醫(yī)療器械無菌和初始污染菌檢驗(yàn)技術(shù)(共104頁).ppt

1、醫(yī)療器械無菌和初始污染菌醫(yī)療器械無菌和初始污染菌檢驗(yàn)技術(shù)檢驗(yàn)技術(shù)國家食品藥品監(jiān)督管理局國家食品藥品監(jiān)督管理局北京醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心北京醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)技術(shù)醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)技術(shù)什么是無菌檢查法？ 用于檢查要求無菌的醫(yī)療器械是否無菌的一種方法。若供試品符合無菌檢查法的規(guī)定，僅表明了供試品在該檢驗(yàn)條件下未發(fā)現(xiàn)微生物污染。 無菌試驗(yàn)的目的：將醫(yī)療器械或其浸提液接種于培養(yǎng)基內(nèi)，以檢驗(yàn)供試品是否有細(xì)菌和真菌污染。醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)GB/T 14233.2 -2005 醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法 第2部分：生物學(xué)試驗(yàn)方法2010年版中國藥典無菌檢查法醫(yī)療器械無菌試驗(yàn)檢查

2、要點(diǎn)指南（2010版） 無菌檢驗(yàn)是無菌醫(yī)療器械產(chǎn)品生產(chǎn)控制過程中的一項(xiàng)重要內(nèi)容。其檢驗(yàn)方法、檢驗(yàn)結(jié)果判定及檢驗(yàn)人員業(yè)務(wù)能力等因素直接影響產(chǎn)品的質(zhì)量和安全。作為無菌醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)，其無菌檢驗(yàn)工作應(yīng)由本企業(yè)獨(dú)立完成。并要求企業(yè)的檢驗(yàn)人員能當(dāng)場操作或口述無菌檢驗(yàn)的過程。 滅菌: 殺滅或除去特定環(huán)境或物品中一切微生物的過程。目前國際上規(guī)定，滅菌過程必須使滅菌物品污染的微生物存活率減少到10-6及以下。 微生物: 必須用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能觀察到的微小生物。微生物具有一定的形態(tài)與結(jié)構(gòu),并能在適宜的環(huán)境中迅速地生長和繁殖,如細(xì)菌、病毒、真菌等。 無菌：是指某一物體或某一環(huán)境中不含有活的微生物。 無

3、菌技術(shù):是指在微生物試驗(yàn)工作中，控制或防止各類微生物的污染及其干擾的一系列操作方法和有關(guān)措施，其中包括無菌環(huán)境設(shè)施、無菌試驗(yàn)器材以及無菌操作。 無菌操作:是指在無菌環(huán)境條件下，在對無菌制品或無菌器械進(jìn)行檢驗(yàn)的過程中，能防止微生物污染與干擾的一種常規(guī)操作方法。 培養(yǎng)條件：用于促進(jìn)微生物發(fā)育、生長和繁殖的生長培養(yǎng)基和培養(yǎng)方式的組合。 抑細(xì)菌/抑霉菌試驗(yàn)：用選定的微生物來演示某些物質(zhì)的存在能夠抑制這些微生物的繁殖。 培養(yǎng)基: 是人工配制的生物營養(yǎng)物質(zhì)，即用人工的方法將多種物質(zhì)按各種微生物生長繁殖的需要配成的一種混合營養(yǎng)物。 促生長試驗(yàn)：用于證明生長培養(yǎng)基能夠支持微生物 生長的技術(shù)操作。 假陰性：實(shí)際

4、陽性的無菌試驗(yàn)結(jié)果被變成了陰性。 假陽性：實(shí)際陰性的無菌試驗(yàn)結(jié)果被變成了陽性。 需氧菌：在代謝中，有氧條件下才能生存的微生物。 厭氧菌：在代謝中，沒有氧的條件下才能生存的微生物。 無菌保證水平（SAL）:滅菌后產(chǎn)品上存在單個(gè)活微生物的概率。 細(xì)菌：為單細(xì)胞微生物,其細(xì)胞分化不完善，無完整細(xì)胞核及核膜、核仁，直徑一般為1m 10m。 真菌：為多細(xì)胞或單細(xì)胞微生物，其細(xì)胞分化完善，有細(xì)胞核和各種細(xì)胞器，故易在體外生長繁殖，直徑一般為10m 100m。醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)所需設(shè)備 超凈工作臺(tái)超凈工作臺(tái)醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)所需設(shè)備恒溫培養(yǎng)箱（至少恒溫培養(yǎng)箱（至少2 2臺(tái)）臺(tái)）醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)所需設(shè)備壓力蒸汽滅

5、菌器壓力蒸汽滅菌器醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)所需設(shè)備電熱干燥箱電熱干燥箱醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)所需設(shè)備集菌儀集菌儀醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)所需設(shè)備生物安全柜生物安全柜:（從試從試驗(yàn)安全性考慮，建驗(yàn)安全性考慮，建議陽性對照試驗(yàn)使議陽性對照試驗(yàn)使用生物安全柜）用生物安全柜）醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)所需設(shè)備電子天平電子天平醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)所需設(shè)備光學(xué)顯微鏡光學(xué)顯微鏡醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)所需設(shè)備過濾裝置（無油真空泵、濾杯、濾頭、濾瓶、微孔濾膜、夾子）過濾裝置（無油真空泵、濾杯、濾頭、濾瓶、微孔濾膜、夾子） 無菌檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度10 000級下的局部潔凈度100級的單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行，其全過程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止微生

