生物多肽工藝流程

1、精選文本生物多肽工藝流程一、固相肽合成(1)投料：樹脂加入固相合成儀，加入DCM溶脹，抽干后加入DMF洗滌，洗滌結(jié)束抽干備用。(2)縮合：將氨基酸用一定體積的DMF溶解，加入縮合劑活化后投入固相合成儀，補充DMF至反應(yīng)濃度，攪拌反應(yīng)。(3)脫除保護基：以Kaiser試劑檢測反應(yīng)程度，反應(yīng)結(jié)束后抽干溶劑，DMF洗滌，加入PIP/DMF溶液脫除保護基，以Kaiser試劑檢測反應(yīng)程度，反應(yīng)完畢抽干溶劑，DMF洗滌，準(zhǔn)備加入下一個氨基酸。(4)縮合循環(huán)：按照樹脂序列依次連接氨基酸，按照“脫保護洗滌活化氨基酸投料縮合洗滌”步驟進行縮合循環(huán)操作，按照氨基酸序列完成剩余n個氨基酸的縮合。(5)出料：合成結(jié)束

2、之后用IPA和DCM交叉洗滌樹脂，完成樹脂收縮收縮，出料至不銹鋼托盤。(6)樹脂干燥：樹脂在真空干燥箱中室溫干燥，干燥完畢稱重，計算收率。(7)有機廢液回收，集中處理。(8)清場：操作結(jié)束后操作人員及時清場。二、樹脂裂解(1)配液：按照裂解液成分比例配置裂解液，并提前置冰柜中冷藏保存。(2)投料：肽樹脂加入反應(yīng)釜中，加入預(yù)冷的裂解液，攪拌反應(yīng)。(3)出料：裂解結(jié)束后放出反應(yīng)液，抽濾除去樹脂并以TFA洗滌。(4)濃縮：裂解液轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀室溫濃縮至小體積。(5)析出：濃縮后的反應(yīng)液傾入預(yù)冷的甲基叔丁基醚(簡稱醚)中，攪拌使析出大量固體。(6)離心：濁液離心，并用預(yù)冷的醚洗滌。(7)粗肽干燥：滌完

3、成的粗肽轉(zhuǎn)至真空干燥箱中室溫干燥。(8)有機廢液回收，集中處理。(9)清場：操作結(jié)束后操作人員及時清場。三、多肽HPLC純化(1)溶解：操作人員將粗肽溶解，調(diào)節(jié)PH至工藝規(guī)定范圍。(2)過濾：濾去粗肽溶液中不溶物，過濾ACN和純化水。(3)配制純化液：根據(jù)工藝內(nèi)容配制A相(乙腈)和B相(水)。(4)純化：在制備型液相上進行純化，分別接收流份。(5)檢驗及返工：對制備流份進行檢查，合并合格流份，其他部分根據(jù)需要再次純化。(6)廢棄流動相按有機廢液回收，集中處理。四、濃縮過濾凍干(1)濃縮：合并濾液旋蒸除去有機溶劑，有機廢液回收，集中處理。(2)過濾：濃縮后水相無菌過濾。(3)凍干：濾液置凍干機中，設(shè)定升溫程序凍干。(4)出箱：出料、加內(nèi)包。五、質(zhì)量檢查、入庫工藝流程圖如下所示多肽合成儀樹脂以此三步為一周期按多肽序列重復(fù)直至連接完成樹脂裂解沉淀固相肽合