中藥制劑對衰老大鼠晶狀體抗氧化損傷作用

1、中藥制劑對衰老大鼠晶狀體抗氧化損傷作用             作者：周忠友 趙平 白瑜 于華軍      【摘要】  目的 探討中藥制劑（制何首烏、北沙參、紫丹參）防止晶狀體衰老的作用機(jī)制。方法 30只2個(gè)月齡雄性大鼠，其中10只為正常對照組，20只用D-半乳糖每日皮下注射制成衰老模型，其中10只為衰老模型組，另10只用制何首烏、北沙參、紫丹參3味藥制成的口服液灌胃，40日后應(yīng)用熒光光譜法檢測各組大鼠晶狀

2、體組織中水溶性熒光物質(zhì)（WSFS）的含量。結(jié)果 WSFS的含量：正常對照組（321.17±8.08）單位,衰老模型組（501.11±6.35）單位，中藥治療組（397.65±8.27）單位。衰老模型組與中藥治療組、正常對照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）,而中藥治療組與正常對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 制何首烏、北沙參、紫丹參3味藥制劑對衰老晶狀體具有抗氧化損傷的作用。 【關(guān)鍵詞】  制何首烏；北沙參；紫丹參；晶狀體；氧化損傷；大鼠 Experimental study on the effect of tradi

3、tional chinese medicine  on preventing and curing aging cataract    【Abstract】  Objective  To study the effect of Radix Polygonum Multiflorum Preparata, Radix Glehniae and Radix Salviae Miltiorrhizae in inhibiting cataract. Methods  Aging models were made by hypode

4、rmic injection of D-galactose into the 2-month-old rats' back of the neck. Give the rats gastric infusion with the decoction of Radix Polygonum Multiflorum Preparata,  Radix Glehniae and Radix Salviae Miltiorrhizae. The content of water-soluhie fluorescent substance （WSFS） in the aging lens

5、 was detected after 40 days.  Results  The content of WSFS in the aging lens in Herbs Cure group were  decreased significantly compared with Senile Model group（P<0.01）. Co nclusion  The comprehensive application of Radix Polygonum Multiflorum Preparata, Radix Glehniae and Radi

6、x Salviae Miltiorrhizae has an obvious therapeutic effect on delaying the proceeding of cataract.    【Key words】  Radix Polygonum Multiflorum Preparata; Radix Gl ehniae; Radix Salviae Miltiorrhizae; Lens; Oxidative damage; Rats 近年的研究證實(shí)白內(nèi)障的發(fā)生與脂質(zhì)過氧化物有關(guān)，氧自由基誘發(fā)的脂質(zhì)過氧化物是晶狀體衰老的病理基礎(chǔ)，尋找終止

7、或抑制晶狀體脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的方法將有利于延緩和預(yù)防白內(nèi)障的發(fā)生和發(fā)展。水溶性熒光物質(zhì)（water-soluhie fluoresccnt substance，WSFS）是脂質(zhì)過氧化物的降解產(chǎn)物和蛋白質(zhì)的結(jié)合物，其可作為體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的指標(biāo)。我們通過應(yīng)用熒光光譜法對衰老大鼠晶狀體中的WSFS進(jìn)行對比測定，探討中藥制劑（制何首烏、北沙參、紫丹參）抗氧化損傷的作用機(jī)制。 1  材料與方法 1.1  材料 1.1.1  藥物和試劑  中藥制劑由制何首烏、北沙參和紫丹參3味藥組成，將上藥浸泡后，常規(guī)水煎2次，將兩煎液混合濃縮成每mL含生藥1.5 g的水煎液，分裝，

8、密封，冷藏保存。由河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院制劑室制備。D-半乳糖由上海試劑二廠生產(chǎn)，批號：051075-01。 1.1.2  實(shí)驗(yàn)動(dòng)物  采用2個(gè)月齡Wister雄性大鼠30只，體質(zhì)量149152 g，由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,動(dòng)物合格證號：SCXK（冀）2003-1-003。 1.1.3  實(shí)驗(yàn)儀器  采用MPF-4熒光分光光度計(jì)。激發(fā)光波長350 nm，發(fā)射光波長460 nm，掃描速度60 nm/min。 1.2  方法 1.2.1  動(dòng)物的分組與模型制備  將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為3組，每組10只。正常對照組：正常大鼠；衰