6、物污染，防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。單向流空氣區(qū)、工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定期按醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法的現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度驗(yàn)證。隔離系統(tǒng)按相關(guān)的要求進(jìn)行驗(yàn)證，其內(nèi)部環(huán)境的潔凈度須符合無菌檢查的要求。 無菌檢查人員必須具備微生物專業(yè)知識，并經(jīng)過無菌技術(shù)的培訓(xùn)。還應(yīng)該具有高度的責(zé)任心和嚴(yán)謹(jǐn)細(xì)致的工作作風(fēng)。環(huán)境及人員要求環(huán)境及人員要求 無菌檢查法 環(huán)境要求隔離系統(tǒng)隔離系統(tǒng)無菌檢查法 環(huán)境要求 無無菌室在消毒處理完畢后，應(yīng)檢查空氣中的菌落數(shù)。菌室在消毒處理完畢后，應(yīng)檢查空氣中的菌落數(shù)。 無菌檢查法 環(huán)境要求TSA瓊脂瓊脂平皿平皿在在3030 3535培培養(yǎng)養(yǎng)

7、48h48h證明無菌證明無菌取取3 3只只放放無菌操作無菌操作臺(tái)或超臺(tái)或超凈凈工作臺(tái)平工作臺(tái)平均位置打開上蓋，均位置打開上蓋，暴露暴露30min30min后蓋好后蓋好3 3只培養(yǎng)皿上只培養(yǎng)皿上生長的菌落生長的菌落數(shù)平均應(yīng)不數(shù)平均應(yīng)不超過超過1 1個(gè)個(gè)無菌試驗(yàn)過程中無菌試驗(yàn)過程中也也應(yīng)檢查空氣中的菌落數(shù)，方法應(yīng)檢查空氣中的菌落數(shù)，方法要求要求同上同上無菌檢查法 試驗(yàn)前準(zhǔn)備 器具滅菌：與供試液接觸的所有器具應(yīng)采用可靠方法滅菌，置壓力蒸汽滅菌器內(nèi)12130min，或置電熱干燥箱內(nèi)1602h。 培養(yǎng)基：可按藥典中的處方制備培養(yǎng)基，亦可使用按該處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基。應(yīng)采用驗(yàn)證合格的滅菌程序滅菌

8、。制備好的培養(yǎng)基應(yīng)保存在2 25，一般在3周內(nèi)使用。無菌檢查法 試驗(yàn)前準(zhǔn)備 配制培養(yǎng)基所需器具配制培養(yǎng)基所需器具: : 無菌檢查法 試驗(yàn)前準(zhǔn)備常用器具與稀釋液常用器具與稀釋液: : 無菌檢查法 試驗(yàn)前準(zhǔn)備培養(yǎng)基培養(yǎng)基: : 無菌檢查法 試驗(yàn)前準(zhǔn)備 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基: 在供試品接種前, 培養(yǎng)基氧化層的高度不得超過培養(yǎng)基深度的1/5，否則,須經(jīng)100水浴加熱至粉紅色消失（不超過20分鐘）迅速冷卻,只限加熱一次，并應(yīng)防止被污染。其裝量與容器高度的比例應(yīng)符合培養(yǎng)結(jié)束后培養(yǎng)基氧化層（粉紅色）不超過培養(yǎng)基深度的 1/2。30 35培養(yǎng)14天。 需氧菌需氧菌生長生長厭氧菌厭氧菌生長生長無菌檢查法 試驗(yàn)前

9、準(zhǔn)備100水浴水浴加熱加熱無菌檢查法 試驗(yàn)前準(zhǔn)備培養(yǎng)基培養(yǎng)基: : 無菌檢查法 試驗(yàn)前準(zhǔn)備 改良馬丁培養(yǎng)基：改良馬丁培養(yǎng)基： 23 23 2828培養(yǎng)培養(yǎng)1414天天無菌檢查法 試驗(yàn)前準(zhǔn)備培養(yǎng)基培養(yǎng)基: : 無菌檢查用的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良馬丁培養(yǎng)基等應(yīng)符合培養(yǎng)基的無菌性檢查及靈敏度檢查的要求。 無菌性檢查 每批培養(yǎng)基隨機(jī)不少于5支（瓶），培養(yǎng)14天，應(yīng)無菌生長。培養(yǎng)基的適用性檢查靈敏度檢查： 菌種 培養(yǎng)基靈敏度檢查所用的菌株傳代次數(shù)不得超過5代（從菌種保存中心獲得的冷凍干燥菌種為第0代），并采用適宜的菌種保藏技術(shù)，以保證試驗(yàn)菌株的生物學(xué)特性。 金黃色葡萄球菌（Staphylococcu

10、s aureus)CMCC（B） 26 003 銅綠假單胞菌 (Pseudomonas aeruginosa) CMCC（B） 10 104 枯草芽孢桿菌 (Bacillus subtilis ) CMCC（B） 63 501 生孢梭菌 (Clostridiumsporogenes) CMCC(B) 64 941 白色念珠菌 (Candidaalbicans) CMCC(F) 98 001 黑曲霉 (Aspergillus niger ) CMCC(F) 98 003培養(yǎng)基的適用性檢查菌液制備： 接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，接

11、種生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，3035培養(yǎng)18小時(shí)24小時(shí)；接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基中或改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基上，（2328）培養(yǎng)（2448）小時(shí)，上述培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1mL 含菌數(shù)小于100cfu（菌落形成單位）的菌懸液。培養(yǎng)基的適用性檢查 菌液制備：接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基上，（2328）培養(yǎng)（57）天，加入（35）mL含0.05（v/v）聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，用適宜的方法吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)，用含0.05（v/v）聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1mL 含孢子數(shù)小于1

