紅色諾卡氏菌細胞壁骨架對小鼠膀胱癌的治療作用

1、    紅色諾卡氏菌細胞壁骨架對小鼠膀胱癌的治療作用        【摘要】目的探討紅色諾卡氏菌細胞壁骨架(N-CWS)對膀胱腫瘤的治療效果及其機理。方法觀察皮下注射N-CWS對小鼠同系移植膀胱癌的抗癌效應(yīng)和N-CWS對細胞免疫因子的影響。結(jié)果給予N-CWS的小鼠與腫瘤對照組比較腫瘤消退率為41.67%，抑瘤率為96.2%；N-CWS組IL-1、IL-2、IL-6及NK細胞活性和部分T細胞亞群則明顯高于腫瘤對照組，但未能達到正常對照組的水平。結(jié)論N-CWS對膀胱癌具有明顯的抗

2、癌效應(yīng)，其機理為通過提高機體的IL-1、IL-2、IL-6水平和NK的活性及部分T細胞亞群，提高機體的抗腫瘤免疫能力?！娟P(guān)鍵詞】免疫治療紅色諾卡氏菌膀胱癌 The inhibitory effects of N-CWS on bladder carcinoma and the immune mechanism in miceCUI ZHE, LI Liming, QIANG Wanming, et al.Department of Urology, The General Hospital of Tianjin Medical University, Tianjin 300052【Abstra

3、ct】ObjectiveTo evaluate the effect and mechanics of Nocardia rubra cell wall skeleton (N-CWS) in the treatment of bladder carcinoma in mice. MethodsAfter subcutaneous injection of N-CWS, the anti-tumor effects of N-CWS and the influence of N-CWS on IL-1, IL-2, IL-6, T lymphocyte subgroup and the act

4、ivity of NK were studied on transplanted bladder carcinoma (BST739) in syngeneic T739 mice. ResultsThe tumor inhibition rate in the mice treated with N-CWS was 96.2%. The levels of IL-1, IL-2, IL-6 and the activity of NK in the mice treated with N-CWS was higher than those in tumor control mice. Con

5、clusionN-CWS, as an immune promoter, had obvious anti-tumor effects on bladder carcinoma. The mechanism may be that the levels of IL-1, IL-2, IL-6, NK activity and part T lymphocyte subgroups, and human anti-tumor immunological function are increased by N-CWS.【Key words】Nocardia rubraCancer immunoth

6、erapyBladder cancer本實驗旨在觀察紅色諾卡氏菌細胞壁骨架(nocardia rubra cell wall skeleton, N-CWS)小鼠膀胱癌同系移植瘤的抑瘤作用及對荷瘤鼠脾淋巴細胞分泌白細胞介素1、2、6(IL-1、IL-2、IL-6)腫瘤壞死因子(TNF)及自然殺傷細胞(NK細胞)活性和T細胞亞群的影響，并探討其抑瘤機理，結(jié)果報道如下。     材料與方法1. 動物及分組46周齡T739小鼠52只，體重1823 g,雌雄各半。購自中國醫(yī)科院腫瘤研究所動物中心N-CWS組23只，腫瘤對照組19只， 正常小鼠對照組10只。 其中

7、 N-CWS 組和腫瘤對照組各有12只小鼠用于抑瘤率的研究。2. 方法(1) 實驗?zāi)[瘤及荷瘤鼠動物模型制作： 可移植性小鼠膀胱癌瘤株BST739，由南京鐵道醫(yī)學(xué)院贈。皮下接種1014天的荷瘤鼠1只，斷椎處死，無菌條件下剝離瘤塊，取腫瘤邊緣生長旺盛的瘤塊，經(jīng)研磨過篩加冷生理鹽水制成腫瘤細胞懸液，將細胞數(shù)調(diào)至1.6×166個/ml。每只小鼠于腋窩皮下注射腫瘤細胞懸液0.1 ml。(2) N-CWS劑量及給藥途徑： 用生理鹽水溶解N-CWS凍干粉劑(福建省微生物研究所生產(chǎn))，N-CWS實驗組小鼠接種腫瘤后7天及14天分別給藥1次，于接種腫瘤的對側(cè)腋窩皮下注射N-CWS 50 mg 0.15

8、 L,腫瘤對照組小鼠注射等量生理鹽水。(3) 抑瘤效應(yīng)： 接種腫瘤后20天處死小鼠，先取脾臟準備做免疫測定，再剝離腫瘤，稱瘤重。抑瘤率及腫瘤消退率：抑瘤率=(1-實驗組瘤重/對照組瘤重)×100%；腫瘤消退率=實驗組腫瘤消退只數(shù)/實驗組總只數(shù)×100%。(4) NK細胞活性和T細胞亞群及IL-1、IL-2、IL-6、TNF測定 (天津醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗系免疫學(xué)教研室協(xié)助檢測)：NK活性測定： 采用MTT法。殺傷率(%)=1-OD(E+T)/ODT-ODE/ODT×100%。OD(E+T)指效應(yīng)細胞+靶細胞孔OD值；ODE指效應(yīng)細胞對照孔OD值；ODT指靶細胞對照孔O