9、老模型組：大鼠每日頸背部皮下注射D-半乳糖100 mg/kg，連續(xù)注射40日，形成糖代謝紊亂所致的亞急性衰老模型；中藥治療組：上述造模的同時(shí)，每日2次給予制何首烏、北沙參、紫丹參3味藥制成的口服液（以下簡稱中藥制劑）灌胃，4 mL/次，持續(xù)40日。40日后處死所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，測定觀察指標(biāo)。 1.2.2  實(shí)驗(yàn)方法  各組大鼠于40日后股動(dòng)脈放血處死，迅速取出晶狀體。將取出的晶狀體組織去除血液，濾紙拭干，稱質(zhì)量。加雙蒸餾水0.1 mL，用玻璃棒將晶體攪碎，加入乙醇-乙醛溶劑（31 V/V）4 mL，即刻用旋渦混合器振搖5 min,3 000 r/min離心5 min,棄上清。重

10、復(fù)此步驟2次后，取上清液做熒光強(qiáng)度測定。用硫酸奎寧溶液（0.05 mol，硫酸配成0.1 g/mL）的相對熒光強(qiáng)度，100個(gè)單位為標(biāo)準(zhǔn)，再測定處理后的晶體相對熒光強(qiáng)度。1.3  統(tǒng)計(jì)學(xué)方法  計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，兩兩比較用SNK法。 2  結(jié)果    正常對照組晶狀體中WSFS含量（321.17±8.08）單位，衰老模型組（501.11±6.35）單位，中藥治療組（397.65±8.27）單位。衰老模型組與中藥治療組、正

11、常對照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）,而中藥治療組與正常對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。3  討論    現(xiàn)代研究認(rèn)為，晶體蛋白分為水溶性蛋白和非水溶性蛋白,前者是晶體的結(jié)構(gòu)蛋白，與晶體透明和屈光密切相關(guān)。當(dāng)射線通過晶體時(shí)，可發(fā)生激烈的光化學(xué)、光動(dòng)力學(xué)和光敏反應(yīng)。伴隨這些反應(yīng)過程，則產(chǎn)生大量的活性氧自由基和氫氧自由基。它們具有極強(qiáng)的氧化能力，產(chǎn)生一系列的脂質(zhì)過氧化物，其中丙二醛（MDA）毒性最強(qiáng)，通過與晶體結(jié)構(gòu)蛋白、脂膜、棱酸等物質(zhì)的廣泛交聯(lián)聚合，導(dǎo)致晶體混濁的發(fā)生。在交聯(lián)聚合作用下，可形成脂溶性和水溶性兩類熒光物質(zhì)。水

12、溶性熒光物質(zhì)是水溶性氨基酸結(jié)構(gòu)蛋白和核酸等物質(zhì)與MDA交聚的聚合物。因此，對水溶性熒光物質(zhì)的檢測，可用于估價(jià)組織中脂質(zhì)過氧化水平，對晶狀體氧化損傷研究具有一定意義。    自由基是生物體正常代謝過程中不斷產(chǎn)生的損害自身的毒性產(chǎn)物。其中氧自由基可以引發(fā)脂類發(fā)生過氧化反應(yīng)，但由于正常機(jī)體中存在著天然的自由基清除劑和抗氧化系統(tǒng)，使自由基的產(chǎn)生和清除處于動(dòng)態(tài)平衡，保持機(jī)體不受自由基的損害。眼組織中也存在抗氧化防御系統(tǒng),如超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、過氧化氫酶（CAT）、過氧化物酶等。這些抗氧化物質(zhì)在維持著晶狀體的透明，延緩白內(nèi)障的發(fā)生發(fā)展

13、。如果SOD含量減少，晶狀體內(nèi)一些小分子可溶性蛋白在堆積的超氧化物作用下,其巰基發(fā)生氧化,繼而引起分子間以二硫鍵方式聚合1，使晶狀體蛋白發(fā)生混濁。而MDA是脂質(zhì)過氧化的中間產(chǎn)物，可與晶狀體蛋白的氨基及磷脂中某些基因發(fā)生相互交聯(lián)作用,導(dǎo)致晶狀體光散作用增加,產(chǎn)生混濁。因此，提高機(jī)體抗氧化物質(zhì)（如SOD、GSH-Px）的含量，降低過氧化產(chǎn)物（如MDA）的水平，可以延緩和預(yù)防白內(nèi)障的發(fā)生。經(jīng)研究表明，注射D-半乳糖后衰老模型組大鼠與正常對照組相比晶狀體中SOD、GSH-Px活力明顯降低，MDA含量明顯升高；中藥治療組大鼠晶狀體SOD、GSH-Px活力較衰老模型組明顯升高2。  &