12、00cfu的孢子懸液。 菌懸液在室溫下放置應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使用，若保存在（28）可在24小時(shí)內(nèi)使用。黑曲霉孢子懸液可保存在（28），在驗(yàn)證過的貯存期內(nèi)使用 。 培養(yǎng)基的適用性檢查 平板劃線法-斜線法：用接種環(huán)以無菌操作挑取菌懸液一環(huán)，先在平板培養(yǎng)基的一邊作第一次平行劃線（3-4）條，再轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿70角，并將接種環(huán)上剩余物燒掉，待冷卻后通過第一次劃線部分作第二次平行劃線，再用同法通過第二次平行劃線部分作第三次平行劃線和第四次平行劃線。培養(yǎng)基的適用性檢查 平板劃線法-曲線法：將挑取有樣品的接種環(huán)在平板培養(yǎng)基上作連續(xù)劃線。 培養(yǎng)基的適用性檢查血瓊脂平板上的金黃色葡萄球菌血瓊脂平板上的金黃色葡萄球菌（大的

13、金黃色菌落）（大的金黃色菌落）在劃線過程中，細(xì)胞逐漸分散，培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。在劃線過程中，細(xì)胞逐漸分散，培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。 定期移植法定期移植法: :亦稱傳代培養(yǎng)保藏法，指將菌種接種于適亦稱傳代培養(yǎng)保藏法，指將菌種接種于適宜的斜面培養(yǎng)基上，最適條件下培養(yǎng)，完成培養(yǎng)于宜的斜面培養(yǎng)基上，最適條件下培養(yǎng)，完成培養(yǎng)于(46)進(jìn)行保存并間隔一定時(shí)間進(jìn)行移植培養(yǎng)的一種短期菌種保藏進(jìn)行保存并間隔一定時(shí)間進(jìn)行移植培養(yǎng)的一種短期菌種保藏方法。方法。 操作步驟：操作步驟： 斜面制備斜面制備 接種接種 培養(yǎng)培養(yǎng) 保藏保藏培養(yǎng)基的適用性檢查v 接接 種種培養(yǎng)基應(yīng)符合無菌性檢查及靈敏度檢查的要求。檢查可在供試品

14、的無菌檢查前或與供試品的無菌檢查同時(shí)進(jìn)行。靈敏度檢查所用菌種靈敏度檢查所用菌種（藥典（藥典20102010版規(guī)定）版規(guī)定）金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌銅綠假單胞菌枯草芽孢桿菌枯草芽孢桿菌生孢梭菌生孢梭菌白色念珠菌白色念珠菌黑曲霉黑曲霉分別接種各菌分別接種各菌種新鮮培養(yǎng)物種新鮮培養(yǎng)物至相應(yīng)培養(yǎng)基至相應(yīng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，將培中培養(yǎng)，將培養(yǎng)物用養(yǎng)物用0.9%0.9%無無菌氯化鈉溶液菌氯化鈉溶液制成菌懸液制成菌懸液（濃度小于（濃度小于100cfu/mL100cfu/mL）硫乙醇酸鹽流體硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（培養(yǎng)基（12mL12mL）9 9支：支：分別接種分別接種小于小于100cfu100cfu

15、的金的金葡、銅綠、枯草、葡、銅綠、枯草、生孢各生孢各2 2支，另支，另一支不接種做空一支不接種做空白對照，培養(yǎng)白對照，培養(yǎng)3 3天天改良馬丁培養(yǎng)基改良馬丁培養(yǎng)基（9mL） 5 5支支：分別接種小于分別接種小于100cfu100cfu的白念、的白念、黑曲霉各黑曲霉各2 2支，支，另另1 1支不接種做支不接種做空白對照，培養(yǎng)空白對照，培養(yǎng)5 5天天逐日觀察結(jié)果：逐日觀察結(jié)果：空白對照管應(yīng)空白對照管應(yīng)無菌生長，若無菌生長，若加菌的培養(yǎng)基加菌的培養(yǎng)基管均生長良好，管均生長良好，則靈敏度符合則靈敏度符合規(guī)定。規(guī)定。 培養(yǎng)基的適用性檢查 對起始樣品進(jìn)行連續(xù)對起始樣品進(jìn)行連續(xù)1010倍稀釋，將高稀釋倍數(shù)的樣

16、品與冷卻倍稀釋，將高稀釋倍數(shù)的樣品與冷卻至適當(dāng)溫度的溶化瓊脂培養(yǎng)基倒入無菌平皿后混合均勻，培養(yǎng)后至適當(dāng)溫度的溶化瓊脂培養(yǎng)基倒入無菌平皿后混合均勻，培養(yǎng)后獲得單菌落。培養(yǎng)基獲得單菌落。培養(yǎng)基表面菌落為圓形表面菌落為圓形，而培養(yǎng)基，而培養(yǎng)基內(nèi)部菌落呈豆?fàn)顑?nèi)部菌落呈豆?fàn)罨蛲哥R狀?；蛲哥R狀。 培養(yǎng)基的適用性檢查 無菌檢驗(yàn)有兩種方法：直接接種法、薄膜過濾法 直接接種法:將供試品或其有代表性的各部分直接投放入培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)。 薄膜過濾法:含抗菌、抑菌成分的供試品會(huì)抑制某些微生物的生長繁殖,所以用常規(guī)方法檢查會(huì)出現(xiàn)假陰性的結(jié)果, 但并不等于產(chǎn)品中沒有微生物甚至是致病性微生物。所以采用薄膜過濾法來去除供試品中可

17、溶的抑菌性成分,把細(xì)菌等微生物截留在濾膜上,然后再經(jīng)過處理培養(yǎng)使所含微生物生長繁殖, 從而使微生物檢出。方法驗(yàn)證試驗(yàn) 當(dāng)建立產(chǎn)品的無菌檢查法時(shí)，應(yīng)進(jìn)行方法的驗(yàn)證，以證明所采用的方法適合于該產(chǎn)品的無菌檢查。若產(chǎn)品的組分或原檢驗(yàn)條件發(fā)生改變時(shí)，檢查方法應(yīng)重新驗(yàn)證。 驗(yàn)證時(shí)，按“供試品的無菌檢查”的規(guī)定及下列要求進(jìn)行操作。對每一試驗(yàn)菌應(yīng)逐一進(jìn)行驗(yàn)證。方法驗(yàn)證試驗(yàn) 菌種及菌液制備 ：除大腸埃希菌（Escherichia coli）CMCC(B) 4 4102外，金黃色葡萄球菌 、 枯草芽孢桿菌 、 生孢梭菌、 白色念珠菌、黑曲霉同培養(yǎng)基靈敏度檢查。大腸埃希菌的菌液制備同金黃色葡萄球菌。 方法驗(yàn)證試驗(yàn)與

