杭州市區(qū)公共場所空調(diào)冷卻水中嗜肺軍團菌的調(diào)查和分析

1、中國衛(wèi)生檢驗雜志2006年3月第16卷第3期 C h i nese Jou rnal ofH ea l th Laboratory Technol ogy , M ar 2006; Vol 16 No 3281論著杭州市區(qū)公共場所空調(diào)冷卻水中嗜肺軍團菌的調(diào)查和分析斯國靜, 俞 驊, 王一泓, 吳小輝, 楊介鉆(杭州市疾病預(yù)防控制中心, 浙江杭州 310006摘要 目的:了解杭州市公共場所大型中央空調(diào)冷卻水中嗜肺軍團菌的污染情況及主要血清型。方法:于2005年9月10月, 采集杭州市13家商場和賓館、2家醫(yī)院和1家福利中心等中央空調(diào)冷卻塔冷卻水29件, 應(yīng)用GV PC 、BCYE 、BCY 培養(yǎng)

2、基進行嗜肺軍團菌分離培養(yǎng)、進行血清分型及種特異性PCR 鑒定。結(jié)果:冷卻塔冷卻水中嗜肺軍團菌的污染率達(dá)到44 83%(13/29,共分離到嗜肺軍團菌16株(有2份水樣中同時檢出二個血清型以上菌株, 其中一份有L p1、Lp2、Lp3三個血清型, 另一份有L p3及未定型二個血清型 , 血清型以LP 1為主達(dá)37 50%(6/16。結(jié)論:杭州市公共場所大型中央空調(diào)冷卻水中嗜肺軍團菌檢出率較高, 對市民健康構(gòu)成了威脅。關(guān)鍵詞 公共場所; 嗜肺軍團菌; 冷卻塔水; 調(diào)查中圖分類號 R 126 4 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1004-8685(2006 03-0281-02Investigation

3、and analysis of Leg ionella pneu m ophila in water of air conditioner in H ang zhou ! s public placesS i Guo jing , Yu H ua , W ang Y i hong , W u X i ao hui , Yang J ie zuan(H ang z hou P rov i nc i a l Center for D i sease Contro l and Prevention , H angzhou 310006, Ch i naAbstract O bjective :To

4、i nvestigate the proble m o f Legionella pneu m op hila i n conta m i nated w ate r of centra l a ir conditioners located in public p l aces o fH ang zhou , w ater of coo li ng to w ers i n th i rteen ma rketplaces , t wo hosp itals and one w a lfare home co l lected fro m Sep to O ct 2005 M ethods

5、:The sa m ples were cu lti vated by GVPC , BCYE and BC Y m ed i a and i dentif y i ng by PCR and serum typ i ng R esults :T he pos itive rate w as 44 83%(13/29and si x teen L egionella pneu m oph ila we re separa ted(t wo wa ter sa m p l es conta i n i ng different sero t ypes , one w ith Lp1, Lp2,

6、L p3, t he other w it h L p3and t wo un j udgeable type. Conclusion :Lp1is the pr i m a ry Legionell a pneu m ophil a type w it h 37 5%(6/16 D ue to such a h i gh positi v e rate , t he resu lts turned out t hat Legio nella p neumop hila has becom e a dange rous fac t o r to hea lth o f c itizen i n

7、 H ang zhou K ey words Pub li c places ; Leg i onella pneu m oph ila ; Cooli ng tow er w ater ; Investigati on 隨著國民經(jīng)濟的迅猛發(fā)展和人們生活水平的日益提高, 目前杭州市包括商場、賓館、飯店及醫(yī)院等在內(nèi)的大量公共場所均已廣泛使用各種空調(diào)系統(tǒng), 然而此為城市文明病#軍團病的出現(xiàn)提供了條件。對1999年2000年杭州市部分人群的血清調(diào)查發(fā)現(xiàn)人群中已可能存在著軍團菌感染1。大部分軍團病是由嗜肺軍團菌血清群1、4和6引起的。我們于2005年9月10月上旬采集杭州市部分商場、賓館、醫(yī)院和福利中