14、#160; 我們所用中藥北沙參為傘形科植物珊瑚菜（Glehnia littoralis Fr.Schmidt et Miq）的干燥根，具有養(yǎng)陰潤肺、益胃生津的功效,主治肺熱燥咳、虛勞久咳等證,并常應(yīng)用在抗衰老和癌癥化療后恢復(fù)體質(zhì)的中藥方劑中3?，F(xiàn)代化學(xué)及藥理研究表明，北沙參的主要有效成分香豆素類（亦稱內(nèi)酯類）具有明顯的抗氧化活性3。袁旭等4研究濱蒿內(nèi)酯平喘機(jī)制之一，即是它可以通過清除氧自由基來控制炎癥的遷移和加重。Kaneko等5通過試驗(yàn)證明七葉內(nèi)酯可保護(hù)細(xì)胞不受亞麻酸氧化物引起的細(xì)胞毒性作用。     紫丹參為唇形科植物云南鼠尾草（Salvia yunnanen

15、sis C.H. Wright）的干燥根及根莖，功效為祛瘀生新、活血調(diào)經(jīng)、清心除煩。它的主要有效成分為總丹參酮類及總酚酸類?？偟⑼惪膳c脂質(zhì)中碳中心自由基（R·）復(fù)合成穩(wěn)定自由基（AH-R·）,從而抑制或阻止脂質(zhì)的氧化6。    何首烏為蓼科植物何首烏（Polygonum multiflorum Thunb.）的塊根，因炮制方法不同，有生何首烏與制何首烏之分。制何首烏是取何首烏干燥塊根，按照蒸法，清蒸至內(nèi)外均呈棕褐色，再切片干燥而成7，是烏須發(fā)、悅顏色、補(bǔ)肝腎、養(yǎng)精血、抗衰老的良藥。其主要成分為蒽醌衍生物、二苯乙烯苷類、磷脂類及Cu、Mn、N

16、a等金屬元素。它能保護(hù)SOD，有抑制腦中單胺氧化酶的活性，調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的功能。有實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，制何首烏可明顯降低老年小鼠血中SOD、CAT、GSH-Px含量，降低腦勻漿、肝勻漿中脂質(zhì)過氧化物（LPO）水平，從而消除自由基對機(jī)體的損傷8。    本實(shí)驗(yàn)通過測定衰老大鼠應(yīng)用中藥制劑后晶狀體中水溶性熒光物質(zhì)的含量，評估晶狀體組織中脂質(zhì)過氧化水平，發(fā)現(xiàn)其含量明顯降低?？梢姡酥兴幹苿λダ暇铙w具有明顯的抗氧化損傷作用。另外，從中醫(yī)學(xué)角度來說，制何首烏、北沙參和紫丹參具有補(bǔ)腎、健脾（胃）、強(qiáng)心之功效。腎為先天之本，脾為后天之本，心為君主之官。本中藥制劑寒溫并用，益陰升陽，

17、甘苦兼施，可以活血通脈，益脾胃而生津，補(bǔ)腎填精，從而達(dá)到祛病、抗衰、明目之目的。 【參考文獻(xiàn)】  1 趙偉康，徐品初，金國琴，等.941方對衰老大鼠晶狀體濁度、自由基代謝及醛糖還原酶活力的影響J.中藥藥理與臨床,1997,13（4）:35-37.2 趙平,白瑜，張玉玲，等中藥對晶狀體氧化損傷的防治作用J時(shí)珍國醫(yī)國藥，2007,18（8）:1823-1824.3 江蘇新醫(yī)學(xué)院. 中藥大辭典M.上海:上海人民出版社,1977:644.4 袁旭,李智,劉洪瑞,等.濱蒿內(nèi)酯對哮喘豚鼠氣道炎癥的抑制及其清除氧自由基作用J.中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2002, 31（6）:404-406.5 Kaneko T, Baba N, Matsuo M. Protection of c