18、靈敏度檢驗(yàn)所有菌種區(qū)別：大腸埃希菌代替銅綠假單胞菌。方法驗(yàn)證試驗(yàn) 取每種培養(yǎng)基規(guī)定接種的供試品總量按薄膜過濾法過濾，沖洗，在最后一次的沖洗液中加入小于100cfu的試驗(yàn)菌，過濾。取出濾膜接種至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基或改良馬丁培養(yǎng)基中，或?qū)⑴囵B(yǎng)基加至濾筒內(nèi)。另取一裝有同體積培養(yǎng)基的容器，加入等量試驗(yàn)菌，作為對照。按規(guī)定溫度培養(yǎng)3天 5天。各試驗(yàn)菌同法操作。方法驗(yàn)證試驗(yàn)：薄膜過濾法方法驗(yàn)證所用菌種方法驗(yàn)證所用菌種（藥典（藥典20102010版規(guī)定）版規(guī)定）金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌大腸埃希大腸埃希菌菌枯草芽孢桿菌枯草芽孢桿菌生孢梭菌生孢梭菌白色念珠菌白色念珠菌黑曲霉黑曲霉分別接種各分別接種各菌種新

19、鮮培菌種新鮮培養(yǎng)物至相應(yīng)養(yǎng)物至相應(yīng)培養(yǎng)基中培培養(yǎng)基中培養(yǎng)，將培養(yǎng)養(yǎng)，將培養(yǎng)物用物用0.9%0.9%無無菌氯化鈉溶菌氯化鈉溶液制成菌懸液制成菌懸液（濃度小液（濃度小于于100cfu/mL100cfu/mL）硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基8 8支：支：分別接種小于分別接種小于100cfu100cfu的金的金葡、大腸、枯草、生孢各葡、大腸、枯草、生孢各2 2支，其中支，其中1 1管接入每支培養(yǎng)管接入每支培養(yǎng)基規(guī)定的供試品接種量，基規(guī)定的供試品接種量，另另1 1管作為對照，培養(yǎng)管作為對照，培養(yǎng)3 3天。天。改良馬丁培養(yǎng)基改良馬丁培養(yǎng)基4支支：分：分別接種小于別接種小于100cfu100cfu

20、的白念、的白念、黑曲霉各黑曲霉各2 2支，其中支，其中1 1管接管接入每支培養(yǎng)基規(guī)定的供試入每支培養(yǎng)基規(guī)定的供試品接種量，另品接種量，另1 1管作為對管作為對照，培養(yǎng)照，培養(yǎng)5 5天。天。方法驗(yàn)證試驗(yàn)：直接接種法方法驗(yàn)證試驗(yàn)：直接接種法 與對照管比較，如含供試品各容器中的試驗(yàn)菌均生長良好，則說明供試品的該檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下無抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不計(jì)，照此檢查法和檢查條件進(jìn)行供試品的無菌檢查。如含供試品的任一容器中微生物生長微弱、緩慢或不生長，則說明供試品的該檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下有抑菌作用，可采用增加沖洗量，或增加培養(yǎng)基的用量，或使用中和劑或更換濾膜品種等方法，消除供試品的抑菌作用，并

21、重新進(jìn)行方法驗(yàn)證。 方法驗(yàn)證試驗(yàn)也可與供試品的無菌檢查同時(shí)進(jìn)行。 方法驗(yàn)證試驗(yàn)：結(jié)果判斷 供試品數(shù)量的選擇： 檢驗(yàn)數(shù)量是指一次試驗(yàn)所用供試品最小包裝容器的數(shù)量。一般情況下，供試品無菌檢查若采用薄膜過濾法，應(yīng)增加1/2的最小檢驗(yàn)數(shù)量作陽性對照用；若采用直接接種法，應(yīng)增加供試品1 支（或瓶）作陽性對照用。供試品的無菌檢查 檢驗(yàn)量是指一次試驗(yàn)所用的供試品總量（g或ml）。若每支（瓶）供試品的裝量按規(guī)定足夠接種兩份培養(yǎng)基，則應(yīng)分別接種硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基。采用薄膜過濾法時(shí)，檢驗(yàn)量應(yīng)不少于直接接種法的總接種量，只要供試品特性允許，應(yīng)將所有容器內(nèi)的全部內(nèi)容物過濾。供試品的無菌檢查 供試品包

22、裝須完好無損，尤其是只有一層包裝的樣品。進(jìn)入無菌檢驗(yàn)室的樣品若有兩層（或兩層以上）包裝的，需將外包裝在傳遞窗（或緩沖間）拆除后，傳入實(shí)驗(yàn)室。 操作人員準(zhǔn)備：帶口罩、帽子、穿專用無菌服、鞋進(jìn)入無菌室。供試品的無菌檢查 供試品的無菌檢查 在100級超凈臺(tái)內(nèi)，酒精燈火焰周圍，以無菌操作法將規(guī)定量的供試品分別接種至含硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（不少于15ml/管）和改良馬丁培養(yǎng)基（不少于10ml/管）的容器中。 正確的無菌操作，既不能引入外來菌污染培養(yǎng)物造成假陽性，也要注意接觸供試品的試驗(yàn)用具溫度不可過高以免將可能存在的菌燙死。陰性對照（目的是驗(yàn)證試驗(yàn)是否存在污染） ：供試品無菌檢查時(shí)，應(yīng)取相應(yīng)溶劑和稀釋液