9、D值。 T淋巴細胞亞群檢測： 采用間接免疫熒光法進行檢測。 IL-2活性測定： HT-2細胞株為IL-2依賴細胞株，將HT-2細胞生長至對數(shù)生長期，將細胞調(diào)整為1×105個/ml,加入96孔細胞培養(yǎng)板，每孔加細胞懸液100 l，分別加入待測樣品及IL-2標準品各100 l,37、體積分數(shù)為5%CO2培養(yǎng)48小時后加入MTT(0.5 g/L)50 l/孔，培養(yǎng)4小時，加入鹽酸異丙醇(1300)，振蕩，酶標儀測其OD值，波長為570 nm,繪出標準曲線，求出樣品IL-2含量。IL-1活性測定時用對IL-1敏感的LBRM33-IA5細胞；IL-6活性測定則用KD83細胞；TNF測定時用L9

10、29細胞株，其余步驟同IL-2活性測定方法。3. 統(tǒng)計學(xué)方法組間差異比較用t檢驗。結(jié)果1. N-CWS對荷瘤鼠的抑瘤效應(yīng)腫瘤對照組12只小鼠接種腫瘤后均見腫瘤生長，無腫瘤消退情況，而N-CWS注射組12只小鼠中7只可見腫瘤生長，另外5只小鼠至實驗結(jié)束解剖檢驗無肉眼可見的瘤結(jié)生長，腫瘤消退率41.6%，抑瘤率為96.2%。全部小鼠于接種腫瘤后20天處死，剝離腫瘤稱重，二者差異具有顯著性(P0.001)。2. 各組小鼠NK細胞活性變化情況N-CWS組的NK活性(44.2±3.9)%明顯高于腫瘤對照組(33.8±3.7)%(P0.001)，表明N-CWS能明顯促進NK殺傷活性。但

11、N-CWS組與正常對照組(58.2±5.2)%比較差異有顯著性(P0.05)。3. 各組小鼠T細胞亞群變化情況各組的CD3T細胞(總T細胞)百分比差異無顯著性(P0.05)。N-CWS組的CD4亞群低于腫瘤對照組(P0.05)；CD8亞群明顯高于腫瘤對照組(P0.001)；CD4/CD8比值則明顯低于腫瘤組(P0.01)，處于正常范圍內(nèi)，見表1。表1各組小鼠T細胞亞群比較(%，<"f0601 (81 bytes)" src="/med/cano/201003/20100322163952204" 13 21>±s)組別例數(shù)

12、CD3(%)CD4(%)CD8(%)CD4/CD8N-CWS組2366.8±2.3*40.26±3.1*24.81±2.7*1.64±0.24*腫瘤對照組1966.7±2.943.0±3.521.6±1.31.99±0.22正常對照組1067.4±2.642.4±3.2624.3±2.71.78±0.31     注： *與腫瘤對照、正常對照組比較P0.05 4. 各組小鼠分泌細胞因子變化情況N-CWS組的IL-1、IL-2和IL-6均

13、明顯高于腫瘤對照組(P0.001)，但仍未達到正常對照組水平(P0.01)。而N-CWS組的TNF明顯低于腫瘤對照組(P0.001)，但比正常對照組高(P0.001)，見表2。表2各組小鼠細胞因子水平比較(%，<"f0601 (81 bytes)" src="/med/cano/201003/20100322163952204" 13 21>±s)組別例數(shù)IL-1IL-2IL-6TNFN-CWS組2333.3±2.7*40.7±3.2*56.2±5.5*21.09±2.5*腫瘤對照組1923.

14、1±2.522.1±2.530.5±6.932.10±5.30正常對照組1036.8±4.534.0±5.037.8±4.410.90±1.80     注： *與腫瘤對照組、正常對照組比較P0.01 討論本研究結(jié)果顯示N-CWS組小鼠IL-1、IL-2、IL-6水平及NK細胞殺傷活性明顯高于腫瘤對照組，而且N-CWS組小鼠腫瘤明顯小于腫瘤對照組，有的甚至未見瘤結(jié)的生長，抑瘤率達96.2%，證明N-CWS可促進抗腫瘤免疫功能而發(fā)揮其抑癌效應(yīng)。注：本課題為天津市21世紀青年科學(xué)基金資助項目(No.941309015)作者單位：300052天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院泌尿外科參考文