8、心等空調(diào)冷卻水進行嗜肺軍團菌檢測, 以了解嗜肺軍團菌的存在情況及其血清群?，F(xiàn)將結(jié)果報告如下。1 材料與方法1 1 監(jiān)測點監(jiān)測點為杭州市區(qū)16家集中送氣公共場所的中央空調(diào)冷卻塔, 其中:商場和賓館13家、醫(yī)院2家、福利中心1家。1 2 采樣時間及數(shù)量采樣時間為2005年9月10月上旬, 每一監(jiān)測點采集冷作者簡介 斯國靜(1956-, 女, 副主任技師, 主要從事衛(wèi)生細(xì)菌檢驗及研究。卻水500m , l 并立即送檢。共計16家單位采集冷卻水29件。1 3 材料GVPC 、BC Y E 、BC Y 成品平板培養(yǎng)基購自上海祥和公司, 嗜肺軍團菌種特異性PCR 檢測試劑盒由上海寶生科技發(fā)展有限公司生產(chǎn),

9、 嗜肺軍團菌診斷分型血清由日本生研生產(chǎn)(包括1-6群 。1 4 檢驗方法1 4 1 分離培養(yǎng) 方法參照衛(wèi)生部%公共場所集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)衛(wèi)生規(guī)范&(2004 。取500m l 空調(diào)冷卻水先用1000r /min 離心3m i n , 其上清液約400m l 用孔徑0 45 m 濾膜抽濾集菌后將濾膜剪碎并用5m l 原水樣洗脫, 然后取1m l 洗脫液入無菌試管加等量的1 2m o l/L酸緩沖液混勻靜置15m i n , 再用0 1NKOH 調(diào)p H 至7 0, 吸0 2m l 接種到GVPC 瓊脂平板, 于36和5%CO 2環(huán)境中培養(yǎng)414d , 每天觀察平板上菌落生長情況, 發(fā)現(xiàn)可疑

10、菌落及時挑取轉(zhuǎn)種BCYE 、BCY 及血瓊脂平板進行生長鑒定試驗, 對在BCYE 平板上生長在BCY 及血平板上不長的菌株進行塗片染色鏡檢, 同時做氧化酶及觸酶試驗。 2 (:刮E 菌落282中國衛(wèi)生檢驗雜志2006年3月第16卷第3期 Ch i n ese Journ al ofH ealth Laborat ory Tec hno l ogy , M ar 2006; V ol 16 No 3到EP 管中(管中預(yù)先加400 l 蒸餾水, 12000r/mi n 離心5m i n 棄上清, 每管再加100 l 蒸餾水振蕩混勻, 100煮沸15m in , 然后經(jīng)10000r /min 離心2

11、m i n , 取上清液為DNA 模板。(2 引物由生產(chǎn)試劑公司提供。(3 PCR 擴增:循環(huán)條件設(shè)置:預(yù)變性945m i n , 然后按9430s 、5530s 、7260s 循環(huán)30次, 最后72延長至3m i n 。(4 瓊脂糖凝膠電泳。(5 結(jié)果:450bp 長度條帶為嗜肺軍團菌。1 4 3 血清學(xué)鑒定 用嗜肺軍團菌診斷血清L p1-Lp6作玻片凝集試驗進行分型鑒定。2 結(jié)果在16家單位大型中央空調(diào)系統(tǒng)的29份冷卻塔水中, 受嗜肺軍團菌污染的有13份冷卻塔水, 陽性率達(dá)44 83%(13/29(見表1 。在此13份冷卻塔水中共檢出16株嗜肺軍團菌(同一水樣中檢出二個血清型以上混合污染的

12、水樣有二份, 其中一份水樣檢出Lp1、L p2、L p3三個血清型, 另一份水樣中檢出L p3及一株未定型菌株二個血清型 (見表1, 其氧化酶均為陰性, 觸酶試驗均為陽性, 嗜肺軍團菌種特異性PCR 陽性(部分軍團菌PCR 鑒定圖譜見圖1 。從血清學(xué)分型情況看, 16株嗜肺軍團菌的血清型分別為L p1型6株, 占檢出數(shù)的37 5%(6/16,L p2型1株占檢出數(shù)的6 25%(1/16,L p3型4株占25 00%(4/16, 未能分型(L p7-L p14型 占31 25%(5/16 。同一水樣檢出二個以上血清型的比例為總檢出數(shù)的15 38%(2/13。表1 16家單位冷卻塔水嗜肺軍團菌的檢