23、同法操作，作為陰性對照。陰性對照不得有菌生長。陽性對照（目的是驗(yàn)證試驗(yàn)可靠性，防止假陰性）：應(yīng)根據(jù)供試品特性選擇陽性對照菌；無抑菌作用供試品以金黃色葡萄球菌為陽性對照菌。陽性對照試驗(yàn)的菌液制備同方法驗(yàn)證試驗(yàn)，加菌量小于100cfu，供試品用量同供試品無菌檢查每份培養(yǎng)基接種的樣品量。陽性對照管培養(yǎng)(48 72)小時(shí)應(yīng)生長良好。供試品的無菌檢查無菌檢查法-直接接種法供試品數(shù)量：同一批號3個(gè) 11個(gè)單位供試品 優(yōu)先采用將供試品或其有代表性的各部分直接投放入培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)。如：棉簽、導(dǎo)尿包中的導(dǎo)尿管、注射器中的液體等無菌檢查法 直接接種法不適宜直接投放的可制備供試液：浸提介質(zhì)：9g/L無菌氯化鈉溶液（生

24、理鹽水）、0.1%蛋白胨水溶液、pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液 、根據(jù)供試品的特性，可選用其他驗(yàn)證過的適宜的溶液作為稀釋液、沖洗液。管類器具： 按管內(nèi)表面積每10cm2流過管內(nèi)腔1mL浸提介質(zhì)，流量約為10mL/min。容器類器具： 已有液體的直接取液；空容器每10cm2加入浸提介質(zhì)1mL，振搖數(shù)次。實(shí)體類器具：表面積每10cm2加入浸提介質(zhì)1mL，振搖數(shù)次。 供試液制備應(yīng)按無菌操作法進(jìn)行，在制備后2h內(nèi)使用。無菌檢查法 直接接種法 直接接種法：每個(gè)供試品按規(guī)定量分別接種至各含硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基的容器中。除另有規(guī)定外，每個(gè)容器中培養(yǎng)基的用量應(yīng)符合接種的供試品體積不得大于培養(yǎng)基

25、體積的10%，同時(shí)，硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基每管裝量不少于15mL，改良馬丁培養(yǎng)基每管裝量不少于10mL。 無菌檢查法-薄膜過濾法 2010年版中國藥典規(guī)定:只要供試品性狀允許，應(yīng)采用薄膜過濾法。供試品無菌檢查所采用的檢查方法和檢驗(yàn)條件應(yīng)與驗(yàn)證的方法相同。 在蠕動(dòng)泵的作用下，被測產(chǎn)品通過裝有帶空氣過濾器的針頭及無菌管路直接從樣品容器中進(jìn)入濾筒中，免去了通常膜轉(zhuǎn)移過程中易產(chǎn)生的污染。 無菌檢查法中薄膜過濾法所用的濾膜孔徑應(yīng)不大于0.45m，直徑約為50mm。水溶液供試品水溶液供試品取規(guī)定量的供試液，直接過濾，或混合至含適量取規(guī)定量的供試液，直接過濾，或混合至含適量稀釋液的無菌容器內(nèi)，混勻，立即過濾。

26、稀釋液的無菌容器內(nèi)，混勻，立即過濾。供試液經(jīng)薄膜過濾后，若需要用沖洗液沖洗濾膜，供試液經(jīng)薄膜過濾后，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量為每張濾膜每次沖洗量為100ml100ml，總沖洗量不得超過，總沖洗量不得超過1000mL1000mL，以免濾膜上微生物受損傷。，以免濾膜上微生物受損傷。無菌檢查法-薄膜過濾法沖洗后分別將沖洗后分別將100mL100mL硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良馬丁培養(yǎng)基加入相應(yīng)的濾筒內(nèi)，培養(yǎng)。馬丁培養(yǎng)基加入相應(yīng)的濾筒內(nèi)，培養(yǎng)。無菌檢查法 培養(yǎng)及觀察 上述含培養(yǎng)基的容器按規(guī)定的溫度培養(yǎng)14天。培養(yǎng)期間應(yīng)逐日觀察并記錄是否有菌生長。如在加入供試品

27、后或在培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，培養(yǎng)14天后，不能從外觀上判斷有無微生物生長，可取該培養(yǎng)液適量轉(zhuǎn)種至同種新鮮培養(yǎng)基中，細(xì)菌培養(yǎng)2天、真菌培養(yǎng)3天，觀察接種的同種新鮮培養(yǎng)基是否再出現(xiàn)渾濁；或取培養(yǎng)液涂片，染色，鏡檢，判斷是否有菌。 若供試品管均澄清，或雖顯渾濁但經(jīng)確證無菌生長，判供試品符合規(guī)定；若供試品管中任何一管顯渾濁并確證有菌生長，判供試品不符合規(guī)定，除非能充分證明試驗(yàn)結(jié)果無效，即生長的微生物非供試品所含。 試驗(yàn)若經(jīng)確認(rèn)無效，應(yīng)重試。重試時(shí)，重新取同量供試品，依法檢查，若無菌生長，判供試品符合規(guī)定；若有菌生長，判供試品不符合規(guī)定。 陽性對照管應(yīng)生長良好，陰性對照不得有菌生長。否則，試驗(yàn)無效

