點在濾紙上。用正丁醇醋酸水=415（體積比）為展開劑，上行展開5 h，取出晾干。噴1%氯化鋁乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可見熒光斑點。2.5  總黃酮提取物對·OH的清除作用參照Fenton反應(yīng)的方法建立反應(yīng)體系模型7，利用H202與Fe2+ 混合產(chǎn)生·OH，但由于·OH具有很高的反應(yīng)活性，存活時間短，若在反應(yīng)體系中加入水楊酸，就能有效地捕捉·OH，并產(chǎn)生有色產(chǎn)物。反應(yīng)式如下：

16、H202+ Fe2+ Fe3+·OH+OH- 該產(chǎn)物在510 nm處有強吸收，若在此反應(yīng)體系中加入具有清除·OH功能的被測物，便會與水楊酸競爭·OH，從而使有色產(chǎn)物生成量減少，采用固定反應(yīng)時間法，在相同體積的反應(yīng)體系(8.8 mmol/L H2O2 1 ml，9 mmol/L Fe2+l ml，9 mmol/L 1ml水楊酸-乙醇溶液)加入一系列不同濃度的桂西生姜總黃酮提取液，并以蒸餾水為參比，與試劑空白液比較，在510 nm處測量各濃度下的吸光度，便能測定被測物(總黃酮)對·OH的清除作用，其清除率計算公式：清除率()=  A0-AA0

17、15;100%以實驗的提取液總黃酮作為樣品，分別取不同體積的樣品定容到50 ml分別測其對·OH的清除作用。從圖1中可看出，桂西生姜總黃酮提取液對由Fenton體系產(chǎn)生的·OH有很好的清除作用，隨著桂西生姜總黃酮提取液濃度的增加，對·OH自由基的清除能力也增強，說明當黃酮類物質(zhì)的濃度增加時，其清除率也增大。3  討論實驗結(jié)果表明，本實驗方法工藝簡單，回收率為101.8%。利用本文所提供的超聲波提取、純化方法而得到的黃酮類物質(zhì)其純度較高，提取率是乙醇提取法（非超聲波）的36倍。超聲波可以強化乙醇浸提法，達到省時、高效、節(jié)能的目的，此方法采用全物理過程，無任

18、何污染，是一條理想的提取黃酮類物質(zhì)的途徑，具有廣闊的應(yīng)用前景。黃酮類化合物是一大類天然產(chǎn)物，廣泛存在于植物界，是許多中草藥的有效成分，具有很高的藥用價值。在自然界中最常見的是黃酮和黃酮醇，其它包括雙氫黃（醇）、異黃酮、雙黃酮、黃烷醇、查爾酮、橙酮、花色苷及新黃酮類等4。天然來源的生物黃酮分子量小，能被人體迅速吸收，能通過血腦屏障，能進入脂肪組織，進而體現(xiàn)出如下功能：消除疲勞、保護血管、預(yù)防動脈硬化、擴張毛細血管、疏通微循環(huán)、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大腦及其他臟器細胞的功能。黃酮類化合物具有抗癌、抗腫瘤、抗心腦血管疾病、抗炎、鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)、降血糖、治療骨質(zhì)疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗輻射等作用8,9。近年來，世界上掀起了植物藥開發(fā)的熱潮，植物藥以其天然低毒的特點倍受青