PBS緩沖液的配制方法

1、PBS緩沖液的配制方法PBSg沖液配方不管是免疫組化，還是細(xì)胞培養(yǎng)中，常用到PBSS沖液，下面是我們實驗室的配方，供大家參考。我們實驗室的配方:A液:0.1mol/L磷酸二氫鉀：磷酸二氫鉀(KH2PO4MW136.09)1.361g,加雙蒸水至100ml。B液:0.1mol/L磷酸氫二鈉:酸酸氫二鈉(Na2HPO4.2H2OMW177.99)1.78g,加雙蒸水至100ml。或者酸酸氫二鈉(Na2HPO4.12H2OMW358.14)3.58g,力口雙蒸水至100ml。pH,A液(ml),B液(ml)5.60,9.50,0.255.91,9.00,1.006.24,8.00,2.006.47,

2、7.00,3.006.64,6.00,4.006.81,5.00,5.006.98,4.00,6.007.17,3.00,7.007.38,2.00,8.007.73,1.00,9.008.04,0.50,9.50般免疫組化用PBS只包含Na2HPO4?12H20（酸氫二鈉）NaH2PO4?2H2珊酸二氫鈉)Nacl用于細(xì)胞培養(yǎng)的PBS需含有氯化鉀稱取8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2P04,溶于800ml蒸儲水中，用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4,最后加蒸儲水定容至1L即可0.01MPBSS沖液稱取NaCl8g,KCl0.2g,Na2HPO4?12H20

3、3.63g,KH2PO40.24g溶于900ml雙蒸水中，用鹽酸調(diào)pH值至7.4,加水定容至1L,常溫保存?zhèn)溆?。PBS是最普遍不過的實驗室緩沖液，但其配方各異。以下是我的總結(jié)：母液的配制:0.2MNa2HPO4稱取71.6gNa2HPO4-12H2Q溶于1000ml水0.2MNaH2PO4:稱取31.2gNaH2PO4-2H2Q溶于1000ml水各種濃度PB(pH=7.4)的配制：先配0.2MPB(pH=7.4，100ml):取19ml0.2mol/L的NaH2P0，481ml0.2mol/L的Na2HP04,即可。然后只需將0.2MPB(pH=7.4)按相應(yīng)比例適當(dāng)稀釋即可，如:0.1MPB

4、(PH=7.4):取500ml0.2MPB，加水稀釋至1000ml即可。0.01MPB(PH=7.4):取50ml0.2MPB，加水稀釋至1000ml即可。0.02MPB(PH=7.4):取100ml0.2MPB，加水稀釋至1000ml即可。若需要NaCL的話，加入NaCL至0.9%(g/100ml)即可。另：其它各種另PH值的0.2MPB(100ml)配方：pH0.2MNaH2P04(ml)0.2MNa2HP04(ml)5.793.56.55.89285.990106.087.712.36.185156.281.518.56.377.522.56.473.526.56.568.531.56.

5、662.537.56.756.543.5 6.8 51 49 6.9 45 55 7.0 38 627.133677.228727.323777.419ml81ml7.516847.613877.710.50.57.88.591.57.97938.05.394.7磷酸鹽緩沖液(PhosphateBuffer,PB)，磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉緩沖液配方磷酸鹽緩沖液(PhosphateBuffer,PB)試劑:NaH2PO4?2H2ONa2HPO4?12H2O配制方法：配制時，常先配制0.2mol/L的NaH2PO本口0.2mol/L的Na2HPO4兩者按一定比例混合即成0.2mol/L的磷酸鹽緩沖

6、液(PB),根據(jù)需要可配制不同濃度的PB和PBS(1)0.2mol/L的Na2HPO4稱取Na2HPO4.12H2O31.2g或NaH2PO4?H2O27.6g)口重蒸水至1000ml溶解。(2)0.2mol/L的Na2HPO4稱取NaHPO4.?12H2O71.632談Na2HPO4?7H2O53.6或Na2HPO4?2H2O35.6g加重蒸水至1000ml溶解。(3)0.2mol/LpH7.4的PB的配制：取19ml0.2mol/L的NaH2PO4和81ml0.2mol/L的Na2HPO4?12H2O5分混合即為0.2mol/L的PB(pH約為7.4,7.5)o若pH偏高或偏低，可通過改變