28、。無菌檢查法 結(jié)果判斷 當(dāng)符合下列至少一個(gè)條件時(shí)，方可判試驗(yàn)結(jié)當(dāng)符合下列至少一個(gè)條件時(shí)，方可判試驗(yàn)結(jié)果無效：果無效： （1 1）無菌檢查試驗(yàn)所用的設(shè)備及環(huán)境的微）無菌檢查試驗(yàn)所用的設(shè)備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結(jié)果不符合無菌檢查法的要求；生物監(jiān)控結(jié)果不符合無菌檢查法的要求； （2 2）回顧無菌試驗(yàn)過程，發(fā)現(xiàn)有可能引起）回顧無菌試驗(yàn)過程，發(fā)現(xiàn)有可能引起微生物污染的因素。微生物污染的因素。 （3 3）供試品管中生長的微生物經(jīng)鑒定后，）供試品管中生長的微生物經(jīng)鑒定后，確證是因無菌試驗(yàn)中所使用的物品和（或）無菌確證是因無菌試驗(yàn)中所使用的物品和（或）無菌操作技術(shù)不當(dāng)引起的。操作技術(shù)不當(dāng)引起的。無菌檢查法 結(jié)果判

29、斷 試驗(yàn)若經(jīng)確認(rèn)無效，應(yīng)重試。重試時(shí)，重新取同量供試品，依法檢查，若無菌生長，判供試品符合規(guī)定；若有菌生長，判供試品不符合規(guī)定。 無菌檢查法 結(jié)果判斷醫(yī)療器械無菌試驗(yàn)檢查要點(diǎn)指南（2010版） 由于無菌檢驗(yàn)時(shí)間跨度較長，因此過程的記錄應(yīng)能夠完整體現(xiàn)試驗(yàn)的全過程，對于在試驗(yàn)過程中出現(xiàn)的各種情況，均應(yīng)在記錄中客觀反映。直接接種法試驗(yàn)結(jié)果 薄膜過濾法試驗(yàn)結(jié)果 無菌檢查法 判定試驗(yàn)報(bào)告中宜給出下列信息：試驗(yàn)報(bào)告中宜給出下列信息： 供試品名稱；供試品名稱； 生產(chǎn)批號和（或）滅菌批號；生產(chǎn)批號和（或）滅菌批號； 供試液制備方法；供試液制備方法； 接種方式；接種方式； 每日觀察結(jié)果每日觀察結(jié)果（包括陰、陽性

30、對照）（包括陰、陽性對照）； 結(jié)果判定結(jié)果判定試驗(yàn)報(bào)告（1 1）培養(yǎng)基配制記錄）培養(yǎng)基配制記錄（2 2）滅菌器、天平等儀器的使用記錄）滅菌器、天平等儀器的使用記錄（3 3）培養(yǎng)基無菌性檢查、靈敏度檢查記錄）培養(yǎng)基無菌性檢查、靈敏度檢查記錄（4 4）菌種購買、傳代、使用記錄）菌種購買、傳代、使用記錄（5 5）方法學(xué)驗(yàn)證記錄）方法學(xué)驗(yàn)證記錄（6 6）無菌試驗(yàn)記錄）無菌試驗(yàn)記錄（7 7）滅菌物品制作）滅菌物品制作（8 8）廢棄物處理記錄）廢棄物處理記錄（9 9）潔凈間監(jiān)測記錄）潔凈間監(jiān)測記錄醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)應(yīng)有記錄醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)應(yīng)有記錄 一、適用范圍一、適用范圍 二、檢查內(nèi)容二、檢查內(nèi)容1.選擇的

31、無菌檢驗(yàn)方法選擇的無菌檢驗(yàn)方法 2.檢驗(yàn)人員檢驗(yàn)人員 資質(zhì)資質(zhì)3.現(xiàn)場察看無菌實(shí)驗(yàn)室環(huán)境現(xiàn)場察看無菌實(shí)驗(yàn)室環(huán)境4.設(shè)備和器具設(shè)備和器具 5.管理制度、操作規(guī)程等相關(guān)技術(shù)文件管理制度、操作規(guī)程等相關(guān)技術(shù)文件 6. 查閱試驗(yàn)記錄查閱試驗(yàn)記錄 三、其它應(yīng)注意的問題三、其它應(yīng)注意的問題 醫(yī)療器械無菌試驗(yàn)檢查要點(diǎn)指南（醫(yī)療器械無菌試驗(yàn)檢查要點(diǎn)指南（20102010版）版） （1 1）培養(yǎng)基制備）培養(yǎng)基制備 （2 2）供試品的無菌檢查）供試品的無菌檢查 （3 3）培養(yǎng)及觀察）培養(yǎng)及觀察 （4 4）結(jié)果判斷）結(jié)果判斷（1 1）樣品記錄）樣品記錄 （2 2）滅菌物品制作記錄）滅菌物品制作記錄 （3 3）原始試

32、驗(yàn)記錄）原始試驗(yàn)記錄 （4 4）廢棄物處理記錄）廢棄物處理記錄醫(yī)療器械無菌試驗(yàn)檢查要點(diǎn)指南（2010版）其它應(yīng)注意的問題還包括： 生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)確保樣品具有代表性：試驗(yàn)樣品應(yīng)從常規(guī)產(chǎn)品中能夠代表加工過程和條件的批中選擇。選擇樣品是隨機(jī)的。試驗(yàn)樣品的選擇和處理技術(shù)應(yīng)明確，以免對樣品上所含的微生物的數(shù)量和種類造成污染和改變。試驗(yàn)樣品可以選擇制造過程中的不合格產(chǎn)品，它們應(yīng)該代表這個(gè)生產(chǎn)批的加工程序和條件。用于試驗(yàn)的不合格產(chǎn)品應(yīng)不會(huì)影響無菌測試的有效性。醫(yī)療器械無菌試驗(yàn)檢查要點(diǎn)指南（2010版）其它應(yīng)注意的問題還包括： 生產(chǎn)企業(yè)對于供試品的選取、轉(zhuǎn)移過程要采取防止污染措施，確保試驗(yàn)結(jié)果的可靠性。選取制作供