13、出情況嗜肺軍團菌單位類型冷卻塔數(shù)冷卻塔水樣數(shù)(份4194229檢出份數(shù)263213檢出率(%Lp1商場賓館醫(yī)院福利中心合計21121165031 587510044 83-2226Lp2-1-1Lp3-22-4Lp4-0Lp5-0Lp6-0 未分型23-5各血清群株數(shù)家醫(yī)院采集的4件樣品就有3件檢測到嗜肺軍團菌, 其陽性率更是高達(dá)75 00%(3/4。醫(yī)院人群流動量大, 且病人的抵抗力都比較差, 屬于易感人群, 一旦發(fā)生軍團菌污染暴發(fā)其后果不可設(shè)想。要有效控制軍團菌病的發(fā)生, 杜絕暴發(fā), 作者認(rèn)為應(yīng)加強圖1 部分嗜肺軍團菌PCR 鑒定結(jié)果A N:待鑒定軍團菌菌株; O :在BCY 和BCYER

14、 瓊脂平板上都生長的菌株; R :陽性對照; Q:霍亂弧菌作為陰性對照; P :蒸餾水對照以下幾方面的管理措施:(應(yīng)加強對集中送氣的中央空調(diào)系統(tǒng)監(jiān)督管理, 定期冷卻塔水進行檢測, 掌握水體衛(wèi)生狀況, 定期按時對冷卻塔進行清洗消毒, 更換水質(zhì), 除去適應(yīng)軍團菌生長的環(huán)境, 阻斷其賴以生長繁殖的途經(jīng)。對空調(diào)冷卻系統(tǒng)的水路和氣路在設(shè)計上也提出了更高及更為合理要求, 一則應(yīng)盡可能避免這二路間的交叉污染, 另一則應(yīng)考虙能有效進行消毒處理。+加強對軍團菌有關(guān)知識的宣傳, 提高人們對軍團菌病有關(guān)知識的了解, 提高防范意識。參考文獻(xiàn)1鄧晶, 陳康凱, 黃誠孝, 等 杭州市人群嗜肺軍團菌感染狀況調(diào)查J 浙江預(yù)防

15、醫(yī)學(xué), 2003, 15(6:1-22馮文如, 馬林, 劉漢湘, 等 廣州地區(qū)水體環(huán)境軍團菌污染分布調(diào)查J 公共衛(wèi)生, 2005, 5(1:147-1483朱佩云, 陳悅, 沈健民, 等 上海部分地鐵站空調(diào)冷卻塔團菌污染狀況調(diào)查J 環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學(xué), 2002, 19(5:313-3144江思, 馬林, 馮文如, 等 醫(yī)院軍團菌污染狀況及其防制對策J疾病監(jiān)測, 2005, 20(7:347-3495王中民, 楊國芬, 譚崇陽, 等 軍團菌雙重PCR 檢測方法的建立及應(yīng)用J 中國衛(wèi)生檢驗雜志, 2005, 15(3:297-299(收稿日期:2006-01-043 討論本次調(diào)查的16家單位采集的29份冷卻塔水嗜肺軍團菌污染的情況顯示, 受嗜肺軍團菌污染的水塔達(dá)到13份, 其陽性率高達(dá)44 83%。其高檢出率與國內(nèi)其他城市的調(diào)查情況2類似。從血清分型鑒定結(jié)果來看, 以L p1-L p3型為主要菌型占到總數(shù)的68 75%(11/16,同一水樣檢出二個以上菌型混合感染的樣本占到15 38%(2/16, 不同型別的軍團菌其致病性不同已得到了認(rèn)同5。軍團菌普遍存在于空調(diào)冷卻水中, 其最