7、二者的比例來加以調(diào)整，室溫保存即可。0.2mol/L磷酸鹽緩沖液(pH5.7,8.0)pH0.2mol/LNaH2PO4(ml)0.2mol/LNa2HPO4(ml)5.793.56.55.892.08.05.990.010.06.087.712.36.185.015.06.281.518.56.377.522.56.473.526.56.568.531.56.662.537.56.756.543.56.851.049.0 6.9 45.0 55.0 7.0 39.0 61.0 7.1 33.0 67.07.228.072.07.323.067.07.419.081.07.516.084.07

8、.613.087.07.710.589.57.88.591.57.97.093.08.05.394.7關(guān)于磷酸緩沖溶液的知識，我在網(wǎng)上搜索了好多帖子，但是還是不能確定正確的答案。現(xiàn)在把他們鏈接過來，希望有高手們參與討論，我會把最終的正確解答整理出來，提供給大家。PBS可以為三種溶液的英文縮寫，分別是1. 磷酸鹽緩沖溶液(phosphatebufferedsolution)、2. 磷酸鹽緩沖鹽水(phosphatebufferedsaline)及3. 磷酸鹽緩沖鈉(phosphatebufferedsodium)，其配制方法不同，pH值不同，發(fā)揮的生物學(xué)作用亦不完全相同。如無特殊說明，生物學(xué)上常

9、用的PBS是中性磷酸鹽緩沖溶液(phosphatebufferedsolution)。無鈣鎂離子磷酸緩沖鹽水(PBS)(0.15Mol/LPH7.2)NaCl8.0gKCl0.2gNa2HPO41.15g(如為Na2HPO4?12H2OU為2.89g)KH2PO40.2g將上述試劑依次溶于1000ml去離子水中，完全溶解后，115?高壓滅菌10min15min,存在4?冰箱中備用。此液可用于配制和稀釋細(xì)胞分散劑以及洗滌細(xì)胞培養(yǎng)物。我們用的都是第二種問題1:磷酸鹽緩沖鹽水(phosphatebufferedsodium)，為什么用第三種或第一種呢:這么多年以來我都以為PBS就是磷酸鹽緩沖溶液，其

10、他兩種說法的英語名稱常見到，不過我一直都以為他們是差不多的東西。不同的漢語翻譯倒是第一次聽說。我們公司用的PBST很多種，抗體組用的中和PBS配方就比較簡單，沒有K譙子，只起至IJ緩沖PH的作用；Na2HPO4+KH2PO4按照不同比例混勻，可以得到不同PH的緩沖液，用于不同目的，這個在分子生物學(xué)中用得很多;用于活細(xì)胞或者細(xì)菌處理的，為了保持滲透壓，會加入其他的溶液，最常見的就是NaCl和KCl調(diào)節(jié)離子濃度。以上是個人的理解，歡迎批評。:問題2:既然抗體組的PBS是起到緩沖PH的作用，那加入80G的NACL乍用是什么，需要平衡滲透壓嗎，還有加入K離子的是不是因為細(xì)胞上NA-K泵的原因啊，血清里

11、面又沒有細(xì)胞，何來NA-K泵一說啊，我覺得之所以這么配，其實就是對血清中緩沖環(huán)境的一種模擬罷了，血清里面又沒有細(xì)胞，何來NA-K泵一說啊，我沒說血清撒。我們用的又沒加K,我是說加了K的的問題3:不加NACL怎么樣啊，多省錢啊在中和磷酸鹽緩沖液中，NaCl的主要作用應(yīng)當(dāng)是保持一定的離子濃度，以維持抗體的活性。在離子濃度過高或過低的情況下，蛋白質(zhì)都會變性，抗體當(dāng)然不例外。ps:哺乳類需用生理鹽水濃度是0.9%。稱取0.9克氯化鈉，溶解在少量蒸餾水中，稀釋到100毫升。鳥類需用的生理鹽水濃度是0.75%。稱取0.75克氯化鈉，溶解后用蒸餾水稀釋到100毫升。兩棲類需用的生理鹽水濃度是0.65%。稱取0.65克氯化鈉，溶解后用蒸餾水稀釋到100毫升。/size/font1)4%聚甲醛固定液：4g多聚甲醛加入雙蒸水50mL中，加熱至60?,攪拌并加入lmol/L氫氧化鈉數(shù)滴，直至溶液變清，冷卻后用o.lmol/LPBS(pH7.4)加至100mL。(2)0.lmol/LPBs緩沖液:SL雙蒸水中溶入40G氯化鈉、1G氯化鉀、7.2G磷酸氫二鈉、1.2G磷酸二氫鉀(3)4%多