33、試品的試驗(yàn)樣品時(shí)，樣品包裝須完好無損，尤其是只有一層包裝的樣品。進(jìn)入無菌檢驗(yàn)室的樣品若有兩層（或兩層以上）包裝的，需將外包裝在傳遞窗（或緩沖間）拆除后，傳入實(shí)驗(yàn)室。 無菌試驗(yàn)要點(diǎn)無菌試驗(yàn)要點(diǎn)器具滅菌：所有器具高壓滅菌12130min，硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基: 接種前, 培養(yǎng)基氧化層的高度不得超過培養(yǎng)基深度的1/5，30 35培養(yǎng)14天。改良馬丁培養(yǎng)基： 23 28培養(yǎng)14天。兩種培養(yǎng)基要符合無菌性檢查及靈敏度檢查的要求；無菌試驗(yàn)要點(diǎn)無菌試驗(yàn)要點(diǎn) 供試品包裝完好。培養(yǎng)基、供試品消毒后帶入無菌室。采用驗(yàn)證過檢查方法（直接接種法或薄膜過濾法）在潔凈度10 000級下的局部100級區(qū)域內(nèi)，以無菌操作法將

34、規(guī)定量的供試品或供試液分別接種至兩種培養(yǎng)基中，同時(shí)做陰性對照和陽性對照；按規(guī)定的溫度培養(yǎng)14天。逐日觀察并記錄。如在培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，培養(yǎng)14天后，不能從外觀上判斷有無微生物生長，可取該培養(yǎng)液適量轉(zhuǎn)種至同種新鮮培養(yǎng)基中，細(xì)菌培養(yǎng)2天、真菌培養(yǎng)3天，觀察接種的同種新鮮培養(yǎng)基是否再出現(xiàn)渾濁；或取培養(yǎng)液涂片，染色，鏡檢，判斷是否有菌。無菌試驗(yàn)要點(diǎn)無菌試驗(yàn)要點(diǎn) 陽性對照管應(yīng)生長良好，陰性對照不得有菌生長。供試品管均應(yīng)澄清，或雖顯渾濁但經(jīng)確證無菌生長，判供試品符合規(guī)定；若供試品管中任何一管顯渾濁并確證有菌生長，判供試品不符合規(guī)定，除非能充分證明試驗(yàn)結(jié)果無效，即生長的微生物非供試品所含。 出具試

35、驗(yàn)結(jié)果后，所有培養(yǎng)物121高壓滅菌30分鐘處理。 做好相應(yīng)試驗(yàn)記錄。實(shí)例：薄膜過濾法實(shí)例：薄膜過濾法考察沖洗量考察沖洗量 試驗(yàn)菌： (1)生孢梭菌64941 (2)銅綠假單胞菌10104 (3)枯草芽孢桿菌 63501 (4) 金黃色葡萄球菌26003總?cè)恿浚?5g / 每株試驗(yàn)菌1.1.紅霉素對紅霉素對生孢梭菌生孢梭菌生長無抑制作用生長無抑制作用. .2.2.紅霉素對紅霉素對銅綠假單孢菌銅綠假單孢菌生長無抑制生長無抑制作用作用. .1.紅霉素對枯草芽孢桿菌有抑制作用.每筒加樣量5g(相當(dāng)于紅霉素25mg)。2. 沖洗液體積400ml,枯草芽孢桿菌48小時(shí)后可見微弱生長,72小時(shí)生長良好。3

36、. 在該檢驗(yàn)條件下,沖洗400ml,三天內(nèi)可檢出枯草芽孢桿菌.1.1.紅霉素對金黃色葡萄球菌有抑制紅霉素對金黃色葡萄球菌有抑制作用。作用。2.2.在該檢驗(yàn)條件下在該檢驗(yàn)條件下, ,沖洗沖洗700ml,700ml,殘留殘留的紅霉素不影響金黃色葡萄球菌的紅霉素不影響金黃色葡萄球菌的生長。的生長。醫(yī)療器械初始污染菌檢驗(yàn)技術(shù)醫(yī)療器械初始污染菌檢驗(yàn)技術(shù)GB 15979-2002 一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)初始污染菌初始污染菌的檢驗(yàn) 初始污染菌：產(chǎn)品消毒、滅菌前的細(xì)菌總數(shù)，可判明檢品受細(xì)菌污染的程度以及生產(chǎn)單位所用的原料、工具設(shè)備、工藝流程、生產(chǎn)人員的衛(wèi)生狀況，是對檢品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評價(jià)的綜合依據(jù)。 GB 1

37、5979-2002 一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn) 初始污染菌：產(chǎn)品消毒、滅菌前的細(xì)菌總數(shù)，可判明檢品受細(xì)菌污染的程度以及生產(chǎn)單位所用的原料、工具設(shè)備、工藝流程、生產(chǎn)人員的衛(wèi)生狀況，是對檢品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評價(jià)的綜合依據(jù)。 微生物限度檢查法：檢查非規(guī)定滅菌產(chǎn)品受微生物污染程度的方法。 消毒與滅菌的區(qū)別:消毒是殺滅清除傳播媒介上病原微生物。但不能殺死芽孢等全部微生物。所以消毒是不徹底的，不能代替滅菌。初始污染菌初始污染菌的檢驗(yàn) 初始污染菌初始污染菌的檢驗(yàn) 部分一次性使用衛(wèi)生產(chǎn)品微生物學(xué)指標(biāo)要求部分一次性使用衛(wèi)生產(chǎn)品微生物學(xué)指標(biāo)要求產(chǎn)品種類產(chǎn)品種類微生物指標(biāo)微生物指標(biāo)初始污染菌初始污染菌cfu/g細(xì)菌菌落總

