高效液相色譜法測定奶制品中三聚氰胺

1、高效液相色譜法測定奶制品中三聚氰胺上海天美公司應(yīng)用實(shí)驗(yàn)室1 前言三聚氰胺簡稱三胺，是一種重要的氮雜環(huán)有機(jī)化工原料。因三聚氰胺分子中含有大量氮元素，一些不法廠商通過添加這種化工原料，提高產(chǎn)品中蛋白質(zhì)含量。目前食品中三聚氰胺的檢測方法，包括LC，LC/MS和GC/MS 國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 22388-2008原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法。其中采用HPLC法測定三聚氰胺，成本低，不需要衍生，簡便易行。本文采用天美公司LC2000，按照國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 22388-2008對牛奶中三聚氰胺進(jìn)行檢測。該方法穩(wěn)定可靠，檢測范圍廣泛。2 儀器和試劑天美公司LC2000梯度系統(tǒng)：LC2130輸液泵（日立原裝

2、進(jìn)口），配梯度單元和在線脫氣裝置；LC2030紫外檢測器；手動進(jìn)樣器7725i，色譜工作站T2000P（注：LC2000等度系統(tǒng)即可滿足要求）；離心機(jī)CT14RD（轉(zhuǎn)頭6*50ml）；固相萃取小柱和萃取裝置；氮吹儀；三聚氰胺對照品購自sigma公司，樣品液態(tài)奶購買于超市，實(shí)驗(yàn)中用到的其他試劑如三氯乙酸、氫氧化鈉、檸檬酸和辛烷磺酸鈉均為分析級。3 色譜條件色譜柱：Venusil ASB-C18 4.6×250mm （也可選用C8柱）緩沖液：10mM檸檬酸, 10mM辛烷磺酸鈉流動相：緩沖溶液:乙腈=90：10進(jìn)樣量：20uL流 速：1.0mL/min柱 溫：404 樣品制備按照GB/T

3、 22388-2008中3.4節(jié)進(jìn)行：稱取2g（精確到0.01g）試樣（液態(tài)純牛奶）于50mL具塞塑料離心管中，加入15ml 1%三氯乙酸提取液和5mL乙腈，充分混勻，超聲提取20min，再振蕩提取10min后，以4000r/min離心10min。上清液經(jīng)三氯乙酸溶液潤濕的濾紙過濾后，用三氯乙酸溶液定容至25mL，移取5mL濾液，過混合型陽離子固相萃取小柱(PCX)。洗脫液于50下氮?dú)獯蹈?，殘留物?0%甲醇的水溶液定容至1mL。5、結(jié)果和討論5.1 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)稱取三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品適量，流動相溶解，按照上述色譜條件，進(jìn)入色譜儀分析。三聚氰胺的標(biāo)準(zhǔn)品的柱效為8094，保留時(shí)間分別為4.75min。 5.2 樣品測試按照上述樣品處理方法和色譜條件，對樣品進(jìn)行測定，得到色譜圖如圖1所示。平行測試4次，計(jì)算平均峰面積，并以外標(biāo)法對三聚氰胺的含量進(jìn)行計(jì)算。結(jié)果得出樣品中含三聚氰胺1.029mg/L。 圖1 牛奶中三聚氰胺測試典型譜圖（n=4）5.3 加標(biāo)回收率計(jì)算稱取的2g試樣（液態(tài)奶蒙牛純牛奶），加標(biāo)入三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液三聚氰胺（樣品中濃度為2mg/kg）。計(jì)算得出三聚氰胺的回收率為105.38%。5.4 空白實(shí)驗(yàn)不稱取樣品，按照上述的條件進(jìn)行處理和色譜分析，結(jié)果如圖2所示。在三聚氰胺出峰的位置沒有干擾。圖2 空白色譜圖6 結(jié)論采用HPLC法對牛奶中三聚氰胺進(jìn)行分析，