38、數(shù)細(xì)菌菌落總數(shù)cfu/g或或cfu/mL大腸菌群大腸菌群致病性致病性化膿菌化膿菌真菌菌落總數(shù)真菌菌落總數(shù)cfu/g或或cfu/mL口罩口罩 普通級普通級 消毒級消毒級10 00020020不得檢出不得檢出不得檢出不得檢出不得檢出不得檢出不得檢出不得檢出100不得檢出不得檢出尿布等尿布等 普通級普通級 消毒級消毒級10 00020020不得檢出不得檢出不得檢出不得檢出不得檢出不得檢出不得檢出不得檢出100不得檢出不得檢出注：致病性化膿菌指綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌與溶血性鏈球菌。注：致病性化膿菌指綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌與溶血性鏈球菌。初始污染菌初始污染菌的檢驗(yàn)準(zhǔn)備：平皿洗凈、烘干；牛皮紙包好滅菌

39、 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基配制、滅菌。步驟：采樣，供試液制備，培養(yǎng)，菌落計(jì)數(shù) 在100級凈化條件下用無菌方法打開至少3個(gè)包裝； 從每個(gè)包裝中取樣，準(zhǔn)確稱取10g1g樣品；剪碎后加入200mL無菌生理鹽水中，充分混勻。 液體產(chǎn)品用原液直接做樣液。初始污染菌初始污染菌的檢驗(yàn)取上清液共取上清液共接種接種5 5個(gè)平皿，個(gè)平皿，每個(gè)平皿中每個(gè)平皿中加入加入1mL1mL供試供試液液用冷卻至用冷卻至4545左右左右的熔化的營養(yǎng)瓊脂的熔化的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（培養(yǎng)基（15 15 2020）mLmL，倒入每個(gè)平皿，倒入每個(gè)平皿內(nèi)混合均勻。內(nèi)混合均勻。待瓊脂凝固后翻待瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平皿置轉(zhuǎn)平皿置35 35 2 2 培養(yǎng)培養(yǎng)48

40、h48h后，計(jì)算平后，計(jì)算平板上的菌落數(shù)。板上的菌落數(shù)。稀釋度稀釋度 5細(xì)菌菌落總數(shù)細(xì)菌菌落總數(shù)=5塊平板上的細(xì)菌菌落總數(shù)塊平板上的細(xì)菌菌落總數(shù)（cfu/g或或cfu/mL）如：取如：取10g10g樣品入樣品入200mL200mL生理鹽水中，則稀釋生理鹽水中，則稀釋2020倍倍當(dāng)菌落數(shù)在當(dāng)菌落數(shù)在100100以內(nèi)，按實(shí)有數(shù)報(bào)告，大于以內(nèi)，按實(shí)有數(shù)報(bào)告，大于100100時(shí)采用二位有效數(shù)字時(shí)采用二位有效數(shù)字。初始污染菌初始污染菌的檢驗(yàn)計(jì)數(shù)方法：計(jì)數(shù)方法：將平板置菌落計(jì)數(shù)器或從平板的背面直接以肉眼將平板置菌落計(jì)數(shù)器或從平板的背面直接以肉眼用標(biāo)記筆點(diǎn)計(jì)，以投射光襯以暗色背景，仔細(xì)觀察，計(jì)數(shù)。用標(biāo)記筆點(diǎn)

41、計(jì)，以投射光襯以暗色背景，仔細(xì)觀察，計(jì)數(shù)。必要時(shí)可以借助于放大鏡、菌落計(jì)數(shù)器。必要時(shí)可以借助于放大鏡、菌落計(jì)數(shù)器。菌落特征：菌落特征： 形態(tài)特征：常為白色、灰白色或灰色，亦有淡褐色、形態(tài)特征：常為白色、灰白色或灰色，亦有淡褐色、淡黃色。淡黃色。 邊緣整齊或不整齊，表面有光滑、粗糙，皺褶、突起邊緣整齊或不整齊，表面有光滑、粗糙，皺褶、突起或扁平?；虮馄健?大小差異很大。大小差異很大。初始污染菌初始污染菌的檢驗(yàn) 如果樣品菌落總數(shù)超過本標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定，應(yīng)將留存的復(fù)檢樣品依前法復(fù)測2次， 2次結(jié)果平均值都達(dá)到本標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定，則判定被檢樣品合格；其中有任何一次結(jié)果平均值超過本標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定，則判定被檢樣品不合格。

42、大腸菌群檢測方法樣液樣液5mL接種至接種至50mL乳糖膽鹽發(fā)酵乳糖膽鹽發(fā)酵管，管， 置置35 2 培養(yǎng)培養(yǎng)24h，如不產(chǎn)酸，如不產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則大腸菌群產(chǎn)氣，則大腸菌群為陰性。為陰性。如產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則劃如產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則劃線接種伊紅美藍(lán)瓊線接種伊紅美藍(lán)瓊脂平板，置脂平板，置35 2 培養(yǎng)培養(yǎng)1824h，觀，觀察平板上菌落形態(tài)。察平板上菌落形態(tài)。取疑似菌落作革蘭氏取疑似菌落作革蘭氏染色鏡檢，同時(shí)接種染色鏡檢，同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管，置乳糖發(fā)酵管，置35 2 培養(yǎng)培養(yǎng)24h，觀，觀察產(chǎn)氣情況。察產(chǎn)氣情況。 凡乳糖膽鹽發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣，乳糖發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣，凡乳糖膽鹽發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣，乳糖發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣，在伊紅美藍(lán)平板上有典型大腸菌落，革蘭氏染色為陰性無在伊紅美藍(lán)平板上有典型大腸菌落，革蘭氏染色為陰性無芽孢桿菌，可報(bào)告被檢樣品檢出大腸桿菌。芽孢桿菌，可報(bào)告被檢樣品檢出大腸桿菌。 乳糖膽鹽培養(yǎng)基中用的是溴甲酚紫作指示劑，該指示劑中性時(shí)呈藍(lán)紫色，酸性時(shí)呈黃色，大腸桿菌能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，因此培養(yǎng)基變成黃色和產(chǎn)